Foreasy Taq DNA पोलिमरेज
किट विवरण:
◮उच्च विशिष्टता: इन्जाइमको एक निश्चित हट-स्टार्ट गतिविधि छ।
◮द्रुत प्रवर्धन: 10 सेकेन्ड/केबी।
◮अत्यधिक अनुकूलनीय टेम्प्लेट: GC उच्च मूल्य, विभिन्न कठिन-टु-एम्प्लीफाइ DNA टेम्प्लेटलाई प्रभावकारी रूपमा विस्तार गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।
◮बलियो निष्ठा: साधारण Taq इन्जाइम 6 पटक।
◮बलियो थर्मल स्थिरता: यसलाई एक हप्ताको लागि 37 डिग्री सेल्सियसमा राख्न सकिन्छ र 90% भन्दा बढी गतिविधि कायम राख्छ।
विवरण
Foreasy Taq DNA Polymerase एउटा नयाँ Taq इन्जाइम हो जुन Escherichia coli ईन्जिनियरिङ् ब्याक्टेरियामा जीन पुन: संयोजन प्रविधिद्वारा व्यक्त गरिएको छ।इन्जाइमको आफैंमा एक निश्चित हट-स्टार्ट गतिविधि हुन्छ र यसलाई परम्परागत PCR र qPCR को लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ;यसमा 5'→3' DNA पोलिमरेज गतिविधि र 5'→3' exonuclease गतिविधि छ, तर 3'→5' exonuclease गतिविधि छैन।
किट अवयवहरू
| कम्पोनेन्ट | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Foreasy Taq DNA पोलिमरेज(५ U/μL) | ५००० यू (१ एमएल) | ५० KU (१० एमएल) | ५०० KU (१०० एमएल) |
| 2× Taq प्रतिक्रिया बफर | २५ एमएल × ५ | २५० एमएल × ५ | ५०० एमएल × २५ |
सुविधाहरू र फाइदाहरू
- उच्च विशिष्टता: इन्जाइमको एक निश्चित हट-स्टार्ट गतिविधि छ।
- द्रुत प्रवर्धन: 10 सेकेन्ड/केबी।
- अत्यधिक अनुकूलनीय टेम्प्लेट: GC उच्च मूल्य, विभिन्न कठिन-टु-एम्प्लीफाइ DNA टेम्प्लेटलाई प्रभावकारी रूपमा विस्तार गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।
- बलियो निष्ठा: साधारण Taq इन्जाइम 6 पटक।
- बलियो थर्मल स्थिरता: यसलाई एक हप्ताको लागि 37 डिग्री सेल्सियसमा राख्न सकिन्छ र 90% भन्दा बढी गतिविधि कायम राख्छ।
किट आवेदन
विभिन्न PCR/qPCR प्रणालीहरू र प्रत्यक्ष PCR प्रणालीहरू
DNA टुक्राहरूको PCR प्रवर्धन
डीएनए लेबलिंग
डीएनए अनुक्रमण
PCR A-tailed
U परिभाषा
1U: 74°C मा 30 मिनेटको लागि टेम्प्लेट/प्राइमरको रूपमा सक्रिय साल्मन स्पर्म DNA प्रयोग गरेर एसिड-अघुलनशील पदार्थमा 10 nmol deoxynucleotides समावेश गर्न आवश्यक इन्जाइमको मात्रा।
प्रतिक्रिया अवस्था
| तापक्रम | समय | साइकल |
| ३७ डिग्री सेल्सियस | ५ मिनेट | 1 |
| ९४°C | ५ मिनेट | 1 |
| ९४°C | १० सेकेन्ड | 35 |
| ६० डिग्री सेल्सियस | १० सेकेन्ड | |
| ७२° से | २० सेकेन्ड/केबी | |
| ७२° से | २ मिनेट | 1 |
भण्डारण
-20 ± 5 °C 2 वर्षको लागि वा -80 °C मा दीर्घकालीन भण्डारणको लागि।
कुनै प्रवर्धन संकेतहरू छैनन्
1. किटमा रहेको Taq DNA पोलिमरेजले किटको अनुचित भण्डारण वा म्याद सकिएको कारणले आफ्नो गतिविधि गुमाउँछ।
सिफारिस: किटको भण्डारण अवस्थाहरू पुष्टि गर्नुहोस्;PCR प्रणालीमा Taq DNA पोलिमरेजको उपयुक्त मात्रा पुन: थप्नुहोस् वा सम्बन्धित प्रयोगहरूको लागि नयाँ वास्तविक समय PCR किट खरिद गर्नुहोस्।
2. DNA टेम्प्लेटमा Taq DNA Polymerase को धेरै अवरोधकहरू छन्।
सुझाव: टेम्प्लेट पुन: शुद्ध गर्नुहोस् वा प्रयोग गरिएको टेम्प्लेटको मात्रा घटाउनुहोस्।
3.Mg2+ एकाग्रता उपयुक्त छैन।
सिफारिस: हामीले प्रदान गर्ने २× वास्तविक पीसीआर मिक्सको Mg2+ एकाग्रता 3.5mM हो।यद्यपि, केही विशेष प्राइमर र टेम्प्लेटहरूको लागि, Mg2+ एकाग्रता उच्च हुन सक्छ।त्यसकारण, तपाईले Mg2+ एकाग्रतालाई अनुकूलन गर्न MgCl2 लाई सिधै थप्न सक्नुहुन्छ।अनुकूलनका लागि प्रत्येक पटक Mg2+ 0.5mM बढाउन सिफारिस गरिन्छ।
4. PCR प्रवर्धन अवस्थाहरू उपयुक्त छैनन्, र प्राइमर अनुक्रम वा एकाग्रता अनुचित छ।
सुझाव: प्राइमर अनुक्रमको शुद्धता पुष्टि गर्नुहोस् र प्राइमर बिग्रेको छैन;यदि एम्प्लीफिकेशन सिग्नल राम्रो छैन भने, एनेलिङको तापक्रम घटाउने प्रयास गर्नुहोस् र प्राइमरको एकाग्रतालाई उचित रूपमा समायोजन गर्नुहोस्।
5. टेम्प्लेट को मात्रा धेरै कम वा धेरै छ।
सिफारिस: टेम्प्लेट लाइनराइजेसन ग्रेडिएन्ट डिलुसन प्रदर्शन गर्नुहोस्, र रियल टाइम पीसीआर प्रयोगको लागि उत्तम पीसीआर प्रभावको साथ टेम्प्लेट एकाग्रता चयन गर्नुहोस्।
NTC को धेरै उच्च प्रतिदीप्ति मान छ
1. अभिकर्मक दूषित अपरेशन को समयमा कारण।
सिफारिस: वास्तविक समय पीसीआर प्रयोगहरूको लागि नयाँ अभिकर्मकहरूसँग बदल्नुहोस्।
2. PCR प्रतिक्रिया प्रणालीको तयारीको क्रममा प्रदूषण भयो।
सिफारिस: सञ्चालन गर्दा आवश्यक सुरक्षात्मक उपायहरू लिनुहोस्, जस्तै: लेटेक्स पन्जा लगाउने, फिल्टरको साथ पिपेट टिप प्रयोग गर्ने, आदि।
3. प्राइमरहरू डिग्रेड भएका छन्, र प्राइमरहरूको ह्रासले गैर-विशिष्ट प्रवर्धनको कारण हुनेछ।
सुझाव: प्राइमरहरू बिग्रेको छ कि छैन भनी पत्ता लगाउन SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेसिस प्रयोग गर्नुहोस्, र वास्तविक समय PCR प्रयोगहरूको लागि तिनीहरूलाई नयाँ प्राइमरहरूसँग बदल्नुहोस्।
प्राइमर डाइमर वा गैर-विशिष्ट प्रवर्धन
1. Mg2+ एकाग्रता उपयुक्त छैन।
सिफारिस: हामीले प्रदान गर्ने २× वास्तविक PCR EasyTM मिक्सको Mg2+ एकाग्रता 3.5 mM हो।यद्यपि, केही विशेष प्राइमर र टेम्प्लेटहरूको लागि, Mg2+ एकाग्रता उच्च हुन सक्छ।त्यसकारण, तपाईले Mg2+ एकाग्रतालाई अनुकूलन गर्न MgCl2 लाई सिधै थप्न सक्नुहुन्छ।अनुकूलनका लागि प्रत्येक पटक Mg2+ 0.5mM बढाउन सिफारिस गरिन्छ।
2. PCR annealing तापमान धेरै कम छ।
सुझाव: PCR annealing तापमान 1 ℃ वा 2 ℃ प्रत्येक पटक बढाउनुहोस्।
3. PCR उत्पादन धेरै लामो छ।
सिफारिस: वास्तविक समय PCR उत्पादनको लम्बाइ 100-150bp को बीचमा हुनुपर्छ, 500bp भन्दा बढी होइन।
4. प्राइमरहरू डिग्रेड भएका छन्, र प्राइमरहरूको ह्रासले विशिष्ट प्रवर्धनको उपस्थितिमा नेतृत्व गर्नेछ।
सुझाव: प्राइमरहरू बिग्रेको छ कि छैन भनी पत्ता लगाउन SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेसिस प्रयोग गर्नुहोस्, र वास्तविक समय PCR प्रयोगहरूको लागि तिनीहरूलाई नयाँ प्राइमरहरूसँग बदल्नुहोस्।
5. PCR प्रणाली अनुचित छ, वा प्रणाली धेरै सानो छ।
सुझाव: PCR प्रतिक्रिया प्रणाली धेरै सानो छ पत्ता लगाउने शुद्धता कम हुनेछ।रियल टाइम पीसीआर प्रयोग पुन: चलाउनको लागि मात्रात्मक पीसीआर उपकरणद्वारा सिफारिस गरिएको प्रतिक्रिया प्रणाली प्रयोग गर्नु उत्तम हुन्छ।
परिमाणात्मक मानहरूको खराब पुनरावृत्ति
1. उपकरण खराब छ।
सुझाव: त्यहाँ उपकरणको प्रत्येक PCR प्वाल बीच त्रुटिहरू हुन सक्छ, तापमान व्यवस्थापन वा पत्ता लगाउने समयमा खराब प्रजनन क्षमताको परिणामस्वरूप।कृपया सम्बन्धित उपकरणको निर्देशन अनुसार जाँच गर्नुहोस्।
2. नमूना शुद्धता राम्रो छैन।
सिफारिस: अशुद्ध नमूनाहरूले प्रयोगको कमजोर पुनरुत्पादनको नेतृत्व गर्नेछ, जसमा टेम्प्लेट र प्राइमरहरूको शुद्धता समावेश छ।यो टेम्प्लेट पुन: शुद्ध गर्न सबै भन्दा राम्रो छ, र प्राइमरहरू SDS-PAGE द्वारा राम्रोसँग शुद्ध हुन्छन्।
3. PCR प्रणाली तयारी र भण्डारण समय धेरै लामो छ।
सुझाव: तयारी पछि तुरुन्तै पीसीआर प्रयोगको लागि वास्तविक समय पीसीआर प्रणाली प्रयोग गर्नुहोस्, र यसलाई धेरै लामो समयसम्म नछोड्नुहोस्।
4. PCR प्रवर्धन अवस्थाहरू उपयुक्त छैनन्, र प्राइमर अनुक्रम वा एकाग्रता अनुचित छ।
सुझाव: प्राइमर अनुक्रमको शुद्धता पुष्टि गर्नुहोस् र प्राइमर बिग्रेको छैन;यदि एम्प्लीफिकेशन सिग्नल राम्रो छैन भने, एनेलिङको तापक्रम घटाउने प्रयास गर्नुहोस् र प्राइमरको एकाग्रतालाई उचित रूपमा समायोजन गर्नुहोस्।
5. PCR प्रणाली अनुचित छ, वा प्रणाली धेरै सानो छ।
सुझाव: PCR प्रतिक्रिया प्रणाली धेरै सानो छ पत्ता लगाउने शुद्धता कम हुनेछ।रियल टाइम पीसीआर प्रयोग पुन: चलाउनको लागि मात्रात्मक पीसीआर उपकरणद्वारा सिफारिस गरिएको प्रतिक्रिया प्रणाली प्रयोग गर्नु उत्तम हुन्छ।
