सेल डाइरेक्ट RT qPCR किट - SYBR GREEN I प्रत्यक्ष सेल लाइसिस सेल तयार एक-चरण qRT-PCR किटहरू
विवरणहरू
यो किटले RT-qPCR प्रतिक्रियाहरूको लागि कल्चर्ड सेल नमूनाहरूबाट आरएनएलाई द्रुत रूपमा रिलिज गर्न सक्ने अद्वितीय lysis बफर प्रणाली प्रयोग गर्दछ, जसले गर्दा समय-उपभोग गर्ने र मेहनती RNA शुद्धिकरण प्रक्रियालाई हटाउँछ।आरएनए टेम्प्लेट मात्र 7 मिनेटमा प्राप्त गर्न सकिन्छ।५×प्रत्यक्ष RT मिक्स र 2×किटद्वारा प्रदान गरिएको प्रत्यक्ष qPCR Mix-SYBR अभिकर्मकहरूले वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR परिणामहरू छिटो र प्रभावकारी रूपमा प्राप्त गर्न सक्छन्।
5×प्रत्यक्ष RT मिक्स र 2×प्रत्यक्ष qPCR Mix-SYBR सँग बलियो अवरोधक सहिष्णुता छ, र नमूनाहरूको lysate RT-qPCR को लागि टेम्प्लेटको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।यो किटमा अद्वितीय आरएनए उच्च-सम्पर्क फोरेजीन रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज, र हट D-Taq DNA पोलिमरेज, dNTPs, MgCl समावेश छ।2, प्रतिक्रिया बफर, PCR अनुकूलक र स्थिरता।
निर्दिष्टीकरणहरू
२००×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
किट अवयवहरू
| भाग I | बफर CL |
| फोरजीन प्रोटीज प्लस II | |
| बफर ST | |
| भाग II | डीएनए इरेजर |
| 5× प्रत्यक्ष RT मिक्स | |
| 2× प्रत्यक्ष qPCR मिक्स-SYBR | |
| 50× ROX सन्दर्भ डाई | |
| RNase-मुक्त ddH2O | |
| निर्देशनहरू | |
सुविधाहरू र फाइदाहरू
■सरल र प्रभावकारी: सेल डाइरेक्ट आरटी प्रविधिको साथ, आरएनए नमूनाहरू मात्र 7 मिनेटमा प्राप्त गर्न सकिन्छ।
■ नमूनाको माग सानो छ, जति कम 10 कक्षहरू परीक्षण गर्न सकिन्छ।
■ उच्च थ्रुपुट: यसले 384, 96, 24, 12, 6-वेल प्लेटहरूमा कल्चर गरिएका कक्षहरूमा आरएनए छिट्टै पत्ता लगाउन सक्छ।
■ DNA इरेजरले रिलिज भएको जीनोमहरू तुरुन्तै हटाउन सक्छ, त्यसपछिको प्रयोगात्मक नतिजाहरूमा प्रभावलाई धेरै कम गर्न सक्छ।
■ अप्टिमाइज गरिएको RT र qPCR प्रणालीले दुई-चरण RT-PCR रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सनलाई अझ प्रभावकारी बनाउँछ र PCR थप विशिष्ट, र RT-qPCR प्रतिक्रिया अवरोधकहरूलाई थप प्रतिरोधी बनाउँछ।
किट आवेदन
आवेदनको दायरा: संवर्धित कक्षहरू।
- नमूना लिसिस द्वारा जारी गरिएको आरएनए: यो किटको RT-qPCR टेम्प्लेटमा मात्र लागू हुन्छ।
- किटलाई निम्न उद्देश्यका लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ: जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, siRNA- मध्यस्थ जीन साइलेन्सिङ प्रभावको प्रमाणीकरण, औषधि परीक्षण, आदि।
रेखाचित्र
भण्डारण र शेल्फ जीवन
यस किटको भाग I 4℃ मा भण्डारण गर्नुपर्छ;भाग II -20 ℃ मा भण्डारण गर्नुपर्छ।
Foregene Protease Plus II 4 मा भण्डारण गर्नुपर्छ℃, -20 ℃ मा फ्रिज नगर्नुहोस्।
अभिकर्मक २×प्रत्यक्ष qPCR मिक्स-SYBR -20 मा भण्डारण गर्नुपर्छ℃अँध्यारोमा;यदि बारम्बार प्रयोग गरिन्छ भने, यसलाई 4 मा पनि भण्डारण गर्न सकिन्छ℃ छोटो अवधिको भण्डारणको लागि (१० दिन भित्र प्रयोग गर्नुहोस्)।
वास्तविक समय पीसीआर प्राइमर डिजाइन सिद्धान्तहरू
फर्वार्ड प्राइमर र रिभर्स प्राइमर
वास्तविक समय पीसीआर को लागी, प्राइमर डिजाइन धेरै महत्त्वपूर्ण छ।प्राइमरहरू PCR प्रवर्धनको विशिष्टता र दक्षतासँग सम्बन्धित छन्, र निम्न सिद्धान्तहरूको सन्दर्भमा डिजाइन गर्न सकिन्छ:
प्राइमर लम्बाइ: 18-30bp।
GC सामग्री: 40-60%।
Tm मान: प्राइमर डिजाइन सफ्टवेयर, जस्तै प्राइमर 5, प्राइमर को Tm मान दिन सक्छ।अपस्ट्रिम र डाउनस्ट्रीम प्राइमरहरूको Tm मानहरू सकेसम्म नजिक हुनुपर्छ।Tm गणना सूत्र पनि प्रयोग गर्न सकिन्छ: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)।PCR प्रदर्शन गर्दा, 5 °C को प्राइमर Tm मान भन्दा कम तापमान सामान्यतया annealing तापमान को रूप मा चयन गरिन्छ (annealing तापमान मा समान वृद्धि PCR प्रतिक्रिया को विशिष्टता बढाउन सक्छ)।
प्राइमर र पीसीआर उत्पादनहरू:
डिजाइन प्राइमर PCR प्रवर्धन उत्पादन लम्बाइ प्राथमिकता 100-150bp छ।
टेम्प्लेटको माध्यमिक संरचनात्मक क्षेत्रमा डिजाइन प्राइमरहरू सम्भव भएसम्म बेवास्ता गर्नुपर्छ।
अपस्ट्रिम र डाउनस्ट्रीम प्राइमरहरूको 3′ छेउहरू बीच 2 वा बढी पूरक आधारहरूको गठनबाट बच्नुहोस्।
प्राइमर 3′ टर्मिनल आधार 3 अतिरिक्त लगातार G वा C संग उपस्थित हुन सक्दैन।
प्राइमरहरू आफैंमा पूरक संरचनाहरू हुन सक्दैनन्, अन्यथा हेयरपिन संरचना बनाइनेछ, जसले PCR प्रवर्धनलाई असर गर्छ।
ATCG लाई प्राइमर अनुक्रममा सकेसम्म समान रूपमा वितरण गरिनुपर्छ, र 3′ टर्मिनल आधारलाई T को रूपमा बेवास्ता गर्नुपर्छ।
परिशिष्ट १: सेल डाइरेक्ट RT-qPCR किट कम्पोनेन्ट सप्लिमेन्ट प्याक
1.सेल लाइसिस समाधान
|
| |||
| किट अवयवहरू (24-वेल लिसिस प्रणाली / राम्रो) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| १०० टि | ५०० टि | ||
| भागम | बफर CL | 20 मिलीलीटर | 100 मिलीलीटर |
| फोरजीन प्रोटीज प्लस II | 400 μl | १ मिली × २ | |
| बफर ST | १ मिली × २ | १० एमएल | |
| भागII | डीएनए इरेजर | 400 μl | १ मिली × २ |
2.RT मिक्स
|
| |
| किट अवयवहरू (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01011-B1 |
| २०० टि | |
| 5× प्रत्यक्ष RT मिक्स | 800 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | १.७ मिली × २ |
|
| ||
| किट अवयवहरू (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| २०० टि | १००० टि | |
| 2× प्रत्यक्ष qPCR मिक्स-SYBR | १ मिली × २ | १.७ मिली × ६ |
| 50× ROX सन्दर्भ डाई | 40 μl | 200 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | १.७ एमएल | १० एमएल |
निर्देशन पुस्तिकाहरू:
