प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट बिरुवाको लागि कुल आरएनए प्युरिफिकेटन किट पोलिसेकराइड र पोलिफेनोलमा कम
निर्दिष्टीकरणहरू
50 तयारी, 200 तयारी
किटले फोरेजीनद्वारा विकसित स्पिन स्तम्भ र सूत्र प्रयोग गर्दछ, जसले कम पोलिसेकराइड र पोलिफेनोल सामग्री भएका विभिन्न बिरुवाका तन्तुहरूबाट कुशलतापूर्वक उच्च शुद्धता र उच्च गुणस्तरको कुल आरएनए निकाल्न सक्छ।उच्च polysaccharides वा polyphenols सामग्री संग बिरुवा नमूनाहरु को लागी, यो राम्रो RNA निष्कर्षण परिणाम प्राप्त गर्न प्लान्ट कुल RNA अलगाव प्लस किट प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ।किटले DNA-सफाई स्तम्भ प्रदान गर्दछ जसले सजिलैसँग सुपरनेटान्ट र टिस्यु लाइसेटबाट जीनोमिक डीएनए हटाउन सक्छ।RNA-मात्र स्तम्भले प्रभावकारी रूपमा RNA बाँध्न सक्छ।किटले एकै समयमा ठूलो संख्यामा नमूनाहरू प्रशोधन गर्न सक्छ।
सम्पूर्ण प्रणालीले RNase समावेश गर्दैन, त्यसैले शुद्ध आरएनए अपमानित हुनेछैन।Buffer PRW1 र Buffer PRW2 ले यो सुनिश्चित गर्न सक्छ कि प्राप्त गरिएको RNA प्रोटीन, DNA, आयनहरू र जैविक यौगिकहरूले दूषित छैन।
किट अवयवहरू
| बफर PSL1, बफर PS, बफर PSL2 |
| बफर PRW1, बफर PRW2 |
| RNase-मुक्त ddH2O, DNA-सफाई स्तम्भ |
| RNA-मात्र स्तम्भ |
| निर्देशनहरू |
सुविधाहरू र फाइदाहरू
■ कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा सम्पूर्ण प्रक्रियामा, आइस बाथ र कम तापक्रम सेन्ट्रीफ्युगेसन बिना सञ्चालन।
■ पूरा किट RNase-रहित, RNA को ह्रासको बारेमा चिन्ता लिनु पर्दैन।
■ DNA-सफाई स्तम्भ विशेष रूपमा DNA मा बाँधिएको छ, ताकि किटले DNase थपे बिना जीनोमिक DNA प्रदूषण हटाउन सक्छ।
■ उच्च RNA उपज: RNA-मात्र स्तम्भ र अद्वितीय सूत्रले RNA लाई कुशलतापूर्वक शुद्ध गर्न सक्छ।
■ द्रुत गति: सञ्चालन गर्न सजिलो र 30 मिनेट भित्र पूरा गर्न सकिन्छ।
■ सुरक्षा: कुनै जैविक अभिकर्मक आवश्यक छैन।
■ उच्च गुणस्तर: शुद्ध आरएनए टुक्राहरू उच्च शुद्धताका हुन्छन्, प्रोटीन र अन्य अशुद्धताहरू मुक्त हुन्छन्, र विभिन्न डाउनस्ट्रीम प्रयोगात्मक अनुप्रयोगहरू पूरा गर्न सक्छन्।
किट आवेदन
यो ताजा वा जमेको बिरुवाको तन्तुका नमूनाहरू (विशेष गरी ताजा बिरुवाको पातको तन्तु) बाट कम पोलिसेकराइड र पोलिफेनोल सामग्रीको कुल RNA को निकासी र शुद्धीकरणको लागि उपयुक्त छ।
कार्य प्रवाह
रेखाचित्र
प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेसन किट प्लसले ५० मिलीग्राम पोलिसेकराइड र पोलिफेनोलका ताजा पातहरू प्रशोधन गर्यो र ५% शुद्ध आरएनए इलेक्ट्रोफोरेसिसद्वारा परीक्षण गरियो।
१: केरा
2: जिन्कगो
३: कपास
4: अनार
भण्डारण र शेल्फ जीवन
किटलाई कोठाको तापक्रम (१५–२५ डिग्री सेल्सियस) सुख्खा वातावरणमा १२ महिनासम्म र लामो समय (२४ महिना) २–८ डिग्री सेल्सियसमा भण्डारण गर्न सकिन्छ।
Buffer PSL1 2-hydroxy-1-ethanethiol (वैकल्पिक) थपेपछि 1 महिनाको लागि 4 ℃ मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।
समस्या विश्लेषण गाइड
तपाईंले सामना गर्न सक्ने समस्याहरूको निम्न विश्लेषणप्लान्ट कुलRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
स्पिन स्तम्भ बन्द छ
स्पिन स्तम्भको अवरोधले RNA उपज घटाउने वा RNA प्राप्त गर्न शुद्ध गर्न असक्षम हुने, र प्राप्त RNA को गुणस्तर कम हुनेछ।
सामान्य कारण विश्लेषण:
1. नमूना पूर्ण रूपमा तोडिएको छैन।
अपूर्ण नमूना विखंडनले DNA-सफाई स्तम्भलाई रोक्न सक्छ, जसले RNA उपज र गुणस्तरलाई पनि असर गर्न सक्छ।हामी सिफारिस गर्छौं कि नमूना खण्डीकरण गर्दा, कोशिकाको पर्खालहरू र नमूनाहरूको कोशिका झिल्लीहरू जस्ता तन्तुहरूलाई तोड्नका लागि तरल नाइट्रोजनको पर्याप्त मात्रामा तुरुन्तै पीस्नुहोस्।Polyphenol polysaccharides को बिरुवा नमूनाहरु को लागी, हामी तपाईंलाई Plant Total RNA Isolation Kit Plus प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं।
2. DNA-सफाई स्तम्भ पृथक supernatant, सम्भावित सेल मलबे गोली एस्पिरेट।
Aspirated cell debris pelet ले RNA-मात्र स्तम्भलाई RNA अवशोषण प्रक्रियाको क्रममा बन्द गर्न सक्छ (प्रक्रियाको चरण 5, polysaccharide polyphenol प्रक्रियाको चरण 6 हेर्नुहोस्)।हामी सिफारिस गर्छौं कि सेल मलबे आकांक्षी हुनबाट बच्नको लागि यो सुपरनेटेन्ट एस्पिरेट गर्दा सावधानी अपनाउनु पर्छ।
3. नमूनाको प्रारम्भिक मात्रा धेरै ठूलो छ।
अत्यधिक नमूना प्रयोगले बफर PRL1 वा Buffer PSL1 द्वारा अपूर्ण नमूना खण्डीकरण वा कोशिकाहरूको अपूर्ण lysis को परिणाम दिन्छ, जसको परिणामस्वरूप शुद्धीकरण कार्यहरूका लागि क्लग गरिएको शुद्धीकरण स्तम्भ हुन्छ।प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेसन किटको प्रारम्भिक अधिकतम ५० मिलीग्राम प्रति एकल शुद्धीकरण गरिएको नमूना हुन्छ।Polyphenol polysaccharides को बिरुवा नमूनाहरु को लागी, हामी तपाईंलाई प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट प्लस कोसिस गर्न सिफारिस गर्छौं।
4. सेन्ट्रीफ्यूजको तापक्रम धेरै कम छ।
सम्पूर्ण आरएनए अलगाव र शुद्धीकरण नमूना ऊतकको तरल नाइट्रोजन अवरोध बाहेक, सबै चरणहरू कोठाको तापक्रम (20-25 डिग्री सेल्सियस) मा गरिन्छ।केही कम-तापमान सेन्ट्रीफ्यूजहरूमा 20 डिग्री सेल्सियसभन्दा कम तापक्रम हुन्छ, जसले DNA-सफाई स्तम्भ र/वा RNA-मात्र स्तम्भमा अवरोधहरू निम्त्याउन सक्छ।यदि यस्तो भयो भने, सेन्ट्रीफ्यूजको तापमान २०-२५ डिग्री सेल्सियसमा सेट गर्नुहोस् र लिसिस मिश्रणलाई पूर्व-तातो गर्नुहोस् र/वा इथानोल पृथकीकरण सुपरनेटान्टलाई 37 डिग्री सेल्सियसमा थप्नुहोस्।
कुनै आरएनए निकालिएको वा आरएनए उपज कम छैन
त्यहाँ सामान्यतया धेरै कारकहरू छन् जसले रिकभरी दक्षतालाई असर गर्छ, जस्तै: नमूना आरएनए सामग्री, सञ्चालन विधि, इलुसन भोल्युम, आदि।
निम्नानुसार सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:
1. एक आइस बाथ वा कम तापक्रम (4°C) अपरेशनको क्रममा सेन्ट्रीफ्युगेशन गरिएको थियो।
सुझाव: सम्पूर्ण प्रक्रियामा कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा काम गर्नुहोस्, आइस बाथ र कम तापक्रम सेन्ट्रीफ्युगेसन नगर्नुहोस्।
2.नमूनाको अनुचित संरक्षण वा नमूनाको दीर्घकालीन संरक्षणका कारण आरएनए घटेको छ।
सिफारिस: ताजा सङ्कलन नमूनाहरू द्रुत रूपमा तरल नाइट्रोजनमा जम्मा गर्नुपर्छ, र त्यसपछि लामो समयको लागि -80 डिग्री सेल्सियसमा भण्डारण गर्नुपर्छ, बारम्बार चिसो र नमूनाहरू पग्लनबाट बच्नुहोस्;वा तुरुन्तै नमूनाहरू RNA स्टेबलाइजर RNAlater समाधान (जनावरको नमूनाहरू) मा भिजाउनुहोस्।
3.अपर्याप्त नमूना विखंडन र लिसिसले शुद्धीकरण स्तम्भको अवरोध निम्त्याउँछ।
सुझाव: टिस्यु पीस गर्दा, टिस्यु पर्याप्त मात्रामा भुइँमा छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्, र यसलाई द्रुत रूपमा पूर्व-तयार गरिएको बफर PSL1 मा स्थानान्तरण गर्नुहोस् (बिटा-ME को सही अनुपात थपिएको छ भनी पुष्टि गर्नुहोस्, प्रक्रियाको चरण 1 हेर्नुहोस्)।
4.Eluent गलत थपिएको थियो।
सुझाव: RNase-मुक्त ddH सुनिश्चित गर्नुहोस्2ओ शुद्धीकरण स्तम्भ झिल्लीको बीचमा ड्रिप गरिएको छ।
5. निरपेक्ष इथेनोलको सही मात्रा बफर PSL2 वा बफर PRW2 मा थपिएको थिएन।
सुझाव: कृपया निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, Buffer PSL2 र Buffer PRW2 मा निरपेक्ष इथानोलको सही भोल्युम थप्नुहोस् र किट प्रयोग गर्नु अघि राम्रोसँग मिलाउनुहोस्।
6. ऊतक नमूना को मात्रा अनुपयुक्त छ।
सुझाव: Buffer PSL1 को 500 μl प्रति 50 mg टिस्यु प्रयोग गर्नुहोस्।धेरै तन्तुको प्रयोगले निकालिएको आरएनएको मात्रा घटाउँछ र परिणामस्वरूप आरएनएको शुद्धता पनि कम हुन्छ।हामी दृढताका साथ सिफारिस गर्दछौं कि प्रारम्भिक नमूना खुराक प्रति आरएनए निकासी अपरेशन 50 मिलीग्राम भन्दा बढी हुनु हुँदैन।
7. अनुपयुक्त इल्युसन भोल्युम वा अपूर्ण उत्सर्जन।
सुझाव: शुद्धिकरण स्तम्भको एल्युएन्ट भोल्युम 50-200 μl छ;यदि इल्युसन प्रभाव सन्तोषजनक छैन भने, पूर्व तताइएको RNase-Free ddH थपेपछि कोठाको तापक्रममा समय बढाउन सिफारिस गरिन्छ।2O, जस्तै 5-10 मिनेट।
8. शुद्धिकरण स्तम्भमा बफर PRW2 बाट धोएपछि इथेनॉल अवशेष हुन्छ।
सुझाव: यदि खाली ट्यूब 1 मिनेटको लागि सेन्ट्रीफ्युज गरिएको छ र बफर PRW2 मा धोएपछि पनि इथानोल बाँकी छ भने, तपाईंले खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशनको समय 2 मिनेटमा बढाउन सक्नुहुन्छ, वा अवशिष्ट इथानोललाई पूर्ण रूपमा हटाउनको लागि 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा शुद्धीकरण स्तम्भ राख्न सक्नुहुन्छ।
9. किट गलत प्रयोग भएको थियो।
सुझाव: पोलिफेनोलिक पोलिसेकराइडका बिरुवा नमूनाहरूका लागि, प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट जस्ता सामान्य किटहरू प्रयोग गरेर आदर्श आरएनए नमूनाहरू प्राप्त गर्न सक्षम नहुन सक्छ।हामी तपाईंलाई प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशनकिट प्लस प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं, जुन विशेष रूपमा पोलिफेनोलिक पोलिसैकराइड बिरुवा नमूनाहरूको लागि डिजाइन गरिएको हो।पोलिफेनोल र पोलिसेकराइड प्लान्टको नमूनाबाट आरएनए निकाल्नको लागि विशेष रूपमा विकसित गरिएको किट।
OD260/OD280 मान कम छ
ddH संग आरएनए उत्सर्जन2O र स्पेक्ट्रोफोटोमिटर रीडिङका लागि प्रयोग गर्दा OD260/OD280 मान कम हुन्छ।हामी 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (RNase-Free ddH को सट्टा प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं।2ओ एल्युट आरएनए) तुलनात्मक रूपमा सही OD260/OD280 मानहरू प्राप्त गर्न, पृष्ठ 19 मा "RNA एकाग्रता र शुद्धीकरण परीक्षणहरू" हेर्नुहोस्।
शुद्ध आरएनए घटेको छ
शुद्ध RNA को गुणस्तर नमूना संरक्षण, RNase प्रदूषण, र हेरफेर जस्ता कारकहरूसँग सम्बन्धित छ।
सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:
1. टिस्यु नमूनाहरू सङ्कलन पछि समय मा भण्डारण गरिएको थिएन।
सिफारिस: यदि टिस्यु नमूनाहरू सङ्कलन पछि समयमै प्रयोग गरिएन भने, कृपया तिनीहरूलाई कम तापक्रममा तुरुन्तै तरल नाइट्रोजनमा भण्डार गर्नुहोस् वा तरल नाइट्रोजनमा द्रुत फ्रिज गरेपछि तिनीहरूलाई -80 डिग्री सेल्सियसमा दीर्घकालीन भण्डारणको लागि स्थानान्तरण गर्नुहोस्, वा तुरुन्तै नमूनाहरूलाई RNA स्टेबलाइजर RNAlater समाधान (जनावरको नमूनाहरू) मा डुबाउनुहोस्।आरएनए निकासीको लागि, ताजा सङ्कलन टिस्यु नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।
2. बारम्बार चिसो र टिस्यु नमूनाहरू पग्लने।
सुझाव: टिस्यु नमूनाहरू भण्डारण गर्दा, तिनीहरूलाई संरक्षणको लागि सानो टुक्रामा काट्नु राम्रो हुन्छ, र नमूनाहरू बारम्बार चिसो र पग्लिँदा हुने RNA को ह्रासबाट बच्न प्रयोग गर्दा तिनीहरूको एक भाग निकाल्नुहोस्।
3.RNase अपरेशन कोठामा पेश गरिएको छ वा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स, मास्क, इत्यादि नलगाइएको छ।
सुझाव: RNA निकासी प्रयोगहरू छुट्टाछुट्टै आरएनए अपरेशनहरूमा उत्कृष्ट प्रदर्शन गरिन्छ, र प्रयोगशाला तालिका प्रयोग गर्नु अघि सफा गरिनुपर्छ, र प्रयोगको क्रममा डिस्पोजेबल पन्जा र मास्क लगाउनु पर्छ ताकि RNase को परिचयले सबैभन्दा ठूलो हदसम्म RNA गिरावट हुनबाट जोगिन।
4. प्रयोगको क्रममा RNase द्वारा अभिकर्मक दूषित हुन्छ।
सुझाव: सम्बन्धित प्रयोगहरूको लागि बिरुवाको कुल आरएनए निकासी किटहरूको नयाँ शृङ्खलासँग बदल्नुहोस्।
5. RNA हेरफेरको लागि प्रयोग हुने सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू र पिपेट टिपहरू RNase बाट दूषित छन्।
सुझाव: आरएनए निकासीमा प्रयोग हुने सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, पिपेट टिप्स, पिपेटहरू, आदि सबै RNase-मुक्त छन् भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।
निर्देशन पुस्तिकाहरू:
