सेल कुल आरएनए अलगाव किट सेलबाट कुल आरएनए अलगाव शुद्धीकरण किटहरू
किट विवरण:
उच्च शुद्ध र उच्च गुणस्तरको कुल आरएनए विभिन्न कल्चर गरिएको सेलहरूबाट ११ मिनेटमा प्राप्त गर्न सकिन्छ।
RNase-मुक्त
कोठाको तापक्रम (15-25 ℃) मा संचालित
DNA-सफाई स्तम्भ संग
उच्च आरएनए उपज
द्रुत: 11 मिनेटमा निकासी समाप्त गर्नुहोस्
सुरक्षा: कुनै पनि जैविक रसायन छैन
विवरण
यो किटले फोरेजीन द्वारा विकसित स्पिन स्तम्भ र सूत्र प्रयोग गर्दछ, जसले कुशलतापूर्वक 96, 24, 12, र 6-वेल प्लेटहरूमा कल्चर गरिएका कक्षहरूबाट उच्च-शुद्धता र उच्च-गुणस्तरको कुल आरएनए निकाल्न सक्छ।
किटले एक कुशल DNA-सफाई स्तम्भ प्रदान गर्दछ, जसले सजिलैसँग सुपरनेटान्ट र सेल लाइसेटलाई अलग गर्न, बाँध्न र जीनोमिक DNA हटाउन सक्छ।सञ्चालन सरल र समय बचत छ.
The RNA-मात्र स्तम्भले RNA लाई एक अद्वितीय सूत्रसँग कुशलतापूर्वक बाँध्न सक्छ।नमूनाहरूको ठूलो संख्या एकै समयमा प्रशोधन गर्न सकिन्छ।
किट अवयवहरू
| किट संरचना | RE-03111 | RE-03114 |
| ५० टि | २०० टि | |
| बफर cRL1* | 25 एमएल | 100 एमएल |
| बफर cRL2 | 15 एमएल | ६० एमएल |
| बफर RW1* | 25 एमएल | 100 एमएल |
| बफर RW2 | 24 एमएल | ९६ एमएल |
| RNase-मुक्त ddH2O | १० एमएल | 40 एमएल |
| RNA-मात्र स्तम्भ | 50 | २०० |
| DNA-सफाई स्तम्भ | 50 | २०० |
| निर्देशन | 1 | 1 |
*कृपया पञ्जा लगाउनुहोस् र अपरेशनको क्रममा सुरक्षात्मक उपायहरू लिनुहोस् किनकि बफर सीआरएल१ र बफर आरडब्लू१ मा चिढाउने चाओट्रोपिक लवण हुन्छन्।
सुविधाहरू र फाइदाहरू
■ सम्पूर्ण प्रक्रिया कोठाको तापक्रममा (१५-२५ डिग्री सेल्सियस), आइस बाथ र कम तापक्रम सेन्ट्रीफ्युगेसन बिना सञ्चालन गरिन्छ।
■ सम्पूर्ण किट RNase-मुक्त छ, RNA को ह्रासको बारेमा चिन्ता लिनु पर्दैन।
■ DNA-सफाई स्तम्भले DNA लाई विशेष रूपमा बाँध्छ, ताकि किटले अतिरिक्त DNase थप नगरीकन जीनोमिक DNA प्रदूषण हटाउन सक्छ।
■ उच्च RNA उपज: RNA-मात्र स्तम्भ र अद्वितीय सूत्रले RNA लाई कुशलतापूर्वक शुद्ध गर्न सक्छ।
■ द्रुत गति: सञ्चालन गर्न सजिलो र 11 मिनेटमा पूरा गर्न सकिन्छ।
■ सुरक्षा: कुनै जैविक अभिकर्मक आवश्यक छैन।
■ उच्च गुणस्तर: शुद्ध आरएनए उच्च शुद्धताको हुन्छ, प्रोटिन र अन्य अशुद्धताहरू रहित हुन्छ, र विभिन्न पछिका प्रयोगहरू पूरा गर्न सक्छ।
किट आवेदन
यो 96, 24, 12, र 6-वेल प्लेटहरूमा कल्चर्ड सेलहरूबाट कुल आरएनएको निकासी र शुद्धीकरणको लागि उपयुक्त छ।
कार्य प्रवाह
रेखाचित्र
सेल टोटल आरएनए आइसोलेसन किटको एगारोज जेल ब्याट्री रेखाचित्रले माथिका विभिन्न संख्याको कक्षहरू, 20μl भोल्युम इलुसन, 2μl शुद्ध कुल आरएनए 1% लिनुहोस्।
भण्डारण र शेल्फ जीवन
किटलाई कोठाको तापक्रम (१५–२५ ℃) वा २–८ ℃ लामो समय (२४ महिना) को लागि १२ महिनासम्म भण्डारण गर्न सकिन्छ।
बफर cRL1 2-hydroxy-1-ethanethiol (वैकल्पिक) थपे पछि 1 महिनाको लागि 4 ℃ मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।
आरएनए निकालिएको छैन वा आरएनए उपज कम छ
त्यहाँ प्रायः विभिन्न कारकहरू छन् जसले रिकभरी दक्षतालाई असर गर्छ, जस्तै: टिश्यू नमूना आरएनए सामग्री, सञ्चालनको विधि, इलुसन भोल्युम, आदि।
1. आइस बाथ वा क्रायोजेनिक (4 डिग्री सेल्सियस) सेन्ट्रीफ्युगेशन सञ्चालनको क्रममा गरिएको थियो।
सिफारिस: सम्पूर्ण प्रक्रियामा कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा काम गर्नुहोस्, कम तापक्रममा आइस बाथ र सेन्ट्रीफ्यूज नगर्नुहोस्।
2. अनुचित नमूना संरक्षण वा अत्यधिक नमूना भण्डारण समय।
सिफारिस: नमूनाहरू -80 डिग्री सेल्सियसमा भण्डार गर्नुहोस् वा तरल नाइट्रोजनमा फ्रिज गर्नुहोस् र दोहोर्याइएको फ्रिज-थउ प्रयोगबाट बच्नुहोस्;आरएनए निकासीका लागि ताजा टिस्यु वा कल्चर गरिएको सेलहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।
3. अपर्याप्त नमूना lysis।
सिफारिस: टिस्युलाई एकरूपता गर्दा, टिस्यु पर्याप्त रूपमा एकरूप भएको र आरएनएको रिलिजको व्याख्या गर्न टिस्यु कोषहरू पर्याप्त रूपमा विभाजित भएको सुनिश्चित गर्नुहोस्।
4. eluent सही रूपमा थपिएको छैन।
सिफारिस: RNase-मुक्त ddH पुष्टि गर्नुहोस्2ओ शुद्धीकरण स्तम्भ झिल्लीको बीचमा ड्रपवाइज थपिएको छ।
5. निरपेक्ष इथेनॉलको सही मात्रा बफर RL2 वा बफर RW2 मा थपिएको थिएन।
सिफारिस: निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, Buffer RL2 र Buffer RW2 मा निरपेक्ष इथानोलको सही भोल्युम थप्नुहोस् र किट प्रयोग गर्नु अघि राम्ररी मिलाउनुहोस्।
6. टिस्यु नमूना खुराक उपयुक्त छैन।
सिफारिस: 10-20 मिलीग्राम टिस्यु वा (1-5) × 10 प्रयोग गर्नुहोस्6कोशिकाहरू प्रति 500 μl बफर RL1, अत्यधिक ऊतक प्रयोगले आरएनए निकासी कम गर्न सक्छ।
7. अनुचित इल्युसन भोल्युम वा अपूर्ण उत्सर्जन।
सिफारिस: शुद्धिकरण स्तम्भको इल्युसन भोल्युम 50-200 μl छ;यदि इल्युसन प्रभाव सन्तोषजनक छैन भने, प्रिहेटेड RNase-फ्री ddH थपेपछि कोठाको तापमान प्लेसमेन्ट समय बढाउन सिफारिस गरिन्छ।2ओ, जस्तै ५-१० मिनेटको लागि।
8. शुद्धीकरण स्तम्भमा बफर RW2 धुने पछि इथेनॉल अवशेष हुन्छ।
सिफारिस: यदि बफर RW2 धुने पछि इथेनोल अवशेष छ भने, 1 मिनेटको लागि खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेसन, खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेसन सञ्चालनको लागि समय 2 मिनेटमा बढाउन सकिन्छ, वा शुद्धीकरण स्तम्भलाई कोठाको तापक्रममा 5 मिनेटको लागि राख्न सकिन्छ।
शुद्ध आरएनए बिग्रेको छ
शुद्ध RNA को गुणस्तर नमूनाको संरक्षण, RNase प्रदूषण, र हेरफेर, आदि जस्ता कारकहरूसँग सम्बन्धित छ।
1. टिस्यु नमूनाहरू समयमा राखिएको छैन।
सिफारिस: यदि टिस्यु नमूनाहरू वा कोशिकाहरू सङ्कलन पछि समयमै प्रयोग गरिएन भने, तुरुन्तै -80 डिग्री सेल्सियस वा तरल नाइट्रोजनमा क्रायोप्रिजर्व गर्नुहोस्।आरएनए निकाल्नको लागि, सम्भव भएसम्म भर्खरै लिइएको टिस्यु वा सेल नमूना प्रयोग गर्नुहोस्।
2. टिस्यु नमूनाहरूको दोहोर्याइएको फ्रिज-पघलाउने।
सिफारिस: टिस्यु नमूनाहरू भण्डारण गर्दा, तिनीहरूलाई संरक्षणको लागि सानो टुक्रामा काट्नु राम्रो हुन्छ, र नमूनाको बारम्बार फ्रिज-पघ्नबाट जोगिन र आरएनएको ह्रासबाट बच्न प्रयोग गर्दा एउटा टुक्रा हटाउनु राम्रो हुन्छ।
3. RNase लाई अपरेशनको समयमा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स, मास्क, इत्यादि नलगाइयो वा नगरेको।
सिफारिस: आरएनए निकासी प्रयोगहरू छुट्टै आरएनए हेरफेर कोठाहरूमा उत्कृष्ट प्रदर्शन गरिन्छ र प्रयोग अघि तालिका खाली गरिन्छ।
प्रयोगको क्रममा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स र मास्क लगाउनुहोस् RNase को परिचयको कारणले हुने RNA गिरावटलाई कम गर्न।
4. अभिकर्मकहरू प्रयोगको क्रममा RNase सँग दूषित हुन्छन्।
सिफारिस: सम्बन्धित प्रयोगहरूको लागि नयाँ एनिमल टोटल आरएनए आइसोलेशन किटसँग बदल्नुहोस्।
5. आरएनए हेरफेरमा प्रयोग हुने सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, टिपहरू, आदि RNase बाट दूषित छन्।
सिफारिस: आरएनए निकासीमा प्रयोग गरिएका सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, टिपहरू, पिपेटहरू, आदि सबै RNase-मुक्त छन् भनी पुष्टि गर्नुहोस्।
शुद्ध प्राप्त आरएनएले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूलाई असर गर्छ
शुद्धीकरण स्तम्भ द्वारा शुद्ध गरिएको आरएनए, यदि नुन आयनहरू, प्रोटीन सामग्री धेरै ठूलो छ भने डाउनस्ट्रीम प्रयोगलाई असर गर्नेछ, जस्तै: रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन, उत्तरी ब्लट एट अल।
1. उत्सर्जित आरएनएमा नुन आयन अवशेषहरू हुन्छन्।
सिफारिस: बफर RW2 मा इथानोलको सही मात्रा थपिएको छ भनी पुष्टि गर्नुहोस् र सञ्चालनको लागि संकेत गरिएको केन्द्रापसारक गतिमा २ शुद्धिकरण स्तम्भ धुने कार्य गर्नुहोस्;यदि त्यहाँ कुनै नुन आयन अवशेष छ भने, शुद्धिकरण स्तम्भलाई बफर RW2 मा 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा छोड्नुहोस् र नुन प्रदूषणलाई अधिकतम हटाउन केन्द्रापसारन गर्नुहोस्।
2. उत्सर्जन गरिएको आरएनएमा इथानोल अवशेष।
सिफारिस: बफर RW2 धुने पछि, अपरेशनको लागि संकेत गरिएको सेन्ट्रीफ्यूगेसन गतिमा खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशन अपरेशन गर्नुहोस्, यदि त्यहाँ अझै पनि इथेनॉल अवशेष छ भने खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेसन सञ्चालनको समय 2 मिनेटमा बढाउनुहोस्, वा कोठाको तापक्रममा 5 मिटर छोड्नुहोस्।
