पशु कुल आरएनए अलगाव किट कुल आरएनए निकासी र पशु टिस्यू र कोशिका लागि शुद्धीकरण किटहरू
किट विवरण:
छिटो र कुशलतापूर्वक विभिन्न जनावरको तन्तुबाट उच्च शुद्धता र उच्च गुणस्तरको कुल आरएनए निकाल्नुहोस्।
आरएनए बिग्रेको बारेमा चिन्ता लिनु पर्दैन।सम्पूर्ण प्रणाली RNase-मुक्त छ
DNA-सफाई स्तम्भ प्रयोग गरेर प्रभावकारी रूपमा DNA हटाउनुहोस्
DNase थप्न बिना DNA हटाउनुहोस्
सरल - सबै कार्यहरू कोठाको तापक्रममा पूरा हुन्छन्
द्रुत-अपरेशन 30 मिनेटमा पूरा गर्न सकिन्छ
सुरक्षित - कुनै जैविक अभिकर्मक प्रयोग गरिएको छैन
उच्च शुद्धता—OD260/280≈1.8-2.1
किट विवरण
50 तयारी, 200 तयारी
यो किट प्रयोग गर्दछस्पिन स्तम्भ र सूत्रहाम्रो कम्पनीद्वारा विकसित, जसले उच्च दक्षताका साथ विभिन्न जनावरका तन्तुहरूबाट उच्च-शुद्धता र उच्च-गुणस्तरको कुल आरएनए निकाल्न सक्छ। यसले एक कुशल DNA-सफाई स्तम्भ प्रदान गर्दछ, जसले सजिलैसँग सुपरनेटान्ट र टिस्यु लाइसेटबाट जीनोमिक DNA अलग गर्न र सोस्न सक्छ, सरल र समय बचत;RNA-मात्र स्तम्भले RNA लाई कुशलतापूर्वक बाँध्न सक्छ र धेरै नमूनाहरूको एक अद्वितीय सूत्रको साथ एकैसाथ प्रशोधन गर्न सकिन्छ।
सम्पूर्ण प्रणाली RNase-मुक्त छ, ताकि निकालिएको RNA अपमानित हुँदैन;Buffer RW1, Buffer RW2 बफर धुने प्रणाली, ताकि प्राप्त RNA प्रोटिन, DNA, आयन, र जैविक यौगिक प्रदूषण मुक्त छ।
किट अवयवहरू
| पशु कुल आरएनए अलगाव किट | ||
| किट अवयवहरू | RE-03011 | RE-03014 |
| ५० टि | २०० टि | |
| बफर RL1* | 25ml | 100ml |
| बफर RL2 | 15ml | ६० एमएल |
| बफर RW1* | 25ml | 100ml |
| बफर RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-मुक्त ddH2O | 10ml | 40ml |
| RNA-मात्र स्तम्भ | 50 | २०० |
| DNA-सफाई स्तम्भ | 50 | २०० |
| निर्देशन पुस्तिका | १ टुक्रा | १ टुक्रा |
उत्पादन जानकारी
| ढाँचा | स्पिन स्तम्भ | शुद्धिकरण घटक | फोरजीन स्तम्भ, अभिकर्मक |
| फ्लक्स | 1-24 नमूनाहरू | प्रति तयारी समय | ~३० मिनेट (२४ नमूनाहरू) |
| सेन्ट्रीफ्यूज | डेस्क सेन्ट्रीफ्यूज | Pyrolysis विभाजन | केन्द्रापसारक विभाजन |
| नमूना | पशु ऊतक;सेल | नमूना रकम | ऊतक: 10-20 मिलीग्राम;सेल:(१-५)×१०6 |
| इलुसन भोल्युम | 50-200 μL | अधिकतम लोड भोल्युम | 850 μL |
सुविधाहरू र फाइदाहरू
■ आरएनए ह्रासको बारेमा चिन्ता लिनु पर्दैन;सम्पूर्ण प्रणाली RNase-मुक्त छ
■ प्रभावकारी रूपमा DNA-प्रयोग गरेर DNA-सफाई स्तम्भ हटाउनुहोस्
■ DNase नथरी DNA हटाउनुहोस्
■ साधारण-सबै कार्यहरू कोठाको तापक्रममा पूरा हुन्छन्
■ द्रुत-अपरेशन 30 मिनेटमा पूरा गर्न सकिन्छ
■ सुरक्षित - कुनै जैविक अभिकर्मक आवश्यक छैन
■ उच्च शुद्धता -OD260/280≈1.8-2.1
किट आवेदन
यो विभिन्न ताजा वा जमे भएका जनावरको तन्तु वा संवर्धित कोशिकाहरूबाट कुल आरएनएको निकासी र शुद्धीकरणको लागि उपयुक्त छ।
उत्पादन मापदण्डहरू
■ डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगहरू: पहिलो-स्ट्र्यान्ड cDNA संश्लेषण, RT-PCR, आणविक क्लोनिंग, उत्तरी ब्लट, आदि।
■ नमूनाहरू: जनावरको तन्तु, संवर्धित कोशिकाहरू
■ खुराक: टिस्युहरू 10-20mg, कोशिकाहरू(2-5)×106
■ शुद्धीकरण स्तम्भको अधिकतम DNA बाध्यकारी क्षमता: 80 μg
■ इलुसन भोल्युम: 50-200 μl
रेखाचित्र
पशु कुल आरएनए अलगाव किट उपचार 20mg
ताजा माउस नमूनाहरू, 5% शुद्ध कुल आरएनए 1% अग्रगामी लिनुहोस्
ग्लाइकोजेल इलेक्ट्रोफोरेसिस
1: प्लीहा 2: मृगौला
३: कलेजो ४: मुटु
भण्डारण र शेल्फ जीवन
किटलाई २४ महिनासम्म कोठाको तापक्रम (१५–२५ डिग्री सेल्सियस) वा २–८ डिग्री सेल्सियसमा लामो समयसम्म भण्डारण गर्न सकिन्छ।बफर RL1 β-mercaptoethanol (वैकल्पिक) थपेपछि 1 महिनाको लागि 4 ℃ मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।
उद्धृत लेखहरू
१.IF: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.केन्द्रीय कम्पोजिट डिजाइनको अप्टिमाइजेसन मार्फत लिभर बेस सम्पादनका लागि mRNA-लोड गरिएको लिपिड-जस्तै नैनो कणहरू।Adv.कार्य।मेटर।2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068।
2.IF: 18.187:He X, Hong W, Yang J, et al।चिकित्सीय स्टेम सेल तयारीमा कोशिकाहरूको सहज एपोप्टोसिसले फास्फेटिडाइल्सेरिनको रिलीज मार्फत इम्युनोमोड्युलेटरी प्रभावहरू प्रयोग गर्दछ।सिग्नल ट्रान्सडक्ट लक्ष्य थियो।२०२१ जुलाई १४;६(१):२७०।doi: 10.1038/s41392-021-00688-z।
3.IF: 17.97: Dai Z, Liu H, Liao J, et al।N7-Methylguanosine tRNA परिमार्जनले oncogenic mRNA अनुवादलाई बढाउँछ र intrahepatic cholangiocarcinoma प्रगतिलाई बढावा दिन्छ।मोल सेल।2021 जुलाई 29:S1097-2765(21)00555-4।doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003।
4.IF: 9.225: काओ एक्स, शू वाई, चेन वाई, एट अल।Mettl14-Mediated m6A परिमार्जनले एन्डोप्लाज्मिक रेटिकुलम होमियोस्टेसिस कायम गरेर कलेजोको पुनरुत्थानलाई सुविधा दिन्छ।सेल Mol Gastroenterol Hepatol।२०२१;१२(२):६३३-६५१।doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001।
को लागि आरएनए अलगाव किट अन्य नमूना स्रोतहरूउपलब्ध छ:
कोशिका, बिरुवा, भाइरल, रगत, आदि।
आरएनए निकालिएको छैन वा आरएनए उपज कम छ
त्यहाँ प्रायः विभिन्न कारकहरू छन् जसले रिकभरी दक्षतालाई असर गर्छ, जस्तै: टिश्यू नमूना आरएनए सामग्री, सञ्चालनको विधि, इलुसन भोल्युम, आदि।
1. आइस बाथ वा क्रायोजेनिक (4 डिग्री सेल्सियस) सेन्ट्रीफ्युगेशन सञ्चालनको क्रममा गरिएको थियो।
सिफारिस: सम्पूर्ण प्रक्रियामा कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा काम गर्नुहोस्, कम तापक्रममा आइस बाथ र सेन्ट्रीफ्यूज नगर्नुहोस्।
2. अनुचित नमूना संरक्षण वा अत्यधिक नमूना भण्डारण समय।
सिफारिस: नमूनाहरू -80 डिग्री सेल्सियसमा भण्डार गर्नुहोस् वा तरल नाइट्रोजनमा फ्रिज गर्नुहोस् र दोहोर्याइएको फ्रिज-थउ प्रयोगबाट बच्नुहोस्;आरएनए निकासीका लागि ताजा टिस्यु वा कल्चर गरिएको सेलहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।
3. अपर्याप्त नमूना lysis।
सिफारिस: टिस्युलाई एकरूपता गर्दा, टिस्यु पर्याप्त रूपमा एकरूप भएको र आरएनएको रिलिजको व्याख्या गर्न टिस्यु कोषहरू पर्याप्त रूपमा विभाजित भएको सुनिश्चित गर्नुहोस्।
4. eluent सही रूपमा थपिएको छैन।
सिफारिस: RNase-मुक्त ddH पुष्टि गर्नुहोस्2ओ शुद्धीकरण स्तम्भ झिल्लीको बीचमा ड्रपवाइज थपिएको छ।
5. निरपेक्ष इथेनॉलको सही मात्रा बफर RL2 वा बफर RW2 मा थपिएको थिएन।
सिफारिस: निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, Buffer RL2 र Buffer RW2 मा निरपेक्ष इथानोलको सही भोल्युम थप्नुहोस् र किट प्रयोग गर्नु अघि राम्ररी मिलाउनुहोस्।
6. टिस्यु नमूना खुराक उपयुक्त छैन।
सिफारिस: 10-20 मिलीग्राम टिस्यु वा (1-5) × 10 प्रयोग गर्नुहोस्6कोशिकाहरू प्रति 500 μl बफर RL1, अत्यधिक ऊतक प्रयोगले आरएनए निकासी कम गर्न सक्छ।
7. अनुचित इल्युसन भोल्युम वा अपूर्ण उत्सर्जन।
सिफारिस: शुद्धिकरण स्तम्भको इल्युसन भोल्युम 50-200 μl छ;यदि इल्युसन प्रभाव सन्तोषजनक छैन भने, प्रिहेटेड RNase-फ्री ddH थपेपछि कोठाको तापमान प्लेसमेन्ट समय बढाउन सिफारिस गरिन्छ।2ओ, जस्तै ५-१० मिनेटको लागि।
8. शुद्धीकरण स्तम्भमा बफर RW2 धुने पछि इथेनॉल अवशेष हुन्छ।
सिफारिस: यदि बफर RW2 धुने पछि इथेनोल अवशेष छ भने, 1 मिनेटको लागि खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेसन, खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेसन सञ्चालनको लागि समय 2 मिनेटमा बढाउन सकिन्छ, वा शुद्धीकरण स्तम्भलाई कोठाको तापक्रममा 5 मिनेटको लागि राख्न सकिन्छ।
शुद्ध आरएनए बिग्रेको छ
शुद्ध RNA को गुणस्तर नमूनाको संरक्षण, RNase प्रदूषण, र हेरफेर, आदि जस्ता कारकहरूसँग सम्बन्धित छ।
1. टिस्यु नमूनाहरू समयमा राखिएको छैन।
सिफारिस: यदि टिस्यु नमूनाहरू वा कोशिकाहरू सङ्कलन पछि समयमै प्रयोग गरिएन भने, तुरुन्तै -80 डिग्री सेल्सियस वा तरल नाइट्रोजनमा क्रायोप्रिजर्व गर्नुहोस्।आरएनए निकाल्नको लागि, सम्भव भएसम्म भर्खरै लिइएको टिस्यु वा सेल नमूना प्रयोग गर्नुहोस्।
2. टिस्यु नमूनाहरूको दोहोर्याइएको फ्रिज-पघलाउने।
सिफारिस: टिस्यु नमूनाहरू भण्डारण गर्दा, तिनीहरूलाई संरक्षणको लागि सानो टुक्रामा काट्नु राम्रो हुन्छ, र नमूनाको बारम्बार फ्रिज-पघ्नबाट जोगिन र आरएनएको ह्रासबाट बच्न प्रयोग गर्दा एउटा टुक्रा हटाउनु राम्रो हुन्छ।
3. RNase लाई अपरेशनको समयमा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स, मास्क, इत्यादि नलगाइयो वा नगरेको।
सिफारिस: आरएनए निकासी प्रयोगहरू छुट्टै आरएनए हेरफेर कोठाहरूमा उत्कृष्ट प्रदर्शन गरिन्छ र प्रयोग अघि तालिका खाली गरिन्छ।
प्रयोगको क्रममा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स र मास्क लगाउनुहोस् RNase को परिचयको कारणले हुने RNA गिरावटलाई कम गर्न।
4. अभिकर्मकहरू प्रयोगको क्रममा RNase सँग दूषित हुन्छन्।
सिफारिस: सम्बन्धित प्रयोगहरूको लागि नयाँ एनिमल टोटल आरएनए आइसोलेशन किटसँग बदल्नुहोस्।
5. आरएनए हेरफेरमा प्रयोग हुने सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, टिपहरू, आदि RNase बाट दूषित छन्।
सिफारिस: आरएनए निकासीमा प्रयोग गरिएका सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, टिपहरू, पिपेटहरू, आदि सबै RNase-मुक्त छन् भनी पुष्टि गर्नुहोस्।
शुद्ध प्राप्त आरएनएले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूलाई असर गर्छ
शुद्धीकरण स्तम्भ द्वारा शुद्ध गरिएको आरएनए, यदि नुन आयनहरू, प्रोटीन सामग्री धेरै ठूलो छ भने डाउनस्ट्रीम प्रयोगलाई असर गर्नेछ, जस्तै: रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन, उत्तरी ब्लट एट अल।
1. उत्सर्जित आरएनएमा नुन आयन अवशेषहरू हुन्छन्।
सिफारिस: बफर RW2 मा इथानोलको सही मात्रा थपिएको छ भनी पुष्टि गर्नुहोस् र सञ्चालनको लागि संकेत गरिएको केन्द्रापसारक गतिमा २ शुद्धिकरण स्तम्भ धुने कार्य गर्नुहोस्;यदि त्यहाँ कुनै नुन आयन अवशेष छ भने, शुद्धिकरण स्तम्भलाई बफर RW2 मा 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा छोड्नुहोस् र नुन प्रदूषणलाई अधिकतम हटाउन केन्द्रापसारन गर्नुहोस्।
2. उत्सर्जन गरिएको आरएनएमा इथानोल अवशेष।
सिफारिस: पुष्टि गर्नुहोस् कि बफर RW2 धुने पछि, खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेसन अपरेशन अपरेशनको लागि संकेत गरिएको सेन्ट्रीफ्यूगेशन गतिमा गर्नुहोस्, खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेसन अपरेशनको समय 2 मिनेटमा बढाउनुहोस् यदि त्यहाँ इथानोल अवशेष छ भने, वा यसलाई कोठाको तापक्रममा 5 मिनेटको लागि छोड्नुहोस्। आइड्यू।
