समस्या विश्लेषण गाइड

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

कम उपज वा कुनै DNA

त्यहाँ सामान्यतया धेरै कारकहरू छन् जसले जीनोमिक DNA को उपजलाई असर गर्छ, नमूनाको स्रोत, नमूनाको उमेर, नमूनाको भण्डारण अवस्था, र सञ्चालन सहित।

निकासी गर्दा जीनोमिक डीएनए प्राप्त गर्न सकिएन

1. टिश्यू नमूनाहरू अनुचित रूपमा भण्डारण गरिन्छ वा धेरै लामो समयको लागि भण्डारण गरिन्छ, परिणामस्वरूप जीनोमिक DNA को ह्रास हुन्छ।

सिफारिस: तरल नाइट्रोजन वा -20 मा ऊतक नमूनाहरू भण्डार गर्नुहोस्°C;जीनोमिक DNA निकासीको लागि नयाँ सङ्कलन नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।

2. धेरै थोरै नमूना रकमले सम्बन्धित जीनोमिक डीएनए निकाल्न सकिँदैन।

सुझाव: लामो समयदेखि भण्डारण गरिएका वा गम्भीर जीनोमिक डीएनए डिग्रेडेसन भएका तन्तुका नमूनाहरूका लागि पर्याप्त जीनोमिक डीएनए निकाल्नको लागि तन्तुका नमूनाहरूको मात्रा उचित रूपमा बढाउन सकिन्छ।नमूनाको मात्रा डीएनए आवश्यकता अनुसार निर्धारण गर्न सकिन्छ, तर ताजा नमूना 100mg भन्दा बढी हुनु हुँदैन, र सुख्खा नमूना 30mg भन्दा बढी हुनु हुँदैन।

3. नमूना तरल नाइट्रोजनले भुइँमा राखिएको छैन वा तरल नाइट्रोजन पछि धेरै लामो समयसम्म राखिएको छैन।

सुझाव: डीएनए निकासीको क्रममा, कोषको पर्खाल भत्काउन नमूनालाई तरल नाइट्रोजनले पूर्ण रूपमा भुइँमा राख्नुपर्छ।पीस पछि, कृपया नमूना पाउडर PL1 मा 65 मा प्रिहेटेड स्थानान्तरण गर्नुहोस्°सी जति सक्दो चाँडो (जमिनको पाउडर पग्लिएपछि, जीनोमिक डीएनए द्रुत रूपमा घट्न थाल्छ)।

4. फोरेजीन प्रोटीजको अनुचित भण्डारणको परिणाम कम वा निष्क्रिय गतिविधि हुन्छ।

सिफारिस: फोरेजीन प्रोटीजको भण्डारण अवस्थाहरू पुष्टि गर्नुहोस् वा एन्जाइमेटिक हाइड्रोलाइसिसको लागि नयाँ फोरेजीन प्रोटीजसँग बदल्नुहोस्।

5. किट अनुचित रूपमा भण्डारण गरिएको छ वा धेरै लामो समयको लागि भण्डारण गरिएको छ, जसले गर्दा किटका केही कम्पोनेन्टहरू असफल हुन्छन्।

सिफारिस: सम्बन्धित कार्यहरूको लागि नयाँ बिरुवा जीनोमिक DNA निकासी किट खरिद गर्नुहोस्।

6. किटको अनुचित प्रयोग।

सुझाव: बिरुवाको जीनोमिक DNA को निकासी र शुद्धीकरणको लागि नमूनाहरूलाई समर्पित प्लान्ट डीएनए आइसोलेशन किट किन्नुहोस्।

7. बफर WB a थप्न बिनाजलयुक्त इथानोल।

सिफारिस: Buffer WB मा निरपेक्ष इथेनॉलको सही भोल्युम थप्न निश्चित गर्नुहोस्।

8. सिलिका झिल्लीमा एल्युएन्ट सही रूपमा ड्रिप गरिएको थिएन।

सुझाव: ६५ मा पूर्व-तातो एल्युएन्ट थप्नुहोस्℃सिलिका जेल झिल्लीको बीचमा ड्रपवाइज गर्नुहोस्, र इल्युसन दक्षता बढाउन 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा छोड्नुहोस्।

कम उपज जीनोमिक DNA प्राप्त गर्न निकासी

1. नमूना अनुचित रूपमा भण्डारण गरिएको छ वा धेरै लामो समयको लागि भण्डारण गरिएको छ, परिणामस्वरूप जीनोमिक DNA को गिरावट।

सिफारिस: -20 मा टिस्यु नमूनाहरू भण्डार गर्नुहोस्℃;जीनोमिक डीएनए निकासीको लागि नयाँ सङ्कलन टिस्यु नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।

2. यदि ऊतक नमूनाहरूको मात्रा धेरै सानो छ भने, निकालिएको जीनोमिक डीएनए कम हुनेछ।

सुझाव: केही बिरुवाका नमूनाहरू पानीमा प्रशस्त हुन्छन्, जस्तै जलीय बोटबिरुवाहरू जस्तै शैवाल, इत्यादि, खुराक उचित रूपमा बढाउन सकिन्छ वा अपरेशन गर्नु अघि पानी निर्जलीकरण गर्न सकिन्छ।

3. नमूनाहरू तरल नाइट्रोजनले राम्ररी भुइँमा राखिएका थिएनन् वा पीस गरेपछि धेरै लामो समयसम्म कोठाको तापक्रममा छोडिएका थिएनन्।

सुझाव: तरल नाइट्रोजन पीस पर्याप्त हुनुपर्छ, र नमूना सेल पर्खाल सकेसम्म धेरै भाँचिएको हुनुपर्छ;पीस पछि तुरुन्तै, नमूना पाउडर 65 मा स्थानान्तरण गर्नुपर्छ℃अर्को चरणको लागि पूर्व तताइएको बफर PL1।

4. सही किट प्रयोग नगरेको।

सिफारिस: बिरुवाको जीनोमिक डीएनए निकाल्न र शुद्ध गर्न समर्पित प्लान्ट डीएनए आइसोलेशन किट प्रयोग गर्नुहोस्।

5. फोरेजीन प्रोटीजको अनुचित भण्डारणको परिणाम कम वा निष्क्रिय गतिविधि हुन्छ।

सिफारिस: फोरेजीन प्रोटीजको भण्डारण अवस्थाहरू पुष्टि गर्नुहोस् वा एन्जाइमेटिक हाइड्रोलाइसिसको लागि नयाँ फोरेजीन प्रोटीजसँग बदल्नुहोस्।

6. Eluent समस्या

सिफारिस: कृपया इल्युसनको लागि बफर ईबी प्रयोग गर्नुहोस्;यदि ddH प्रयोग गर्दै हुनुहुन्छ₂O वा अन्य eluents, eluent को pH 7.0-8.5 को बीचमा छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।

7. एल्युएन्ट सही रूपमा ड्रिप गरिएको छैन

सुझाव: कृपया सिलिका झिल्लीको बीचमा इल्युसन ड्रप थप्नुहोस् र इल्युसन दक्षता बढाउन 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा छोड्नुहोस्।

8. eluent भोल्युम धेरै सानो छ

सुझाव: कृपया निर्देशन अनुसार जीनोमिक डीएनए इल्युसनको लागि एल्युएन्ट प्रयोग गर्नुहोस्, कम्तिमा १०० भन्दा कम हुँदैन।μl.

कम शुद्धता भएको जीनोमिक डीएनए निकालियो

जीनोमिक DNA को कम शुद्धताले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूको असफलता वा खराब प्रभाव निम्त्याउँछ, जस्तै: इन्जाइम काट्न सकिँदैन, र लक्ष्य जीन टुक्रा PCR द्वारा प्राप्त गर्न सकिँदैन।

1. विविध प्रोटीन प्रदूषण, आरएनए प्रदूषण।

विश्लेषण: बफर PW स्तम्भ धुन प्रयोग गरिएको थिएन;सही सेन्ट्रीफ्युगेसन गतिमा स्तम्भ धुन बफर PW प्रयोग गरिएन।

सुझाव: सुपरनेटेन्ट स्तम्भबाट गुज्रिँदा सुपरनेटेन्टमा कुनै वर्षा छैन भनेर सुनिश्चित गर्न प्रयास गर्नुहोस्;निर्देशनहरू अनुसार बफर PW को साथ शुद्धीकरण स्तम्भ धुन निश्चित हुनुहोस्, र यो चरण छोड्न सकिँदैन।

2. अशुद्धता आयन प्रदूषण।

विश्लेषण: बफर WB धुने स्तम्भ हटाइयो वा एक पटक मात्र धोइयो, अवशिष्ट आयनिक प्रदूषणको परिणामस्वरूप।

सिफारिस: सम्भव भएसम्म अवशिष्ट आयनहरू हटाउन निर्देशनहरू अनुसार बफर WB सँग दुई पटक धुनुहोस्।

3. RNase प्रदूषण।

विश्लेषण: Exogenous RNase बफरमा थपिएको छ;Buffer PW मा गलत धुने अपरेसनले अवशिष्ट RNase को परिणाम दिन्छ र डाउनस्ट्रीम RNA प्रयोगात्मक कार्यहरूलाई असर गर्छ, जस्तै इन भिट्रो ट्रान्सक्रिप्शन।

सुझाव: फोरेजीन श्रृंखला न्यूक्लिक एसिड एक्स्ट्र्याक्शन किटहरूले थप RNase बिना आरएनए हटाउन सक्छ, र प्लान्ट डीएनए अलगाव किटमा सबै अभिकर्मकहरूलाई RNase आवश्यक पर्दैन;निर्देशनहरू अनुसार बफर PW को साथ शुद्धीकरण स्तम्भ धुन निश्चित हुनुहोस्, र यो चरण छोड्न सकिँदैन।

4. इथेनॉल अवशेषहरू।

विश्लेषण: बफर WB सँग शुद्धिकरण स्तम्भ धोएपछि, कुनै खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेशन प्रदर्शन गरिएको थिएन।

सिफारिस: उचित खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेशनको लागि निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्।

निर्देशन पुस्तिका:

प्लान्ट डीएनए अलगाव किट निर्देशन पुस्तिका