वास्तविक समय PCR Easyᵀᴹ-Takman
किट विवरण:
◮प्रयोगात्मक त्रुटि र सञ्चालन समय कम गर्न सरल—२× पीसीआर मिक्स
◮विशिष्ट-अनुकूलित बफर र हट-स्टार्ट Taq इन्जाइमले गैर-विशिष्ट प्रवर्धन र प्राइमर डाइमर गठनलाई रोक्न सक्छ।
◮उच्च संवेदनशीलता - टेम्प्लेटको कम प्रतिलिपिहरू पत्ता लगाउन सक्छ
◮राम्रो बहुमुखी प्रतिभा - धेरै वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR उपकरणहरूसँग उपयुक्त
किट विवरण
2X वास्तविक पीसीआर सजिलोTMMix-Takman वास्तविक समय PCR Easy द्वारा प्रदान गरिएकोTM- Taqman किट एक नयाँ प्रिमिक्स प्रणाली हो जसले वास्तविक समय PCR प्रवर्द्धन प्रतिक्रियाहरूको लागि विशिष्ट फ्लोरोसेन्ट प्रोबहरू प्रयोग गर्दछ, जसले उत्पादन विशिष्टता र प्रतिक्रिया संवेदनशीलतालाई धेरै सुधार गर्न सक्छ।ROX आन्तरिक नियन्त्रण डाईको रूपमा प्रदान गरिएको छ।
2X वास्तविक पीसीआर सजिलोTMMix-Takman मा Foregene को अद्वितीय हट-स्टार्ट Taq DNA पोलिमरेज समावेश छ।साधारण Taq इन्जाइमहरूको तुलनामा, यसमा उच्च प्रवर्धन दक्षता, बलियो विशिष्ट प्रवर्धन क्षमता र कम बेमेल दरको फाइदाहरू छन्।यसले गैर-विशिष्ट प्रवर्धन कम गर्न र PCR को शुद्धता सुधार गर्न सक्छ।
निर्दिष्टीकरणहरू
| वास्तविक समय पीसीआर सजिलोTM- ताकमान | ||||
| किट संरचना (20μl प्रणाली) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| २×वास्तविक पीसीआरसजिलोTMमिश्रण- ताकमान | 1 मिली ×2 | 1.7 एमएल ×3 | 1.7 एमएल ×6 | 1.7 एमएल ×12 |
| 20×ROX सन्दर्भ डाई | 200 μl | ०.५ml | १ मिलि | १ मिली × २ |
| DNase-मुक्त ddH2O | १.७ एमएल | 1.7 एमएल ×2 | १० एमएल | 20 मिलीलीटर |
| Iनिर्देशन | 1 | 1 | 1 | १ |
सुविधाहरू र फाइदाहरू
■ प्रयोगात्मक त्रुटि र सञ्चालन समय कम गर्न सरल—2X PCR मिक्स
■ विशिष्ट-अनुकूलित बफर र हट-स्टार्ट Taq इन्जाइमले गैर-विशिष्ट प्रवर्धन र प्राइमर डाइमर गठनलाई रोक्न सक्छ।
■ उच्च संवेदनशीलता — टेम्प्लेटको कम प्रतिलिपिहरू पत्ता लगाउन सक्छ
■ राम्रो बहुमुखी प्रतिभा — धेरै वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR उपकरणहरूसँग मिल्दो
किट आवेदन
qPCR विश्लेषण
कार्य प्रवाह
ग्राफिक
भण्डारण र शेल्फ जीवन
यो किटलाई प्रकाशबाट टाढा राख्नु पर्छ र -20 ℃ मा भण्डारण गर्नुपर्छ।यदि बारम्बार प्रयोग गरिन्छ भने, यसलाई छोटो अवधि (10 दिन) को लागि 4℃ मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।
कुनै प्रवर्धन संकेतहरू छैनन्
1. किटमा रहेको Taq DNA पोलिमरेजले किटको अनुचित भण्डारण वा म्याद सकिएको कारणले आफ्नो गतिविधि गुमाउँछ।
सिफारिस: किटको भण्डारण अवस्थाहरू पुष्टि गर्नुहोस्;PCR प्रणालीमा Taq DNA पोलिमरेजको उपयुक्त मात्रा पुन: थप्नुहोस् वा सम्बन्धित प्रयोगहरूको लागि नयाँ वास्तविक समय PCR किट खरिद गर्नुहोस्।
2. DNA टेम्प्लेटमा Taq DNA Polymerase को धेरै अवरोधकहरू छन्।
सुझाव: टेम्प्लेट पुन: शुद्ध गर्नुहोस् वा प्रयोग गरिएको टेम्प्लेटको मात्रा घटाउनुहोस्।
3.Mg2+ एकाग्रता उपयुक्त छैन।
सिफारिस: हामीले प्रदान गर्ने २× वास्तविक पीसीआर मिक्सको Mg2+ एकाग्रता 3.5mM हो।यद्यपि, केही विशेष प्राइमर र टेम्प्लेटहरूको लागि, Mg2+ एकाग्रता उच्च हुन सक्छ।त्यसकारण, तपाईले Mg2+ एकाग्रतालाई अनुकूलन गर्न MgCl2 लाई सिधै थप्न सक्नुहुन्छ।अनुकूलनका लागि प्रत्येक पटक Mg2+ 0.5mM बढाउन सिफारिस गरिन्छ।
4. PCR प्रवर्धन अवस्थाहरू उपयुक्त छैनन्, र प्राइमर अनुक्रम वा एकाग्रता अनुचित छ।
सुझाव: प्राइमर अनुक्रमको शुद्धता पुष्टि गर्नुहोस् र प्राइमर बिग्रेको छैन;यदि एम्प्लीफिकेशन सिग्नल राम्रो छैन भने, एनेलिङको तापक्रम घटाउने प्रयास गर्नुहोस् र प्राइमरको एकाग्रतालाई उचित रूपमा समायोजन गर्नुहोस्।
5. टेम्प्लेट को मात्रा धेरै कम वा धेरै छ।
सिफारिस: टेम्प्लेट लाइनराइजेसन ग्रेडिएन्ट डिलुसन प्रदर्शन गर्नुहोस्, र रियल टाइम पीसीआर प्रयोगको लागि उत्तम पीसीआर प्रभावको साथ टेम्प्लेट एकाग्रता चयन गर्नुहोस्।
NTC को धेरै उच्च प्रतिदीप्ति मान छ
1. अभिकर्मक दूषित अपरेशन को समयमा कारण।
सिफारिस: वास्तविक समय पीसीआर प्रयोगहरूको लागि नयाँ अभिकर्मकहरूसँग बदल्नुहोस्।
2. PCR प्रतिक्रिया प्रणालीको तयारीको क्रममा प्रदूषण भयो।
सिफारिस: सञ्चालन गर्दा आवश्यक सुरक्षात्मक उपायहरू लिनुहोस्, जस्तै: लेटेक्स पन्जा लगाउने, फिल्टरको साथ पिपेट टिप प्रयोग गर्ने, आदि।
3. प्राइमरहरू डिग्रेड भएका छन्, र प्राइमरहरूको ह्रासले गैर-विशिष्ट प्रवर्धनको कारण हुनेछ।
सुझाव: प्राइमरहरू बिग्रेको छ कि छैन भनी पत्ता लगाउन SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेसिस प्रयोग गर्नुहोस्, र वास्तविक समय PCR प्रयोगहरूको लागि तिनीहरूलाई नयाँ प्राइमरहरूसँग बदल्नुहोस्।
प्राइमर डाइमर वा गैर-विशिष्ट प्रवर्धन
1. Mg2+ एकाग्रता उपयुक्त छैन।
सिफारिस: हामीले प्रदान गर्ने २× वास्तविक PCR EasyTM मिक्सको Mg2+ एकाग्रता 3.5 mM हो।यद्यपि, केही विशेष प्राइमर र टेम्प्लेटहरूको लागि, Mg2+ एकाग्रता उच्च हुन सक्छ।त्यसकारण, तपाईले Mg2+ एकाग्रतालाई अनुकूलन गर्न MgCl2 लाई सिधै थप्न सक्नुहुन्छ।अनुकूलनका लागि प्रत्येक पटक Mg2+ 0.5mM बढाउन सिफारिस गरिन्छ।
2. PCR annealing तापमान धेरै कम छ।
सुझाव: PCR annealing तापमान 1 ℃ वा 2 ℃ प्रत्येक पटक बढाउनुहोस्।
3. PCR उत्पादन धेरै लामो छ।
सिफारिस: वास्तविक समय PCR उत्पादनको लम्बाइ 100-150bp को बीचमा हुनुपर्छ, 500bp भन्दा बढी होइन।
4. प्राइमरहरू डिग्रेड भएका छन्, र प्राइमरहरूको ह्रासले विशिष्ट प्रवर्धनको उपस्थितिमा नेतृत्व गर्नेछ।
सुझाव: प्राइमरहरू बिग्रेको छ कि छैन भनी पत्ता लगाउन SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेसिस प्रयोग गर्नुहोस्, र वास्तविक समय PCR प्रयोगहरूको लागि तिनीहरूलाई नयाँ प्राइमरहरूसँग बदल्नुहोस्।
5. PCR प्रणाली अनुचित छ, वा प्रणाली धेरै सानो छ।
सुझाव: PCR प्रतिक्रिया प्रणाली धेरै सानो छ पत्ता लगाउने शुद्धता कम हुनेछ।रियल टाइम पीसीआर प्रयोग पुन: चलाउनको लागि मात्रात्मक पीसीआर उपकरणद्वारा सिफारिस गरिएको प्रतिक्रिया प्रणाली प्रयोग गर्नु उत्तम हुन्छ।
परिमाणात्मक मानहरूको खराब पुनरावृत्ति
1. उपकरण खराब छ।
सुझाव: त्यहाँ उपकरणको प्रत्येक PCR प्वाल बीच त्रुटिहरू हुन सक्छ, तापमान व्यवस्थापन वा पत्ता लगाउने समयमा खराब प्रजनन क्षमताको परिणामस्वरूप।कृपया सम्बन्धित उपकरणको निर्देशन अनुसार जाँच गर्नुहोस्।
2. नमूना शुद्धता राम्रो छैन।
सिफारिस: अशुद्ध नमूनाहरूले प्रयोगको कमजोर पुनरुत्पादनको नेतृत्व गर्नेछ, जसमा टेम्प्लेट र प्राइमरहरूको शुद्धता समावेश छ।यो टेम्प्लेट पुन: शुद्ध गर्न सबै भन्दा राम्रो छ, र प्राइमरहरू SDS-PAGE द्वारा राम्रोसँग शुद्ध हुन्छन्।
3. PCR प्रणाली तयारी र भण्डारण समय धेरै लामो छ।
सुझाव: तयारी पछि तुरुन्तै पीसीआर प्रयोगको लागि वास्तविक समय पीसीआर प्रणाली प्रयोग गर्नुहोस्, र यसलाई धेरै लामो समयसम्म नछोड्नुहोस्।
4. PCR प्रवर्धन अवस्थाहरू उपयुक्त छैनन्, र प्राइमर अनुक्रम वा एकाग्रता अनुचित छ।
सुझाव: प्राइमर अनुक्रमको शुद्धता पुष्टि गर्नुहोस् र प्राइमर बिग्रेको छैन;यदि एम्प्लीफिकेशन सिग्नल राम्रो छैन भने, एनेलिङको तापक्रम घटाउने प्रयास गर्नुहोस् र प्राइमरको एकाग्रतालाई उचित रूपमा समायोजन गर्नुहोस्।
5. PCR प्रणाली अनुचित छ, वा प्रणाली धेरै सानो छ।
सुझाव: PCR प्रतिक्रिया प्रणाली धेरै सानो छ पत्ता लगाउने शुद्धता कम हुनेछ।रियल टाइम पीसीआर प्रयोग पुन: चलाउनको लागि मात्रात्मक पीसीआर उपकरणद्वारा सिफारिस गरिएको प्रतिक्रिया प्रणाली प्रयोग गर्नु उत्तम हुन्छ।
