A260/A230 को कम अनुपात सामान्यतया 230nm मा अधिकतम अवशोषण तरंगदैर्ध्य संग अशुद्धता को कारण हो।यी अशुद्धताहरू के समावेश छन् हेरौं:

• सामान्य प्रदूषकहरू	अवशोषण तरंगदैर्ध्य	अनुपात प्रभाव
  प्रोटिन	~ 230nm र 280nm	ए को एकै साथ कटौती260/A 280र ए260/A 280अनुपातहरू
  Guanidine नमक	220-240 nm	ए घटाउनुहोस्260/A 280अनुपात
  फिनोल	~270nm	-
  Trizol	~ 230nm र 270nm	ए घटाउनुहोस्260/A 280अनुपात
  EDTA	~230nm	ए घटाउनुहोस्260/A 280अनुपात
  इथानोल	230-240 nm	ए घटाउनुहोस्260/A 280अनुपात

 
 
 
साधारण प्रदूषकहरूको अवशोषण तरंगदैर्ध्य र कन्ट्रास्ट मान

Pरोटिन प्रदूषण
प्रोटिन प्रदूषणलाई न्यूक्लिक एसिड निकासी प्रक्रियामा सबैभन्दा सामान्य प्रदूषणको रूपमा लिन सकिन्छ।प्रोटिन माथिल्लो जलीय चरण र तल्लो बीचमा अवस्थित छजैविकचरण।प्रदूषणले A260/A280 र A260/A230 को अनुपात एकै समयमा घटाउनेछ, र A260/A230 को अनुपात A260/A280 को अनुपात भन्दा धेरै स्पष्ट रूपमा परिवर्तन हुनेछ।
पछिको अवधिमाउल्टो ट्रान्सक्रिप्शनor qPCR प्रतिक्रियाहरू, प्रोटीन अवशेषहरूले इन्जाइम प्रकार्यलाई रोक्न वा हस्तक्षेप गर्न सक्छ।प्रोटिन दूषित हुनबाट जोगिने सबैभन्दा राम्रो तरिका भनेको सुपरनेटेन्टको आकांक्षा गर्दा "धेरै भन्दा कम, धेरै पटक थोरै मात्रा" को सिद्धान्तलाई ध्यानमा राख्नु हो।

2. Guanidinium प्रदूषण
हाइड्रोक्लोराइड (GuHCl) र guanidine thiocyanate (GTC) ले प्रोटिनहरू हटाउने प्रभाव पार्छ, जसले न्यूक्लिक एसिड निकासी प्रक्रियामा कोशिका झिल्लीहरू तुरुन्तै नष्ट गर्न सक्छ, जसले प्रोटीन विकृतीकरण र वर्षा निम्त्याउँछ।GuHCl र GTC को अवशोषण तरंगदैर्ध्य 220-240 nm को बीचमा छ, रअवशिष्ट ग्वानिडिनियम नुनले A260/A230 को अनुपात घटाउनेछ।यद्यपि अवशिष्ट ग्वानिडिनियम नुनले अनुपात घटाउनेछ,डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूमा प्रभाव वास्तवमा नगण्य छ.

3. Trizol प्रदूषण
Trizol को मुख्य घटक फिनोल हो।फिनोलको मुख्य कार्य कोशिकाहरू लिज्नु र कोशिकाहरूमा प्रोटीन र न्यूक्लिक एसिड पदार्थहरू छोड्नु हो।यद्यपि फिनोलले प्रभावकारी रूपमा प्रोटिनहरू हटाउन सक्छ, यसले RNase गतिविधिलाई पूर्ण रूपमा रोक्दैन।तसर्थ, 8-हाइड्रोक्सीक्विनोलिन, गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट, β-मर्काप्टोथेनोल, आदिलाई TRIzol मा थपिन्छन् जसलाई अन्तर्जात र बहिर्मुख RNase लाई रोक्छ।
सेलुलर आरएनए निकाल्दा, ट्रिजोलले कोशिकाहरूलाई द्रुत रूपमा लिज गर्न सक्छ र कोशिकाहरूबाट निस्कने न्यूक्लिजलाई रोक्न सक्छ, र अवशिष्ट ट्रिजोलले A260/A230 को अनुपातलाई उल्लेखनीय रूपमा घटाउनेछ।
प्रशोधन विधि: सेन्ट्रीफ्यूजिङ गर्दा, यो ध्यान दिनु पर्छ कि Trizol मा फिनोल 4° र कोठाको तापक्रमको अवस्थामा पानीको चरणमा सजिलै घुलनशील हुन्छ।

4. इथानोल अवशेष
ईथानोललाई अन्तिम प्रक्रियामा डीएनएमा बाधा पुग्ने नुन आयनहरू विघटन गर्दा डीएनए प्रक्षेपण गर्न प्रयोग गरिन्छ।उच्चतम को अवशोषण तरंगदैर्ध्यको अवशोषण शिखरइथानोल पनि 230-240 nm मा छ, जुनA260/A230 को अनुपात पनि घटाउनेछ.
इथानोल अवशेषबाट बच्ने विधि अन्तिम इल्युसनको समयमा दुई पटक दोहोर्याउन सकिन्छ,धुवाँ हुडइलुसनको लागि बफर थप्नु अघि इथानोललाई पूर्ण रूपमा वाष्पीकरण गर्न अनुमति दिन दुई मिनेटको लागि।
यद्यपि, यो थाहा हुनुपर्छ कि अनुपात आरएनए गुणस्तरको मूल्याङ्कन सूचकांक मात्र हो।यदि माथि उल्लिखित कार्यहरू कडाईका साथ विनियमित छन् भने, अनुपात र मानक दायरा बीचको विचलनले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूमा ठूलो प्रभाव पार्दैन।
सम्बन्धित उत्पादनहरु:
पशु कुल आरएनए अलगाव किट
प्लान्ट कुल आरएनए अलगाव किट
सेल कुल आरएनए अलगाव किट
प्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट प्लस