प्रत्यक्ष RT-qPCR किट II
किट विवरण:
◮Direct RT-qPCR Kit, Foreasy Reverse Transcriptase र Foreasy HS Taq DNA Polymerase को उपयोग गरेर Foregene द्वारा विकसित, अद्वितीय प्रतिक्रिया बफर संग, यो किट बलियो प्रतिरोध र अनुकूलता संग बनाउँछ, र यसले प्रत्यक्ष रूपमा प्रतिक्रिया परीक्षण Foregene Lysis प्रणाली टेम्प्लेट रूपमा प्रयोग गर्न सक्छ।यो किटले COVID-19 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किट र अन्य रोगजनक ब्याक्टेरिया न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किट विकासको लागि आवेदन दिन सक्छ।
विवरण
प्रत्यक्ष RT-qPCR किटले छुट्टै प्याकेज गरिएको RT-qPCR बफर, उच्च कुशल HS Taq DNA पोलिमरेज प्रदान गर्दछ।र Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),साधारण प्रमाणीकरण भित्र, ब्याक-एन्ड किटहरू र प्रणाली समायोजनको लागि यसलाई सुविधाजनक बनाउँदै।
Direct RT-qPCR Kit, Foreasy Reverse Transcriptase र Foreasy HS Taq DNA Polymerase को उपयोग गरेर Foregene द्वारा विकसित, अद्वितीय प्रतिक्रिया बफर संग, यो किट बलियो प्रतिरोध र अनुकूलता संग बनाउँछ, र यसले प्रत्यक्ष रूपमा प्रतिक्रिया परीक्षण Foregene Lysis प्रणाली टेम्प्लेट रूपमा प्रयोग गर्न सक्छ।यो किटले COVID-19 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किट र अन्य रोगजनक ब्याक्टेरिया न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किट विकासको लागि आवेदन दिन सक्छ।
यो किट सीधा IVD उत्पादन को घटक हुन सक्छ, सजिलै र छिटो प्रयोग गरेर।यसलाई पुन: विकास नगरिकन मात्र सजिलो प्रमाणीकरण चाहिन्छ।
निर्दिष्टीकरणहरू
500T, 50,000T
किट अवयवहरू
| किट सामग्री (20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| ५०० टि | ५०,००० टि | |
| पूर्ववर्ती आरइभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज (२०० यू/μL) | ५० μL×१ | १ एमएल×५ |
| Foreasy HS Taq DNA पोलिमरेज (५ यू/μL) | 100 μL×१ | १ एमएल×१० |
| 2× प्रत्यक्ष RT-qPCRबफर | १ एमएल × ५ | ५०० एमएल × १ |
| निर्देशन | 1 | 1 |
सञ्चालन चरणहरू
A: टेम्प्लेट र अभिकर्मक को तयारी
1. तयार गरिएको आरएनए टेम्प्लेट तयार गर्नुहोस् (आरएनए टेम्प्लेट निकाल्न र शुद्ध गर्न फोरजीन टोटल आरएनए आइसोलेसन किट श्रृंखला किट प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ) वा नमूना क्र्याकिंग उत्पादन (यो फोरेजीन लाइसिस प्रणाली प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ), विशिष्ट प्राइमरहरू (१० μM) र अन्य सान्दर्भिक उपभोग्य वस्तुहरू, उपकरण।
2. 2× Direct RT-qPCR बफर, RNase-Free ddH2O र 20× ROX सन्दर्भ डाई (यदि आवश्यक छ भने) बरफको बक्समा राख्नुहोस्, यी प्राकृतिक रूपमा पग्लिन्छ, र बिस्तारै मिसिन्छ।
B: RT-qPCR प्रणालीको तयारी
प्रतिक्रिया प्रणालीको प्रतिक्रिया बफरको आधा भोल्युम प्राप्त गर्नुहोस् (उदाहरणका लागि, यदि प्रणालीको भोल्युम 20 μL छ भने, यसले 10 μL 2× प्रत्यक्ष RT-qPCR बफर प्राप्त गर्न आवश्यक छ।). को लागीइन्जाइमको अनुरूप मात्रा, हामी सुझाव दिन्छौंM-MLV: 10-30 U/20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली,ताकडीएनए पोलिमरेज:1-2 U/20 μL प्रतिक्रिया प्रणालीयो हाम्रो सुझाव हो, तपाईंले यसलाई परीक्षण र समायोजन गर्नुपर्छ), RNA टेम्प्लेट, विशिष्ट प्राइमर र प्रोबहरू थप्नुहोस्, र RNase-Free ddH थप्नुहोस्।2O देखि 20 μL।RT-qPCR प्रतिक्रिया प्रणालीको विशिष्ट तयारी निम्न तालिका 1 मा सन्दर्भ गर्न सकिन्छ।
तालिका १: RT-qPCR प्रणालीको तयारी
| कम्पोनेन्ट | भोल्युम | अन्तिम एकाग्रता |
| 2× प्रत्यक्ष RT-qPCR बफर | १० μL | १× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA पोलिमरेज | 1-2 U | |
| फर्वार्ड प्राइमर (१० μM) | ०.८ μL | ५०-९०० एनएम |
| उल्टो प्राइमर (१० μM) | ०.८ μL | ५०-९०० एनएम |
| प्रोब(४ μM) | १ μL | 200nM |
| टेम्प्लेट(RNA वा Lysate) | X μL | |
| 20× ROX सन्दर्भ डाई | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| कुल मात्रा | 20 μL |
नोट: फर्वार्ड प्राइमर र रिभर्स प्राइमर लक्षित जीनका विशिष्ट प्राइमरहरू हुन्।qPCR को प्रणाली व्यावहारिक प्रयोगात्मक र PCR मोडेल अनुसार समायोजन गर्न सकिन्छ।हामी धेरै प्राइमरहरूको अन्तिम एकाग्रताको लागि 400nM सिफारिस गर्छौं।कृपया तयार एकाग्रता र सिफारिस गरिएको अन्तिम एकाग्रता अनुसार विशिष्ट प्राइमर र प्रोबहरूको भोल्युम समायोजन गर्नुहोस्।
1*: विभिन्न मात्रात्मक PCR उपकरणहरू अनुसार ROX सन्दर्भ डाईको उपयुक्त अन्तिम एकाग्रता चयन गर्नुहोस्।सामान्य मात्रात्मक PCR उपकरणहरूको इष्टतम ROX सन्दर्भ डाई एकाग्रता निम्न तालिकामा देखाइएको छ:
| परिमाणात्मक पीसीआर उपकरणहरू | ROX सन्दर्भ डाईको अन्तिम एकाग्रता |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/स्टेप वन,आदि | 1× (उदाहरणका लागि, 20 μL प्रतिक्रिया प्रणालीमा 1μl 20×ROX सन्दर्भ डाई थप्नुहोस्) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P र Mx4000, आदि। | 0.5× (उदाहरणका लागि, 20 μL प्रतिक्रिया प्रणालीमा 0.5μl 20×ROX सन्दर्भ डाई थप्नुहोस्) |
| रोचे पीसीआर उपकरण, बायो-राड पीसीआर उपकरण, एपेन्डोर्फ मात्रात्मक पीसीआर उपकरण, आदि। | ROX सन्दर्भ डाई बिना |
भण्डारण र शेल्फ जीवन
किट -20 ± 5℃ मा भण्डारण गर्नुपर्छ।यो तुरुन्तै -20 ℃ थर्मोस्टेटिक फ्रिज मा भण्डारण गर्नुपर्छ।यदि उपयुक्त अवस्थामा भण्डारण गरिएको छ भने वैधता अवधि 2 वर्ष हो।
