आधारभूत आणविक जीवविज्ञान सर्तहरूको व्याख्या
1. cDNA र cccDNA: cDNA mRNA बाट रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज द्वारा संश्लेषित डबल-स्ट्र्यान्ड DNA हो;cccDNA क्रोमोजोमबाट मुक्त प्लाज्मिड डबल-स्ट्र्यान्डेड बन्द गोलाकार डीएनए हो।
2. मानक फोल्डिंग एकाइ: प्रोटीन माध्यमिक संरचना एकाइ α-हेलिक्स र β-पानाले विभिन्न जडान गर्ने पोलिपेप्टाइडहरू मार्फत विशेष ज्यामितीय व्यवस्थाको साथ संरचनात्मक ब्लकहरू बनाउन सक्छ।यस प्रकारको निर्धारित तहलाई सामान्यतया सुपर माध्यमिक संरचना भनिन्छ।लगभग सबै तृतीय संरचनाहरू यी तह प्रकारहरू, र तिनीहरूको संयुक्त प्रकारहरूद्वारा वर्णन गर्न सकिन्छ, त्यसैले तिनीहरूलाई मानक तह एकाइहरू पनि भनिन्छ।
3. CAP: cyclic adenosine monophosphate (cAMP) रिसेप्टर प्रोटीन CRP (cAMP रिसेप्टर प्रोटीन), CAMP र CRP को संयोजन पछि बनेको जटिललाई सक्रिय प्रोटीन CAP (cAMP सक्रिय प्रोटीन) भनिन्छ।
4. पालिन्ड्रोमिक अनुक्रम: DNA खण्डको एक खण्डको उल्टो पूरक अनुक्रम, प्रायः एक प्रतिबन्ध इन्जाइम साइट।
5. micRNA: पूरक हस्तक्षेप गर्ने RNA वा antisense RNA, जुन mRNA अनुक्रमको पूरक हो र mRNA को अनुवादलाई रोक्न सक्छ।
6. Ribozyme: उत्प्रेरक गतिविधि भएको RNA, जसले RNA को विभाजन प्रक्रियामा स्वत: उत्प्रेरक भूमिका खेल्छ।
७. मोटिफ: प्रोटिन अणुहरूको स्थानिय संरचनामा समान त्रि-आयामी आकार र टोपोलोजी भएका केही स्थानीय क्षेत्रहरू छन्।
8. सिग्नल पेप्टाइड: प्रोटीन संश्लेषणको क्रममा एन-टर्मिनसमा 15-36 एमिनो एसिड अवशेषहरू भएको पेप्टाइड, जसले प्रोटीनको ट्रान्समेम्ब्रेनलाई मार्गदर्शन गर्दछ।
9. Attenuator: अपरेटर क्षेत्र र ट्रान्सक्रिप्शन समाप्त गर्ने संरचनात्मक जीन बीचको न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम।
10. जादुई स्पट: जब ब्याक्टेरिया बढ्छ र एमिनो एसिडको पूर्ण कमीको सामना गर्दछ, ब्याक्टेरियाले सबै जीनहरूको अभिव्यक्ति रोक्नको लागि आपतकालीन प्रतिक्रिया उत्पादन गर्नेछ।यो आपतकालीन प्रतिक्रिया उत्पन्न गर्ने संकेतहरू guanosine tetraphosphate (ppGpp) र guanosine pentaphosphate (pppGpp) हुन्।PpGpp र pppGpp को भूमिका केवल एक वा केहि ओपेरनहरू होइन, तर तिनीहरूको ठूलो संख्यालाई असर गर्छ, त्यसैले तिनीहरूलाई सुपर-नियामक वा जादुई स्पटहरू भनिन्छ।
11. अपस्ट्रीम प्रवर्द्धक तत्व: प्रवर्द्धकको गतिविधिमा नियामक भूमिका खेल्ने DNA अनुक्रमलाई बुझाउँछ, जस्तै -10 क्षेत्रमा TATA, -35 क्षेत्रमा TGACA, एन्हान्सरहरू, र एटेन्युएटरहरू।
12. DNA प्रोब: ज्ञात अनुक्रम भएको DNA को लेबल गरिएको खण्ड, जुन अज्ञात अनुक्रमहरू र स्क्रिन लक्ष्य जीनहरू पत्ता लगाउन व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ।
13. SD अनुक्रम: यो ribosome र mRNA को बाध्यकारी अनुक्रम हो, जसले अनुवादलाई नियमन गर्छ।
14. मोनोक्लोनल एन्टिबडी: एक एन्टिबडी जसले एकल एन्टिजेनिक निर्धारक विरुद्ध मात्र कार्य गर्दछ।
15. Cosmid: यो एक कृत्रिम रूपमा निर्मित exogenous DNA भेक्टर हो जसले COS क्षेत्रहरूलाई फेजको दुवै छेउमा राख्छ र प्लाज्मिडसँग जोडिएको हुन्छ।
16. नीलो-सेतो स्पट स्क्रिनिङ: LacZ जीन (इन्कोडिङ β-galactosidase), इन्जाइमले क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) लाई विघटन गरेर नीलो उत्पादन गर्न सक्छ, जसले गर्दा स्ट्रेनलाई नीलो बनाउँछ।जब एक्सोजेनस डीएनए सम्मिलित गरिन्छ, LacZ जीनलाई व्यक्त गर्न सकिँदैन, र तनाव सेतो हुन्छ, ताकि पुन: संयोजक ब्याक्टेरिया स्क्रिन गर्न।यसलाई निलो-सेतो स्क्रिनिङ भनिन्छ।
17. Cis-अभिनय तत्व: DNA मा आधारहरूको एक विशिष्ट अनुक्रम जसले जीन अभिव्यक्तिलाई विनियमित गर्दछ।
18. Klenow इन्जाइम: DNA पोलिमरेज I को ठूलो टुक्रा, 5' 3' exonuclease गतिविधि DNA पोलिमरेज I holoenzyme बाट हटाइएको बाहेक।
19. Anchored PCR: एक छेउमा ज्ञात अनुक्रम संग रुचि को DNA को विस्तार गर्न को लागी प्रयोग गरिन्छ।अज्ञात अनुक्रमको एक छेउमा एक पाली-डीजी टेल थपियो, र त्यसपछि पोली-डीसी र ज्ञात अनुक्रमलाई PCR प्रवर्धनको लागि प्राइमरको रूपमा प्रयोग गरियो।
20. फ्युजन प्रोटीन: युकेरियोटिक प्रोटीनको जीन एक्सोजेनस जीनसँग जोडिएको हुन्छ, र मूल जीन प्रोटीन र एक्सोजेनस प्रोटीनको अनुवादबाट बनेको प्रोटीन एकै समयमा व्यक्त गरिन्छ।
अन्य आणविक जीवविज्ञान सर्तहरू
1. DNA को भौतिक नक्सा DNA अणुको (प्रतिबन्ध endonuclease-पाचिएको) टुक्राहरू व्यवस्थित गरिएको क्रम हो।
2. RNase को क्लीभेज दुई प्रकारमा विभाजित छ (autocatalysis) र (heterocatalysis)।
3. प्रोकारियोटहरूमा तीन प्रारम्भिक कारकहरू छन् (IF-1), (IF-2) र (IF-3)।
4. ट्रान्समेम्ब्रेन प्रोटिनलाई मार्गदर्शन (सिग्नल पेप्टाइड्स) चाहिन्छ, र प्रोटिन च्यापेरोन्सको भूमिका हुन्छ (पेप्टाइड चेनलाई प्रोटिनको नेटिभ कन्फर्मेसनमा फोल्ड गर्न मद्दत गर्दछ)।
5. प्रमोटरहरूमा रहेका तत्वहरूलाई सामान्यतया दुई प्रकारमा विभाजन गर्न सकिन्छ: (मूल प्रवर्द्धक तत्वहरू) र (अपस्ट्रिम प्रमोटर तत्वहरू)।
6. आणविक जीवविज्ञानको अनुसन्धान सामग्रीले मुख्यतया तीन भागहरू समावेश गर्दछ: (संरचनात्मक आणविक जीवविज्ञान), (जीन अभिव्यक्ति र नियमन), र (डीएनए पुनर्संयोजन प्रविधि)।
7. DNA आनुवंशिक सामग्री हो भनेर देखाउने दुई मुख्य प्रयोगहरू (मुसाको न्यूमोकोकस संक्रमण) र (Escherichia coli को T2 फेज संक्रमण) हुन्।सम्भावित)।
8. hnRNA र mRNA बीच दुई मुख्य भिन्नताहरू छन्: (hnRNA mRNA मा रूपान्तरण गर्ने प्रक्रियामा विभाजित हुन्छ), (mRNA को 5' अन्त्य m7pGppp टोपीसँग जोडिएको हुन्छ, र mRNA एसिड (polyA) पुच्छरको 3' अन्त्यमा अतिरिक्त पोलीएडेनाइलेशन हुन्छ)।
9. प्रोटीनको बहु-सब्युनिट फारमका फाइदाहरू हुन् (सब्युनिट DNA उपयोगको लागि एक आर्थिक विधि हो), (प्रोटिन गतिविधिमा प्रोटीन संश्लेषणमा अनियमित त्रुटिहरूको प्रभावलाई कम गर्न सक्छ), (गतिविधि धेरै कुशलतापूर्वक र द्रुत रूपमा खोल्न र बन्द गर्न सकिन्छ)।
10. प्रोटीन फोल्डिङ मेकानिजमको पहिलो न्यूक्लिएशन सिद्धान्तको मुख्य सामग्रीमा (न्यूक्लिएशन), (संरचनात्मक संवर्धन), (अन्तिम पुनर्व्यवस्थित) समावेश छ।
11. Galactose ब्याक्टेरिया मा दोहोरो प्रभाव छ;एकातिर (यो कोशिकाको वृद्धिको लागि कार्बन स्रोतको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ);अर्कोतर्फ (यो पनि सेल पर्खाल को एक घटक हो)।तसर्थ, पृष्ठभूमि स्तरमा स्थायी संश्लेषणको लागि CAMP-CRP-स्वतन्त्र प्रवर्तक S2 आवश्यक छ;एकै समयमा, उच्च-स्तर संश्लेषण विनियमित गर्न एक CAMP-CRP-निर्भर प्रवर्तक S1 आवश्यक छ।ट्रान्सक्रिप्शन (S2) बाट G सँग र (S1) बाट G बिना सुरु हुन्छ।
12. पुन: संयोजक DNA प्रविधिलाई (जीन क्लोनिङ) वा (आणविक क्लोनिङ) पनि भनिन्छ।अन्तिम लक्ष्य हो (एउटा जीवमा भएको आनुवंशिक जानकारी डीएनएलाई अर्को जीवमा स्थानान्तरण गर्नु)।एक सामान्य DNA पुन: संयोजन प्रयोगमा सामान्यतया निम्न चरणहरू समावेश हुन्छन्: (1) दाता जीवको लक्षित जीन (वा एक्सोजेनस जीन) निकाल्नुहोस्, र नयाँ पुनः संयोजक DNA अणु बनाउनको लागि अर्को DNA अणु (क्लोनिङ भेक्टर) मा इन्जाइम्याटिक रूपमा जडान गर्नुहोस्।② पुन: संयोजक DNA अणु प्रापक सेलमा स्थानान्तरण गरिन्छ र प्राप्तकर्ता सेलमा प्रतिकृति बनाइन्छ।यो प्रक्रियालाई रूपान्तरण भनिन्छ।③ स्क्रिन गर्नुहोस् र ती प्राप्तकर्ता कोशिकाहरू पहिचान गर्नुहोस् जसले पुनः संयोजक DNA अवशोषित गरेको छ।④ विदेशी सहायता जीन व्यक्त गरिएको छ कि छैन भनेर पत्ता लगाउन ठूलो परिमाणमा पुनः संयोजक DNA भएका कोशिकाहरू खेती गर्नुहोस्।
13. त्यहाँ दुई प्रकारका प्लाज्मिड प्रतिकृतिहरू छन्: होस्ट सेल प्रोटीन संश्लेषणद्वारा कडा रूपमा नियन्त्रित हुनेहरूलाई (टाइट प्लाज्मिडहरू) भनिन्छ, र होस्ट सेल प्रोटीन संश्लेषणद्वारा कडा रूपमा नियन्त्रित नभएकाहरूलाई (रिलक्स प्लाज्मिड) भनिन्छ।
14. PCR प्रतिक्रिया प्रणालीमा निम्न अवस्थाहरू हुनुपर्छ: a।DNA प्राइमरहरू (लगभग 20 आधारहरू) छुट्याउन लक्षित जीनको दुई स्ट्र्यान्डहरूको प्रत्येक छेउमा पूरक अनुक्रमहरू।bथर्मल स्थिरता संग इन्जाइमहरू जस्तै: TagDNA पोलिमरेज।c, dNTPd, टेम्प्लेटको रूपमा रुचिको DNA अनुक्रम
15. PCR को आधारभूत प्रतिक्रिया प्रक्रियामा तीन चरणहरू समावेश छन्: (डिनेच्युरेसन), (एनिलिङ), र (विस्तार)।
16. ट्रान्सजेनिक जनावरहरूको आधारभूत प्रक्रियामा सामान्यतया निम्न समावेश हुन्छन्: ① निषेचित अण्डा वा भ्रूण स्टेम सेलको केन्द्रकमा क्लोन गरिएको विदेशी जीनको परिचय;②महिलाको पाठेघरमा इनोकुलेटेड निषेचित अण्डा वा भ्रूण स्टेम सेलको प्रत्यारोपण;③विदेशी जीन भएका सन्तानको लागि भ्रूणको पूर्ण विकास र वृद्धि;④ नयाँ होमोजिगस लाइनहरू प्रजनन गर्न प्रजनन स्टकको रूपमा विदेशी प्रोटिन उत्पादन गर्न सक्ने यी जनावरहरू प्रयोग गर्नुहोस्।
17. हाइब्रिडोमा सेल लाइनहरू हाइब्रिडाइजिंग (प्लीहा बी) कोशिकाहरू (मायोलोमा) कोशिकाहरूद्वारा उत्पन्न हुन्छन्, र (प्लीहा कोशिकाहरू) हाइपोक्सान्थाइन प्रयोग गर्न सक्छन् र (हड्डी कोशिकाहरू) कोशिका विभाजन कार्यहरू प्रदान गर्न सक्छन्, तिनीहरूलाई HAT माध्यममा हुर्काउन सकिन्छ।बढ्नु
18. अनुसन्धानको गहनतासँगै, एन्टिबडीहरूको पहिलो पुस्तालाई (पोलिक्लोनल एन्टिबडी), दोस्रो पुस्ता (मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरू), र तेस्रो पुस्ता (जेनेटिक इन्जिनियरिङ एन्टिबडीहरू) भनिन्छ।
19. वर्तमानमा, कीट भाइरसहरूको आनुवंशिक ईन्जिनियरिङ् मुख्य रूपमा ब्याकुलोभाइरसमा केन्द्रित छ, जुन (एक्सोजेनस टक्सिन जीन) को परिचयमा प्रकट हुन्छ;(कीराहरूको सामान्य जीवन चक्रलाई बाधा पुर्याउने जीनहरू);(भाइरस जीन को परिमार्जन)।
20. स्तनधारी RNA पोलिमरेज II प्रमोटरमा सामान्य तत्वहरू TATA, GC, र CAAT सँग सम्बन्धित ट्रान्स-अभिनय प्रोटीन कारकहरू क्रमशः (TFIID), (SP-1) र (CTF/NF1) हुन्।
एक्काइस।RNA पोलिमरेज Ⅱ को आधारभूत ट्रान्सक्रिप्शन कारकहरू, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, र तिनीहरूको बाध्यकारी अनुक्रम हो: (D, A, B, E)।जसमा TFII-D को कार्य हो (TATA बक्समा बाध्यकारी)।
बाइस।धेरै जसो ट्रान्सक्रिप्शन कारकहरू जुन DNA मा बाँध्छन् डाइमरको रूपमा काम गर्छन्।ट्रान्सक्रिप्शन कारकहरूको कार्यात्मक डोमेनहरू जुन DNA मा बाँध्छन् सामान्यतया निम्न हुन् (हेलिक्स-टर्न-हेलिक्स), (जिंक फिंगर मोटिफ), (आधारभूत-ल्युसिन) जिपर मोटिफ)।
तेइस।त्यहाँ तीन प्रकारका प्रतिबन्ध endonuclease क्लिभेज मोडहरू छन्: (5' टाँसिने छेउहरू उत्पन्न गर्न सममिति अक्षको 5' छेउमा काट्नुहोस्), (3' टाँसिने छेउहरू उत्पन्न गर्न सममिति अक्षको 3' छेउमा काट्नुहोस् (सममिति अक्षमा काट्नुहोस्)।
चौबिस।प्लाज्मिड DNA मा तीन फरक कन्फिगरेसनहरू छन्: (SC कन्फिगरेसन), (oc कन्फिगरेसन), (L कन्फिगरेसन)।इलेक्ट्रोफोरेसिसमा पहिलो (SC कन्फिगरेसन) हो।
25. एक्सोजेनस जीन अभिव्यक्ति प्रणाली, मुख्यतया (Escherichia coli), (खमीर), (कीरा) र (स्तनधारी कोशिका तालिका)।
26. ट्रान्सजेनिक जनावरहरूको लागि सामान्यतया प्रयोग हुने विधिहरू हुन्: (रेट्रोभाइरल संक्रमण विधि), (डीएनए माइक्रोइन्जेक्शन विधि), (भ्रूण स्टेम सेल विधि)।
आवेदन आणविक जीवविज्ञान
1. 5 भन्दा बढी RNA को कार्यहरूको नाम दिनुहोस्?
स्थानान्तरण RNA tRNA स्थानान्तरण एमिनो एसिड राइबोजोम RNA rRNA रिबोजोमले मेसेन्जर RNA mRNA प्रोटीन संश्लेषण टेम्प्लेट बनाउँछ विषम परमाणु RNA hnRNA परिपक्व mRNA सानो परमाणु RNA snRNA को अग्रसर hnRNA स्प्लिसिङमा संलग्न सानो साइटोप्लास्टिक रिएनएसएलम-प्रोटीन-आरएनए-सीआरएनए-सी-आरएनए-सी-आरएनए-सी-आरएनए स्प्लिसिङ आकारको संकेत पहिचान शरीरका अवयवहरू एन्टिसेन्स आरएनए anRNA/micRNA जीन अभिव्यक्ति रिबोजाइम आरएनए इन्जाइमेटिक रूपमा सक्रिय आरएनए विनियमित गर्दछ
२. प्रोकारियोटिक र युकेरियोटिक प्रमोटरहरू बीचको मुख्य भिन्नता के हो?
Prokaryotic TTGACA --- TATAAT------प्रारम्भ साइट-35 -10 Eukaryotic Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-प्रारम्भिक साइट-110 -70 -25
3. प्राकृतिक प्लाज्मिडहरूको कृत्रिम निर्माणका मुख्य पक्षहरू के हुन्?
प्राकृतिक प्लाज्मिडहरूमा प्रायः दोषहरू हुन्छन्, त्यसैले तिनीहरू आनुवंशिक ईन्जिनियरिङ्का लागि वाहकहरूको रूपमा प्रयोगको लागि उपयुक्त हुँदैनन्, र परिमार्जन र निर्माण गर्नुपर्छ: क।उपयुक्त चयन मार्कर जीनहरू थप्नुहोस्, जस्तै दुई वा बढी, जुन छनोटको लागि प्रयोग गर्न सजिलो हुन्छ, सामान्यतया एन्टिबायोटिक जीनहरू।bपुन: संयोजनको लागि उपयुक्त इन्जाइम काट्ने साइटहरू बढाउनुहोस् वा घटाउनुहोस्।गलम्बाइ छोटो पार्नुहोस्, अनावश्यक टुक्राहरू काट्नुहोस्, आयात दक्षता सुधार गर्नुहोस् र लोडिङ क्षमता बढाउनुहोस्।dप्रतिकृति परिवर्तन गर्नुहोस्, टाइटबाट लूजमा, थोरै प्रतिलिपिहरूबाट धेरै प्रतिलिपिहरूमा।eआनुवंशिक इन्जिनियरिङको विशेष आवश्यकताहरू अनुसार विशेष आनुवंशिक तत्वहरू थप्नुहोस्
4. टिस्यु-विशिष्ट cDNA को भिन्नता स्क्रिनिङको लागि विधिको उदाहरण दिनुहोस्?
दुई कोशिका जनसंख्याहरू तयार हुन्छन्, लक्ष्य जीन अभिव्यक्त वा उच्च कोशिकाहरू मध्ये एकमा व्यक्त गरिन्छ, र लक्ष्य जीन अर्को कोषमा अभिव्यक्त वा कम रूपमा अभिव्यक्त हुँदैन, र त्यसपछि लक्षित जीन हाइब्रिडाइजेशन र तुलनाद्वारा फेला पर्दछ।उदाहरण को लागी, ट्यूमर को घटना र विकास को समयमा, ट्यूमर कोशिकाहरु लाई सामान्य कोशिकाहरु भन्दा फरक अभिव्यक्ति स्तर संग mRNA लाई प्रस्तुत गर्दछ।तसर्थ, ट्यूमर-सम्बन्धित जीनहरू विभेदक हाइब्रिडाइजेशनद्वारा जाँच गर्न सकिन्छ।इन्डक्सन विधि पनि जीनहरू स्क्रिन गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ जसको अभिव्यक्ति प्रेरित छ।
5. हाइब्रिडोमा सेल लाइनहरूको उत्पादन र स्क्रीनिंग?
प्लीहा बी कोशिकाहरू + माइलोमा कोशिकाहरू, कोशिका फ्युजनलाई प्रवर्द्धन गर्न पोलिथीन ग्लाइकोल (पीईजी) थप्नुहोस्, र HAT माध्यम (हाइपोक्सान्थाइन, एमिनोप्टेरिन, टी युक्त) मा हुर्कने स्प्लेनिक बी-माइलोमा फ्युजन कोशिकाहरूले पोषण विस्तार गर्न जारी राख्छन्।कोशिका फ्युजनले समावेश गर्दछ: प्लीहा-प्लीहा फ्यूजन कोशिकाहरू: बढ्न नसक्ने, प्लीहा कोशिकाहरूलाई भिट्रोमा कल्चर गर्न सकिँदैन।हड्डी-हड्डी फ्यूजन कोशिकाहरू: हाइपोक्सान्थाइन प्रयोग गर्न सक्दैन, तर फोलेट रिडक्टेज प्रयोग गरेर दोस्रो मार्ग मार्फत प्यूरिन संश्लेषण गर्न सक्छ।एमिनोप्टेरिनले फोलेट रिडक्टेजलाई रोक्छ र यसरी बढ्न सक्दैन।हड्डी-प्लीहा फ्यूजन कोशिकाहरू: HAT मा बढ्न सक्छ, प्लीहा कोशिकाहरूले हाइपोक्सान्थिन प्रयोग गर्न सक्छन्, र हड्डी कोशिकाहरूले कोशिका विभाजन कार्य प्रदान गर्दछ।
6. Dideoxy टर्मिनल टर्मिनेसन विधि (Sanger विधि) द्वारा DNA को प्राथमिक संरचना निर्धारण गर्ने सिद्धान्त र विधि के हो?
सिद्धान्त भनेको DNA को विस्तार समाप्त गर्न न्यूक्लियोटाइड चेन टर्मिनेटर-2,,3,-dideoxynucleotide प्रयोग गर्नु हो।यसमा 3/5/phosphodiester बन्डहरूको गठनको लागि आवश्यक 3-OH को अभाव भएकोले, एक पटक DNA चेनमा समावेश गरिसकेपछि, DNA श्रृंखलालाई थप विस्तार गर्न सकिँदैन।आधार जोडीको सिद्धान्त अनुसार, जब पनि DNA पोलिमरेजलाई सामान्य रूपमा विस्तारित DNA श्रृंखलामा भाग लिन dNMP चाहिन्छ, त्यहाँ दुईवटा सम्भावनाहरू छन्, एउटा ddNTP मा भाग लिने, जसले deoxynucleotide चेन विस्तारको अन्त्यमा परिणाम दिन्छ;अर्को dNTP मा भाग लिनु हो, ताकि DNA श्रृंखला अझै पनि अर्को ddNTP सम्मिलित नभएसम्म विस्तार गर्न जारी राख्न सक्छ।यस विधि अनुसार, ddNTP मा समाप्त हुने विभिन्न लम्बाइका DNA टुक्राहरूको समूह प्राप्त गर्न सकिन्छ।विधिलाई क्रमशः ddAMP, ddGMP, ddCMP र ddTMP गरी चार समूहमा विभाजन गर्ने हो।प्रतिक्रिया पछि, polyacrylamide जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस स्विमिंग ब्यान्ड अनुसार DNA अनुक्रम पढ्न सक्छ।
7. ट्रान्सक्रिप्शनमा एक्टिभेटर प्रोटीन (CAP) को सकारात्मक नियमन प्रभाव के हो?
Cyclic adenylate (cAMP) रिसेप्टर प्रोटीन CRP (cAMP रिसेप्टर प्रोटीन), CAMP र CRP को संयोजनबाट बनेको जटिललाई CAP (cAMPactivated प्रोटीन) भनिन्छ।जब ई. कोलाई ग्लुकोजको कमी भएको मध्यममा हुर्किन्छ, CAP को संश्लेषण बढ्छ, र CAP ले ल्याक्टोज (Lac) जस्ता प्रमोटरहरूलाई सक्रिय गर्ने कार्य गर्दछ।केही CRP-आश्रित प्रवर्द्धकहरूमा सामान्य प्रमोटरहरूसँग हुने विशिष्ट -35 क्षेत्र अनुक्रम सुविधा (TTGACA) हुँदैन।त्यसकारण, RNA पोलिमरेजलाई यसलाई बाँध्न गाह्रो छ।CAP (प्रकार्य) को उपस्थिति: महत्त्वपूर्ण रूपमा इन्जाइम र प्रमोटरको बाध्यकारी स्थिरता सुधार गर्न सक्छ।यसले मुख्यतया निम्न दुई पक्षहरू देखाउँछ: ① CAP ले प्रमोटरको कन्फर्मेसन र इन्जाइमसँगको अन्तरक्रियालाई परिवर्तन गरेर इन्जाइम अणुलाई सही दिशामा उन्मुख गर्न मद्दत गर्छ, जसले गर्दा -10 क्षेत्रसँग मिलाउन र -35 क्षेत्रको कार्यलाई प्रतिस्थापन गर्ने भूमिका खेल्छ।②CAP ले DNA मा अन्य साइटहरूमा RNA पोलिमरेजको बाइन्डिङलाई पनि रोक्न सक्छ, जसले गर्दा यसको विशिष्ट प्रवर्द्धकमा बाँधिने सम्भावना बढ्छ।
8. सामान्य DNA पुन: संयोजन प्रयोगमा कुन चरणहरू समावेश हुन्छन्?
aदाता जीवको लक्षित जीन (वा एक्सोजेनस जीन) निकाल्नुहोस्, र नयाँ पुन: संयोजक डीएनए अणु बनाउनको लागि अर्को डीएनए अणु (क्लोनिङ भेक्टर) मा इन्जाइम्याटिक रूपमा जडान गर्नुहोस्।bपुन: संयोजक DNA अणुलाई प्रापक सेलमा स्थानान्तरण गर्नुहोस् र यसलाई प्राप्तकर्ता सेलमा प्रतिलिपि बनाउनुहोस् र सुरक्षित गर्नुहोस्।यो प्रक्रियालाई रूपान्तरण भनिन्छ।गस्क्रिन गर्नुहोस् र ती प्राप्तकर्ता कोशिकाहरू पहिचान गर्नुहोस् जसले पुनः संयोजक DNA अवशोषित गरेको छ।dविदेशी सहायता जीन व्यक्त गरिएको छ कि छैन भनेर पत्ता लगाउन पुन: संयोजक DNA भएका कोशिकाहरूलाई सामूहिक संस्कृति।
9. जीन लाइब्रेरीको निर्माण पुन: संयोजकहरूको स्क्रिनिङका लागि तीन विधिहरू दिइएको छ र प्रक्रियालाई संक्षिप्त रूपमा वर्णन गरिएको छ।
एन्टिबायोटिक प्रतिरोधी स्क्रिनिङ, प्रतिरोधको निस्क्रियता, निलो-सेतो स्पट स्क्रिनिङ वा PCR स्क्रिनिङ, विभेदक स्क्रिनिङ, DNA प्रोब अधिकांश क्लोनिङ भेक्टरहरूले एन्टिबायोटिक प्रतिरोधी जीनहरू (एन्टि-एम्पिसिलिन, टेट्रासाइक्लिन) बोक्छन्।जब प्लाज्मिडलाई Escherichia coli मा स्थानान्तरण गरिन्छ, ब्याक्टेरियाले प्रतिरोध प्राप्त गर्नेछ, र स्थानान्तरण नभएकाहरूमा प्रतिरोध हुँदैन।तर पुनर्गठन भएको हो कि होइन भन्ने छुट्याउन सकेको छैन ।दुई प्रतिरोधी जीन भएको भेक्टरमा, यदि कुनै एक जीनमा विदेशी डीएनए टुक्रा घुसाइन्छ र जीनलाई निष्क्रिय बनाउँछ भने, सकारात्मक पुन: संयोजकहरूको स्क्रिन गर्न विभिन्न औषधिहरू भएका दुई प्लेट नियन्त्रणहरू प्रयोग गर्न सकिन्छ।उदाहरणका लागि, pUC प्लाज्मिडले LacZ जीन (इन्कोडिङ β-galactosidase) समावेश गर्दछ, जसले क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) लाई नीलो उत्पादन गर्न विघटन गर्न सक्छ, यसरी तनावलाई नीलो बनाउँछ।जब विदेशी डीएनए सम्मिलित गरिन्छ, LacZ जीन व्यक्त गर्न सकिँदैन, र तनाव सेतो हुन्छ, ताकि पुन: संयोजक ब्याक्टेरिया स्क्रिन गर्न।
10. भ्रूण स्टेम सेलहरू मार्फत ट्रान्सजेनिक जनावरहरू प्राप्त गर्ने आधारभूत प्रक्रियाको व्याख्या गर्नुहोस्?
भ्रूण स्टेम सेलहरू (ES) भ्रूण विकासको क्रममा भ्रूण कोशिकाहरू हुन्, जसलाई कृत्रिम रूपमा संवर्धित र विस्तार गर्न सकिन्छ र अन्य प्रकारका कोशिकाहरूमा भिन्नता दिने कार्य हुन्छ।ES कोशिकाहरूको संस्कृति: ब्लास्टोसिस्टको भित्री कोशिका द्रव्यमान पृथक र संवर्धित हुन्छ।जब ES फिडर-फ्री तहमा संवर्धित हुन्छ, यसले विभिन्न कार्यात्मक कोशिकाहरू जस्तै मांसपेशी कोशिकाहरू र एन कोशिकाहरूमा भिन्न हुन्छ।जब फाइब्रोब्लास्ट भएको माध्यममा संवर्धित हुन्छ, ES ले भिन्नता कार्यलाई कायम राख्छ।ES लाई आनुवंशिक रूपमा हेरफेर गर्न सकिन्छ, र यसको भिन्नता प्रकार्यलाई यसको भिन्नता प्रकार्यलाई असर नगरी एकीकृत गर्न सकिन्छ, जसले अनियमित एकीकरणको समस्या समाधान गर्दछ।भ्रूणको स्टेम सेलहरूमा एक्सोजेनस जीनहरू परिचय गराउनुहोस्, त्यसपछि गर्भवती महिला मुसाको पाठेघरमा प्रत्यारोपण गर्नुहोस्, कुकुरको रूपमा विकास गर्नुहोस्, र होमोजिगस मुसाहरू प्राप्त गर्न क्रस गर्नुहोस्।
