Escherichia Coli O157: H7 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किट (PCR फ्लोरोसेन्ट प्रोब मेथड/लियोफिलाइजेशन)
किट विवरण:
बिरालो नं।FP103
यो E. coli O157: H7 को द्रुत पत्ता लगाउन र स्क्रिनिङको लागि खाना, खाना, पानीको नमूना र वातावरणीय नमूनाहरूमा प्रयोग गरिन्छ।
विवरणहरू
लागि प्रयोग गरिन्छE. coli O157:H7 को द्रुत पत्ता लगाउने र स्क्रिनिङ खाना, खाना, पानीको नमूना र वातावरणीय नमूनाहरूमा।
[परीक्षण सिद्धान्त]
फ्लोरोसेन्ट पीसीआर टेक्नोलोजीको सिद्धान्त अनुसार, विशिष्ट प्राइमरहरू र ताक्मान प्रोबहरू Escherichia coli O157: H7 को विशिष्ट जीनका लागि डिजाइन गरिएको छ, र फ्लोरोसेन्ट PCR उपकरणद्वारा पत्ता लगाइएको छ, ताकि Escherichia coli O157: H7 को DNA को गुणात्मक पत्ता लगाउन सकिन्छ।
किट सामग्री
नोट: ROX च्यानल प्रोब समावेश गरिएको छैन।
| Cघटकहरू | निर्दिष्टीकरण | Qएकता |
| बफर ए | ट्यूब | 1 |
| बफर बि | ट्यूब | 1 |
| सकारात्मक नियन्त्रण | ट्यूब | 1 |
| नकारात्मक नियन्त्रण | ट्यूब | 1 |
अपेक्षित उपयोग
लागि प्रयोग गरिन्छ E. coli O157:H7 को द्रुत पत्ता लगाउने र स्क्रिनिङ खाना, खाना, पानीको नमूना र वातावरणीय नमूनाहरूमा।
भण्डारण सर्तहरू र म्याद समाप्ति मिति
अँध्यारोमा -20 ℃ मा भण्डार गर्नुहोस् र बारम्बार चिसो र पग्लनबाट जोगिनुहोस्।
वैधता अवधि 12 होमहिना, र उत्पादन मिति बाहिरी प्याकेजिङ्ग मा देखाइएको छ।
उपकरण र उपभोग्य वस्तुहरू
फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक पीसीआर उपकरण, पिपेट बन्दुक र मिल्दो टिप्स, भोर्टेक्स शेकर, मिनी सेन्ट्रीफ्यूज।
प्रयोग
1. नमूना प्रशोधन
1.1 नमूना प्रकार: यो किट Escherichia coli O157:H7 द्वारा दूषित भएको शंका गरिएको खाना, खाना, पानीको नमूना र अन्य नमूनाहरूको लागि उपयुक्त छ।गहिरो-प्रशोधित मासु उत्पादनहरू, पेय पदार्थहरू र पिग्मेन्टहरू भएका अन्य पदार्थहरूको लागि, तिनीहरूले प्रतिदीप्ति सङ्केत सङ्कलनलाई असर गर्नबाट जोगिनका लागि कुल्ला गर्न आवश्यक छ।
1.2 नमूना प्रशोधन: नमूना तयारी, संवर्धन संस्कृति र Escherichia coli O157: H7 को अलगावको लागि "GB 4789.10-2016 खाद्य सुरक्षा राष्ट्रिय मानक खाद्य सूक्ष्मजीवविज्ञान परीक्षण Escherichia coli O157: H7 परीक्षण" हेर्नुहोस्।
- Nयूक्लिक एसिड निकासी
1.5 एमएल सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबमा 20 एमएल संवर्धन समाधान लिनुहोस्, 200 μL माइक्रोबियल लाइसेट थप्नुहोस् (अतिरिक्त किट आवश्यक छ), 30 सेकेन्डको लागि भर्टेक्स, छोटकरीमा सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्, र अलग गर्नुहोस्।
टिप्पणी: लाइसेटबाट न्यूक्लिक एसिडको निकासी 10 मिनेट भित्र पूरा गर्नुपर्छ, र लामो समयको लागि भण्डारण गर्न सकिँदैन।
3. न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन
3.1 प्रयोगको लागि फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक PCR उपकरण खोल्नुहोस्।
किटबाट बफर ए र बफर बी, तिनीहरूलाई राम्ररी पगाल्नुहोस्, र छोटकरीमा सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्।प्रत्येक PCR प्रतिक्रिया ट्यूबमा 18 μL बफर A र 2 μL बफर B थप्नुहोस्।त्यसपछि 5 एमएल प्रत्येक नकारात्मक नियन्त्रण, निकालिएको न्यूक्लिक एसिड, र PCR प्रतिक्रिया ट्यूबहरूमा सकारात्मक नियन्त्रण थप्नुहोस्, ट्युबहरू क्याप गर्नुहोस्, र छोटकरीमा सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्।
3.3 PCR प्रतिक्रिया ट्यूबलाई फ्लोरोसेन्ट PCR मेसिनमा स्थानान्तरण गर्नुहोस्, र एम्प्लीफिकेशन प्रयोगहरू गर्न निम्न प्रक्रियाहरू प्रयोग गर्नुहोस्: प्रतिक्रिया प्रणालीको लागि 25 mL चयन गर्नुहोस्, प्रत्येक चक्रको लागि 60°C मा प्रतिदीप्ति संकेतहरू सङ्कलन गर्नुहोस्, र पत्ता लगाउन च्यानलको लागि FAM चयन गर्नुहोस्।
| चरण | कार्यक्रम | चक्रको संख्या |
| 1 | 37 ℃ 5 मिनेट | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 मिनेट | 1 |
| 3 | 95°C 15s | ४ ० |
| 60℃ 30s (प्रतिदीप्ति सङ्कलन) |
समस्या विश्लेषणका लागि गाइडहरू
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
कुनै आरएनए निकाल्न सकिँदैन वा न्यूक्लिक एसिडको उत्पादन कम छ
त्यहाँ सामान्यतया धेरै कारकहरू छन् जसले रिकभरी दक्षतालाई असर गर्छ, जस्तै: नमूना आरएनए सामग्री, सञ्चालनको विधि, इलुसन भोल्युम, आदि।।
सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:
1. आइस बाथ वा कम-तापमान (4 ° C) अपरेशनको समयमा सेन्ट्रीफ्यूगेशन।
सुझाव: कोठाको तापक्रम (15-25 ° C) सञ्चालन, कहिल्यै बरफ बाथ र कम तापमान सेन्ट्रीफ्यूज।
2. अनुचित नमूना भण्डारण वा धेरै लामो समयको लागि नमूना भण्डारण।
सुझाव: नमूनाहरू -80 डिग्री सेल्सियसमा भण्डार गर्नुहोस् वा तरल नाइट्रोजनमा फ्रिज गर्नुहोस्, र बारम्बार फ्रिज-थउ प्रयोग नगर्नुहोस्;आरएनए निकासीका लागि भर्खरै सङ्कलन गरिएका नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।
3. अपर्याप्त नमूना lysis
सिफारिस: कृपया सुनिश्चित गर्नुहोस् कि नमूना र काम गर्ने समाधान (लिनियर एक्रिलामाइड) राम्ररी मिलाइएको छ र कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा १० मिनेटसम्म इन्क्युबेटेड छ।
4.Eluent गलत थपिएको थियो
सिफारिस: RNase-Free ddH2O शुद्धीकरण स्तम्भको झिल्लीको बीचमा थपिएको छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।
5. बफर viRW2 मा निर्जल इथेनोल को अनुचित मात्रा
सुझाव: कृपया निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, बफर viRW2 मा निर्जल इथानोलको सही मात्रा थप्नुहोस् र किट प्रयोग गर्नु अघि तिनीहरूलाई राम्ररी मिलाउनुहोस्।
6. अनुचित नमूना प्रयोग।
सुझाव: बफर viRL को प्रति 500μl नमूनाको 200μl।अत्यधिक नमूना भोल्युमले आरएनए निकासी दर कम गर्नेछ।
7. अनुपयुक्त इल्युसन भोल्युम वा अपूर्ण उत्सर्जन।
सुझाव: शुद्धिकरण स्तम्भको एल्युएन्ट भोल्युम 30-50μl छ;यदि इलुसन प्रभाव सन्तोषजनक छैन भने, पूर्व-तातो RNase-मुक्त ddH थप्न सिफारिस गरिन्छ।2ओ र कोठाको तापक्रममा राख्ने समय विस्तार गर्नुहोस्, जस्तै 5-10 मिनेट
8. बफर viRW2 मा कुल्ला गरेपछि शुद्धीकरण स्तम्भमा इथानोल अवशेष हुन्छ।
सुझाव: यदि बफर viRW2 र खाली-ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशन 2 मिनेटमा कुल्ला गरेपछि पनि इथानोल बाँकी रह्यो भने, शुद्धिकरण स्तम्भलाई खाली-ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशन पछि 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा बाँकी इथानोललाई पूर्ण रूपमा हटाउन सकिन्छ।
शुद्ध आरएनए अणुहरूको ह्रास
शुद्ध RNA को गुणस्तर नमूना भण्डारण, RNase प्रदूषण, र सञ्चालन जस्ता कारकहरूसँग सम्बन्धित छ।
सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:
1. संकलन गरिएका नमूनाहरू समयमै सुरक्षित भएनन्।
सुझाव: यदि नमूना संकलन पछि समय मा प्रयोग गरिएन भने, कृपया यसलाई -80 ℃ वा तरल नाइट्रोजन तुरुन्तै भण्डारण गर्नुहोस्।आरएनए अणुहरूको निकासीको लागि, सम्भव भएसम्म ताजा सङ्कलन नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।
2. संकलन गरिएका नमूनाहरू बारम्बार चिसो र पग्लिँदै थिए।
सुझाव: नमूना सङ्कलन र भण्डारणको क्रममा बारम्बार चिसो र पग्लने (एक पटक भन्दा बढि) नगर्नुहोस्, अन्यथा न्यूक्लिक एसिडको उत्पादन घट्नेछ।
3.RNase अपरेटिङ रूममा पेश गरिएको थियो वा कुनै डिस्पोजेबल ग्लोभ्स, मास्क, आदि लगाएको थिएन।
सुझाव: आरएनए अणु प्रयोगको निकासी छुट्टै आरएनए अपरेशन कोठामा राम्रोसँग गरिन्छ, र प्रयोग गर्नु अघि प्रयोगात्मक तालिका सफा गरिन्छ।प्रयोगको क्रममा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स र मास्क लगाउनुहोस् RNase परिचयको कारणले हुने RNA गिरावटबाट बच्न।
4. प्रयोगको क्रममा RNase द्वारा अभिकर्मक दूषित हुन्छ।
सुझाव: सम्बन्धित प्रयोगका लागि नयाँ भाइरल आरएनए आइसोलेशन किटसँग बदल्नुहोस्।
5. सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, पिपेट टिपहरू, इत्यादिको RNase प्रदूषण। सुझाव: सुनिश्चित गर्नुहोस् कि सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, पिपेट टिपहरू, र पिपेटहरू सबै RNase-मुक्त छन्।
शुद्ध आरएनए अणुहरूले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूलाई असर गर्यो
शुद्धीकरण स्तम्भद्वारा शुद्ध गरिएको आरएनए अणुहरूले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूलाई असर गर्नेछ यदि त्यहाँ धेरै नुन आयनहरू वा प्रोटीनहरू छन्, जस्तै: रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन, उत्तरी ब्लट, आदि।
1. एल्युटेड आरएनए अणुहरूमा बाँकी नुन आयनहरू छन्।
सिफारिस: बफर viRW2 मा निर्जल इथेनॉलको सही भोल्युम थपिएको छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्, र सञ्चालन निर्देशनहरूमा सही सेन्ट्रीफ्युगेशन गति अनुसार शुद्धीकरण स्तम्भ दुई पटक धुनुहोस्; यदि त्यहाँ अझै नुन आयनहरू बाँकी छन् भने, तपाईंले शुद्धिकरण स्तम्भमा बफर viRW2 थप्न सक्नुहुन्छ, र यसलाई कोठाको तापक्रम 5 मा छोड्नुहोस्।त्यसपछि सबैभन्दा ठूलो हदसम्म नुन आयन प्रदूषण हटाउन सेन्ट्रीफ्यूगेशन प्रदर्शन गर्नुहोस्
2. इल्युटेड आरएनए अणुहरूमा इथानोल बाँकी छन्
सुझाव: एक पटक बफर viRW2 द्वारा शुद्धिकरण स्तम्भहरू कुल्ला गरिएको पुष्टि गरेपछि, सञ्चालन निर्देशनहरूमा केन्द्रापसारक गति अनुसार खाली-ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेसन गर्नुहोस्।यदि त्यहाँ अझै पनि इथानोल बाँकी छ भने, यसलाई खाली-ट्यूब सेन्ट्रीफ्युगेशन पछि कोठाको तापक्रममा 5 मिनेटको लागि छोड्न सकिन्छ बाँकी इथानोललाई अधिकतम हदसम्म हटाउन।
निर्देशन पुस्तिकाहरू:
भाइरल आरएनए अलगाव किट निर्देशन पुस्तिका
