समस्या विश्लेषणका लागि गाइडहरू

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

कुनै आरएनए निकाल्न सकिँदैन वा न्यूक्लिक एसिडको उत्पादन कम छ

त्यहाँ सामान्यतया धेरै कारकहरू छन् जसले रिकभरी दक्षतालाई असर गर्छ, जस्तै: नमूना आरएनए सामग्री, सञ्चालनको विधि, इलुसन भोल्युम, आदि।।

सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:

1. आइस बाथ वा कम-तापमान (4 ° C) अपरेशनको समयमा सेन्ट्रीफ्यूगेशन।

सुझाव: कोठाको तापक्रम (15-25 ° C) सञ्चालन, कहिल्यै बरफ बाथ र कम तापमान सेन्ट्रीफ्यूज।

2. अनुचित नमूना भण्डारण वा धेरै लामो समयको लागि नमूना भण्डारण।

सुझाव: नमूनाहरू -80 डिग्री सेल्सियसमा भण्डार गर्नुहोस् वा तरल नाइट्रोजनमा फ्रिज गर्नुहोस्, र बारम्बार फ्रिज-थउ प्रयोग नगर्नुहोस्;आरएनए निकासीका लागि भर्खरै सङ्कलन गरिएका नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।

3. अपर्याप्त नमूना lysis

सिफारिस: कृपया सुनिश्चित गर्नुहोस् कि नमूना र काम गर्ने समाधान (लिनियर एक्रिलामाइड) राम्ररी मिलाइएको छ र कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा १० मिनेटसम्म इन्क्युबेटेड छ।

4.Eluent गलत थपिएको थियो

सिफारिस: RNase-Free ddH2O शुद्धीकरण स्तम्भको झिल्लीको बीचमा थपिएको छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।

5. बफर viRW2 मा निर्जल इथेनोल को अनुचित मात्रा

सुझाव: कृपया निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, बफर viRW2 मा निर्जल इथानोलको सही मात्रा थप्नुहोस् र किट प्रयोग गर्नु अघि तिनीहरूलाई राम्ररी मिलाउनुहोस्।

6. अनुचित नमूना प्रयोग।

सुझाव: बफर viRL को प्रति 500μl नमूनाको 200μl।अत्यधिक नमूना भोल्युमले आरएनए निकासी दर कम गर्नेछ।

7. अनुपयुक्त इल्युसन भोल्युम वा अपूर्ण उत्सर्जन।

सुझाव: शुद्धिकरण स्तम्भको एल्युएन्ट भोल्युम 30-50μl छ;यदि इलुसन प्रभाव सन्तोषजनक छैन भने, पूर्व-तातो RNase-मुक्त ddH थप्न सिफारिस गरिन्छ।₂ओ र कोठाको तापक्रममा राख्ने समय विस्तार गर्नुहोस्, जस्तै 5-10 मिनेट

8. बफर viRW2 मा कुल्ला गरेपछि शुद्धीकरण स्तम्भमा इथानोल अवशेष हुन्छ।

सुझाव: यदि बफर viRW2 र खाली-ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशन 2 मिनेटमा कुल्ला गरेपछि पनि इथानोल बाँकी रह्यो भने, शुद्धिकरण स्तम्भलाई खाली-ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशन पछि 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा बाँकी इथानोललाई पूर्ण रूपमा हटाउन सकिन्छ।

शुद्ध आरएनए अणुहरूको ह्रास

शुद्ध RNA को गुणस्तर नमूना भण्डारण, RNase प्रदूषण, र सञ्चालन जस्ता कारकहरूसँग सम्बन्धित छ।

सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:

1. संकलन गरिएका नमूनाहरू समयमै सुरक्षित भएनन्।

सुझाव: यदि नमूना संकलन पछि समय मा प्रयोग गरिएन भने, कृपया यसलाई -80 ℃ वा तरल नाइट्रोजन तुरुन्तै भण्डारण गर्नुहोस्।आरएनए अणुहरूको निकासीको लागि, सम्भव भएसम्म ताजा सङ्कलन नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।

2. संकलन गरिएका नमूनाहरू बारम्बार चिसो र पग्लिँदै थिए।

सुझाव: नमूना सङ्कलन र भण्डारणको क्रममा बारम्बार चिसो र पग्लने (एक पटक भन्दा बढि) नगर्नुहोस्, अन्यथा न्यूक्लिक एसिडको उत्पादन घट्नेछ।

3.RNase अपरेटिङ रूममा पेश गरिएको थियो वा कुनै डिस्पोजेबल ग्लोभ्स, मास्क, आदि लगाएको थिएन।

सुझाव: आरएनए अणु प्रयोगको निकासी छुट्टै आरएनए अपरेशन कोठामा राम्रोसँग गरिन्छ, र प्रयोग गर्नु अघि प्रयोगात्मक तालिका सफा गरिन्छ।प्रयोगको क्रममा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स र मास्क लगाउनुहोस् RNase परिचयको कारणले हुने RNA गिरावटबाट बच्न।

4. प्रयोगको क्रममा RNase द्वारा अभिकर्मक दूषित हुन्छ।

सुझाव: सम्बन्धित प्रयोगका लागि नयाँ भाइरल आरएनए आइसोलेशन किटसँग बदल्नुहोस्।

5. सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, पिपेट टिपहरू, इत्यादिको RNase प्रदूषण। सुझाव: सुनिश्चित गर्नुहोस् कि सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, पिपेट टिपहरू, र पिपेटहरू सबै RNase-मुक्त छन्।

शुद्ध आरएनए अणुहरूले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूलाई असर गर्यो

शुद्धीकरण स्तम्भद्वारा शुद्ध गरिएको आरएनए अणुहरूले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूलाई असर गर्नेछ यदि त्यहाँ धेरै नुन आयनहरू वा प्रोटीनहरू छन्, जस्तै: रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन, उत्तरी ब्लट, आदि।

1. एल्युटेड आरएनए अणुहरूमा बाँकी नुन आयनहरू छन्।

सिफारिस: बफर viRW2 मा निर्जल इथेनॉलको सही भोल्युम थपिएको छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्, र सञ्चालन निर्देशनहरूमा सही सेन्ट्रीफ्युगेशन गति अनुसार शुद्धीकरण स्तम्भ दुई पटक धुनुहोस्; यदि त्यहाँ अझै नुन आयनहरू बाँकी छन् भने, तपाईंले शुद्धिकरण स्तम्भमा बफर viRW2 थप्न सक्नुहुन्छ, र यसलाई कोठाको तापक्रम 5 मा छोड्नुहोस्।त्यसपछि सबैभन्दा ठूलो हदसम्म नुन आयन प्रदूषण हटाउन सेन्ट्रीफ्यूगेशन प्रदर्शन गर्नुहोस्

2. इल्युटेड आरएनए अणुहरूमा इथानोल बाँकी छन्

सुझाव: एक पटक बफर viRW2 द्वारा शुद्धिकरण स्तम्भहरू कुल्ला गरिएको पुष्टि गरेपछि, सञ्चालन निर्देशनहरूमा केन्द्रापसारक गति अनुसार खाली-ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेसन गर्नुहोस्।यदि त्यहाँ अझै पनि इथानोल बाँकी छ भने, यसलाई खाली-ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशन पछि कोठाको तापक्रममा 5 मिनेटको लागि छोड्न सकिन्छ बाँकी इथानोललाई अधिकतम हदसम्म हटाउन।

निर्देशन पुस्तिकाहरू:

भाइरल आरएनए अलगाव किट निर्देशन पुस्तिका