प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट प्लस प्लान्ट टोटल आरएनए प्युरिफिकेटन किट पोलिसेकराइड्स र पोलिफेनोलमा समृद्ध बिरुवाको लागि
किट विवरण:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
उच्च polysaccharide र polyphenol कम्पोनेन्टहरू समावेश सामान्य बिरुवा नमूनाहरूबाट कुल RNA शुद्धीकरणको लागि।
polysaccharides र polyphenols को उच्च सामग्री संग बिरुवा नमूनाहरु बाट द्रुत रूपमा उच्च गुणस्तर कुल RNA निकाल्नुहोस्।
DNA-सफाई स्तम्भ प्रयोग गरेर RNase-मुक्त
सरल - सबै कार्यहरू कोठाको तापक्रममा पूरा हुन्छन्
द्रुत-अपरेशन 30 मिनेटमा पूरा गर्न सकिन्छ
सुरक्षित - कुनै जैविक अभिकर्मक प्रयोग गरिएको छैन 
निर्दिष्टीकरणहरू
50 तयारी, 200 तयारी
किटले फोरेजीनद्वारा विकसित स्पिन स्तम्भ र सूत्र प्रयोग गर्दछ, जसले उच्च पोलिसेकराइड वा पोलिफेनोल सामग्री भएका विभिन्न बिरुवाका तन्तुहरूबाट कुशलतापूर्वक उच्च शुद्धता र उच्च गुणस्तरको कुल आरएनए निकाल्न सक्छ।यसले DNA-सफाई स्तम्भ प्रदान गर्दछ जसले सजिलैसँग सुपरनेटान्ट र टिश्यू लाइसेटबाट जीनोमिक डीएनए हटाउन सक्छ।RNA-मात्र स्तम्भले प्रभावकारी रूपमा RNA बाँध्न सक्छ।किटले एकै समयमा ठूलो संख्यामा नमूनाहरू प्रशोधन गर्न सक्छ।
सम्पूर्ण प्रणालीले RNase समावेश गर्दैन, त्यसैले शुद्ध आरएनए अपमानित हुनेछैन।Buffer PRW1 र Buffer PRW2 ले यो सुनिश्चित गर्न सक्छ कि प्राप्त गरिएको RNA प्रोटीन, DNA, आयनहरू र जैविक यौगिकहरूले दूषित छैन।
किट अवयवहरू
| बफर PSL1, बफर PS, बफर PSL2 |
| बफर PRW1, बफर PRW2 |
| RNase-मुक्त ddH2O, DNA-सफाई स्तम्भ |
| RNA-मात्र स्तम्भ |
सुविधाहरू र फाइदाहरू
■ कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा सम्पूर्ण प्रक्रियामा, आइस बाथ र कम तापक्रम सेन्ट्रीफ्युगेसन बिना सञ्चालन।
■ पूरा किट RNase-रहित, RNA को ह्रासको बारेमा चिन्ता लिनु पर्दैन।
■ विशेष गरी पोलीसेकराइड र पोलिफेनोलको बिरुवाको नमूनाबाट आरएनए शुद्धीकरणको लागि उपयुक्त।
■ DNA-सफाई स्तम्भ विशेष रूपमा DNA मा बाँधिएको छ, ताकि किटले DNase थपे बिना जीनोमिक DNA प्रदूषण हटाउन सक्छ।
■ उच्च RNA उपज: RNA-मात्र स्तम्भ र अद्वितीय सूत्रले RNA लाई कुशलतापूर्वक शुद्ध गर्न सक्छ।
■ द्रुत गति: सञ्चालन गर्न सजिलो र 30 मिनेट भित्र पूरा गर्न सकिन्छ।
■ सुरक्षा: कुनै जैविक अभिकर्मक आवश्यक छैन।
■ उच्च गुणस्तर: शुद्ध आरएनए टुक्राहरू उच्च शुद्धताका हुन्छन्, प्रोटीन र अन्य अशुद्धताहरू मुक्त हुन्छन्, र विभिन्न डाउनस्ट्रीम प्रयोगात्मक अनुप्रयोगहरू पूरा गर्न सक्छन्।
उत्पादन मापदण्डहरू
■ डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगहरू: पहिलो-स्ट्र्यान्ड cDNA संश्लेषण, RT-PCR, आणविक क्लोनिंग, उत्तरी ब्लट, आदि।
■ नमूना: पोलिसेकराइड र पोलिफेनोलको ताजा वा जमेको बिरुवाको तन्तु
■ खुराक: 50mg बिरुवाको तन्तु
■ शुद्धीकरण स्तम्भको अधिकतम आरएनए बाध्यकारी क्षमता: 80 μg
■ इलुसन भोल्युम: 50-200 μl
किट आवेदन
यो ताजा वा जमेको बिरुवाको तन्तुका नमूनाहरू (विशेष गरी ताजा बिरुवाको पातको तन्तु) बाट उच्च पोलिसेकराइड र पोलिफेनोल सामग्रीको कुल आरएनए निकासी र शुद्धीकरणको लागि उपयुक्त छ।
कार्य प्रवाह
रेखाचित्र
प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेसन किट प्लसले ५० मिलीग्राम पोलिसेकराइड र पोलिफेनोलका ताजा पातहरू प्रशोधन गर्यो र ५% शुद्ध आरएनए इलेक्ट्रोफोरेसिसद्वारा परीक्षण गरियो।
१: केरा
2: जिन्कगो
३: कपास
4: अनार
भण्डारण र शेल्फ जीवन
यो किट कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा सुक्खा अवस्थामा २४ महिनासम्म भण्डारण गर्न सकिन्छ;यदि यसलाई लामो समयको लागि भण्डारण गर्न आवश्यक छ भने, यसलाई 2-8 ℃ मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।
Buffer PSL1 लाई β-mercaptoethanol थपेपछि 1 महिनाको लागि 4℃ मा राख्न सकिन्छ (यो प्रयोगको एकै समयमा थप्न सिफारिस गरिन्छ)।
स्तम्भ प्लग गरियो
स्तम्भ प्लग गरिसकेपछि, RNA उपज कम हुन्छ वा RNA शुद्ध गर्न असम्भव हुन्छ, र प्राप्त RNA मास कम हुन्छ।
सामान्य कारण विश्लेषण:
1. नमूना विच्छेदहरू पूर्ण रूपमा छैनन्।
नमूना विच्छेदले पूर्ण रूपमा DNA-सफाई स्तम्भ अवरुद्ध गर्दैन, जबकि RNA उपज र गुणस्तरलाई असर गर्छ।जब तपाईंले नमूनाहरू तोड्नु भयो, हामी पर्याप्त तरल नाइट्रोजनमा द्रुत ग्राइन्डिङ सञ्चालन गर्न सिफारिस गर्छौं, नमूना सेल पर्खाल, कोष झिल्ली र अन्य तन्तुहरू कुचल्ने प्रयास गर्नुहोस्।polyol polysaccharides को बिरुवा नमूनाहरु को लागी, हामी तपाईंलाई Plant Total RNA Isolation KIT PLUS प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं।
2. DNA-सफाई स्तम्भको साथ छुट्याइएको नमूना सुपरनेटान्टलाई सक्शन गर्दा, सम्भावित सेल टुक्राटुक अवक्षेपण सास फेर्न सकिन्छ।
लिइएको सेल खण्डित तलछटले RNA-मात्र स्तम्भ निम्त्याउनेछ जुन RNA शोषण सञ्चालन गर्दा अवरुद्ध हुनेछ (चरण 6 हेर्नुहोस्)।कोशिकाको फोहोर चुस्नबाट बच्न यस सुपरनेटेन्टलाई सक्शन गर्दा हामी तपाईंलाई सावधानीपूर्वक सिफारिस गर्छौं।
3. नमूना प्रारम्भिक रकम धेरै धेरै छ।
अत्याधिक नमूना प्रयोगले बफर PSL1 द्वारा अपूर्ण नमूना विखंडन वा अपूर्ण सेल लाइसिसको परिणाम दिन्छ, जसको परिणामस्वरूप शुद्धीकरणको क्रममा शुद्धीकरण स्तम्भको अवरोध हुन्छ।प्लान्ट कुल आरएनए अलगाव किट प्रत्येक एकल शुद्ध सञ्चालन नमूना 50 मिलीग्राम छ।polyol polysaccharides को बिरुवा नमूनाहरु को लागी, हामी तपाईंलाई प्लान्ट टोटल आरएनए अलगाव किट प्लस प्रयास गर्न सिफारिस गर्छौं।
4. सेन्ट्रीफ्यूजको तापक्रम धेरै कम छ।
सम्पूर्ण आरएनए अलगाव र शुद्धिकरण प्रक्रिया कोठाको तापमानमा गरिन्छ (20-25°सी), तरल नाइट्रोजन द्वारा नमूना तन्तु भाँचिएको बाहेक। केही क्रायोजेनिक सेन्ट्रीफ्यूजहरूको तापमान २० भन्दा कम हुन्छ।℃, जसले DNA-सफाई स्तम्भ र/वा RNA-मात्र स्तम्भको अवरोध निम्त्याउन सक्छ।यदि यो हुन्छ भने, सेन्ट्रीफ्यूज तापमान 20-25 मा सेट गर्नुहोस्℃, रलिसिस मिश्रण र/वा इथानोल-जोडिएको सुपरनेटान्टलाई ३७ मा पहिले तताइएको छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।°C.
कुनै आरएनए निकालिएको वा आरएनए उपज कम छैन
त्यहाँ सामान्यतया धेरै कारकहरू छन् जसले रिकभरी दक्षतालाई असर गर्छ, जस्तै: नमूना आरएनए सामग्री, सञ्चालन विधि, इलुसन भोल्युम, आदि।
निम्नानुसार सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:
1. एक आइस बाथ वा कम तापक्रम (4°C) अपरेशनको क्रममा सेन्ट्रीफ्युगेशन गरिएको थियो।
सुझाव: कोठाको तापक्रममा काम गर्नुहोस् (15-25°C) सम्पूर्ण प्रक्रियामा, आइस बाथ र कम तापक्रम सेन्ट्रीफ्युगेसन नगर्नुहोस्।
2. नमूनाको अनुचित संरक्षण वा नमूनाको दीर्घकालीन संरक्षणका कारण आरएनए घटेको छ।
सिफारिस: ताजा सङ्कलन नमूनाहरू द्रुत रूपमा तरल नाइट्रोजनमा जम्मा गर्नुपर्छ, र त्यसपछि लामो समयको लागि -80 डिग्री सेल्सियसमा भण्डारण गर्नुपर्छ, बारम्बार चिसो र नमूनाहरू पग्लनबाट बच्नुहोस्;वा तुरुन्तै नमूनाहरू RNA स्टेबलाइजर RNAlater समाधान (जनावरको नमूनाहरू) मा भिजाउनुहोस्।
3. अपर्याप्त नमूना विखंडन र lysis ले शुद्धीकरण स्तम्भको अवरोध निम्त्याउँछ।
सुझाव: टिस्यु पीस गर्दा, टिस्यु पर्याप्त मात्रामा भुइँमा छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्, र यसलाई द्रुत रूपमा पूर्व-तयार गरिएको बफर PSL1 मा स्थानान्तरण गर्नुहोस् (बिटा-ME को सही अनुपात थपिएको छ भनी पुष्टि गर्नुहोस्, प्रक्रियाको चरण 1 हेर्नुहोस्)।
4.Eluent गलत थपिएको थियो।
सुझाव: RNase-Free ddH2O शुद्धिकरण स्तम्भ झिल्लीको बीचमा ड्रिप गरिएको छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।
5. निरपेक्ष इथेनोलको सही मात्रा बफर PSL2 वा बफर PRW2 मा थपिएको थिएन।
सुझाव: कृपया निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, Buffer PSL2 र Buffer PRW2 मा निरपेक्ष इथानोलको सही भोल्युम थप्नुहोस् र किट प्रयोग गर्नु अघि राम्रोसँग मिलाउनुहोस्।
6. ऊतक नमूना को मात्रा अनुपयुक्त छ।
सुझाव: Buffer PSL1 को 500 μl प्रति 50 mg टिस्यु प्रयोग गर्नुहोस्।धेरै तन्तुको प्रयोगले निकालिएको आरएनएको मात्रा घटाउँछ र परिणामस्वरूप आरएनएको शुद्धता पनि कम हुन्छ।हामी दृढताका साथ सिफारिस गर्दछौं कि प्रारम्भिक नमूना खुराक प्रति आरएनए निकासी अपरेशन 50 मिलीग्राम भन्दा बढी हुनु हुँदैन।
7. अनुपयुक्त इल्युसन भोल्युम वा अपूर्ण इल्युसन।
सुझाव: शुद्धिकरण स्तम्भको एल्युएन्ट भोल्युम 50-200 μl छ;यदि इल्युसन प्रभाव सन्तोषजनक छैन भने, पूर्व तताइएको RNase-Free ddH2O, जस्तै 5-10 मिनेट थपेपछि कोठाको तापक्रममा समय बढाउन सिफारिस गरिन्छ।
8. शुद्धीकरण स्तम्भमा BufferPRW2 ले धुने पछि इथेनॉल अवशेष हुन्छ।
सुझाव: यदि खाली ट्यूब 1 मिनेटको लागि सेन्ट्रीफ्युज गरिएको छ र बफर PRW2 मा धोएपछि पनि इथानोल बाँकी छ भने, तपाईंले खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशनको समय 2 मिनेटमा बढाउन सक्नुहुन्छ, वा अवशिष्ट इथानोललाई पूर्ण रूपमा हटाउनको लागि 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा शुद्धीकरण स्तम्भ राख्न सक्नुहुन्छ।
9. किट गलत प्रयोग भएको थियो।
सुझाव: पोलिफेनोलिक पोलिसेकराइडका बिरुवा नमूनाहरूका लागि, प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट जस्ता सामान्य किटहरू प्रयोग गरेर आदर्श आरएनए नमूनाहरू प्राप्त गर्न सक्षम नहुन सक्छ।हामी तपाईंलाई प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशनकिट प्लस प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं, जुन विशेष रूपमा पोलिफेनोलिक पोलिसैकराइड बिरुवा नमूनाहरूको लागि डिजाइन गरिएको हो।पोलिफेनोल र पोलिसेकराइड प्लान्टको नमूनाबाट आरएनए निकाल्नको लागि विशेष रूपमा विकसित गरिएको किट।
OD260/OD280 मान कम छ
ddH2O सँगको RNA इल्युसन र स्पेक्ट्रोफोटोमिटर रिडिङका लागि प्रयोग गर्दा OD260/OD280 मान कम हुन्छ।हामी तुलनात्मक रूपमा सही OD260/OD280 मानहरू प्राप्त गर्न 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (RNase-Free ddH2O को सट्टा) प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं, पृष्ठ 19 मा "RNA एकाग्रता र शुद्धिकरण परीक्षणहरू" हेर्नुहोस्।
शुद्ध आरएनए घटेको छ
शुद्ध RNA को गुणस्तर नमूना संरक्षण, RNase प्रदूषण, र हेरफेर जस्ता कारकहरूसँग सम्बन्धित छ।
सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:
1. टिस्यु नमूनाहरू सङ्कलन पछि समय मा भण्डारण गरिएको थिएन।
सिफारिस: यदि टिस्यु नमूनाहरू सङ्कलन पछि समयमै प्रयोग गरिएन भने, कृपया तिनीहरूलाई कम तापक्रममा तुरुन्तै तरल नाइट्रोजनमा भण्डार गर्नुहोस् वा तरल नाइट्रोजनमा द्रुत फ्रिज गरेपछि तिनीहरूलाई -80 डिग्री सेल्सियसमा दीर्घकालीन भण्डारणको लागि स्थानान्तरण गर्नुहोस्, वा तुरुन्तै नमूनाहरूलाई RNA स्टेबलाइजर RNAlater समाधान (जनावरको नमूनाहरू) मा डुबाउनुहोस्।आरएनए निकासीको लागि, ताजा सङ्कलन टिस्यु नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।
2. बारम्बार चिसो र टिस्यु नमूनाहरू पग्लने।
सुझाव: टिस्यु नमूनाहरू भण्डारण गर्दा, तिनीहरूलाई संरक्षणको लागि सानो टुक्रामा काट्नु राम्रो हुन्छ, र नमूनाहरू बारम्बार चिसो र पग्लिँदा हुने RNA को ह्रासबाट बच्न प्रयोग गर्दा तिनीहरूको एक भाग निकाल्नुहोस्।
3.RNase अपरेशन कोठामा पेश गरिएको छ वा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स, मास्क, इत्यादि नलगाइएको छ।
सुझाव: RNA निकासी प्रयोगहरू छुट्टाछुट्टै आरएनए अपरेशनहरूमा उत्कृष्ट प्रदर्शन गरिन्छ, र प्रयोगशाला तालिका प्रयोग गर्नु अघि सफा गरिनुपर्छ, र प्रयोगको क्रममा डिस्पोजेबल पन्जा र मास्क लगाउनु पर्छ ताकि RNase को परिचयले सबैभन्दा ठूलो हदसम्म RNA गिरावट हुनबाट जोगिन।
4. प्रयोगको क्रममा RNase द्वारा अभिकर्मक दूषित हुन्छ।
सुझाव: सम्बन्धित प्रयोगहरूको लागि बिरुवाको कुल आरएनए निकासी किटहरूको नयाँ शृङ्खलासँग बदल्नुहोस्।
5. RNA हेरफेरको लागि प्रयोग हुने सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू र पिपेट टिपहरू RNase बाट दूषित छन्।
सुझाव: आरएनए निकासीमा प्रयोग हुने सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, पिपेट टिप्स, पिपेटहरू, आदि सबै RNase-मुक्त छन् भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।
निर्देशन पुस्तिकाहरू:
प्लान्ट कुल आरएनए अलगाव किट प्लस निर्देशन पुस्तिका
