प्रत्यक्ष RT-qPCR किट
विवरण
प्रत्यक्ष RT-qPCR किटले छुट्टै प्याकेज गरिएको RT-qPCR बफर र उच्च कुशल इन्जाइम प्रदान गर्दछ।मिश्रण (Taq、M-MLV、RI), यसलाई ब्याक-एन्ड किट र प्रणाली बनाउनको लागि सुविधाजनक बनाउँदैसमायोजन, सरल प्रमाणीकरण भित्र।
निर्दिष्टीकरणहरू
500T, 50,000T
किट अवयवहरू
किट सामग्री (20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
५०० टि | ५०,००० टि | |
प्रत्यक्ष इन्जाइम मिश्रण | ५०० μL×१ | ५० एमएल×१ |
2× प्रत्यक्ष RT-qPCR बफर | १ एमएल×५ | ५०० एमएल×१ |
निर्देशन | 1 | 1 |
सञ्चालन चरणहरू
अभिकर्मक तयारी गर्नु अघि, किटमा भएका सबै अभिकर्मकहरूलाई कोठाको तापक्रममा पगाल्नुपर्छ र बिस्तारै मिसाउनु पर्छ।
A: तयारी गर्नुहोस् of टेम्प्लेट र अभिकर्मक
1. तयार गरिएको आरएनए टेम्प्लेट तयार गर्नुहोस् (आरएनए टेम्प्लेट निकाल्न र शुद्ध गर्न फोरेजीन टोटल आरएनए आइसोलेसन किट श्रृंखला किट प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ) वा नमूना क्र्याकिंग उत्पादन (यो फोरेजीन लाइसिस प्रणाली प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ), विशिष्ट प्राइमरहरू (१० μM) र अन्य सान्दर्भिक उपभोग्य वस्तुहरू, उपकरण।
2. 2× प्रत्यक्ष RT-qPCR बफर, RNase-मुक्त ddH2O र 20× ROX सन्दर्भ डाई राख्नुहोस् (यदि यो's आवश्यक छ) बरफको साथ बक्समा, यी प्राकृतिक रूपमा पग्लिन्छ, र बिस्तारै मिसाइन्छ।
B: तयारी गर्नुहोस् of RT-qPCR प्रणाली
तालिका 1 : तयारी गर्नुहोस् of RT-qPCR sप्रणाली
कम्पोनेन्ट | भोल्युम | अन्तिम एकाग्रता |
2× प्रत्यक्ष RT-qPCR बफर | १० μL | १× |
प्रत्यक्ष इन्जाइम मिश्रण | १μL | |
फर्वार्ड प्राइमर (१० μM) | ०.८ μL | ५०-९०० एनएम |
उल्टो प्राइमर (१० μM) | ०.८ μL | ५०-९०० एनएम |
प्रोब(४ μM) | १μL | 200nM |
टेम्प्लेट(RNA वा Lysate) | X μL | |
20×ROX सन्दर्भ डाई | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
कुल मात्रा | २०μL |
C: सेट द RT-qPCR प्रतिक्रिया कार्यक्रम
तालिका 2 : RT-qPCR प्रतिक्रियाon कार्यक्रम सेटिङ (को लागी उदाहरण: दुई-कदम विधि)
चरण | तापक्रम | समय | साइकलहरू | सामग्री | |
1 | ५० ℃ | १५ मिनेट | 1* | 1 | उल्टो ट्रान्सक्रिप्शन |
2 | 95 ℃ | १ मिनेट | 1 | प्रि-डिनेचरेशन | |
3 | 95 ℃ | १० सेकेन्ड | ४०-४५ | विकृतीकरण | |
६० ℃ | ३० सेकेन्ड २* | अन्ननल/विस्तार |
भण्डारण र शेल्फ जीवन
- किट -20 मा भण्डारण गर्नुपर्छ± 5℃।वैधता अवधि 12 महिना हो।
- दोहोरिएको फ्रिज-थाउ साइकल (<5 चक्र) लाई बेवास्ता गर्नुहोस्।