अशुद्ध नमूना वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR प्रत्यक्ष मल्टिप्लेक्स प्रोब Qpcr मिक्स प्लस U को लागि 2x केन्द्रित प्रिमिक्सको लागि चीन निर्माता
संस्थाले प्रक्रिया अवधारणालाई कायम राख्छ "वैज्ञानिक व्यवस्थापन, उच्च गुणस्तर र दक्षता प्रधानता, चीन निर्माताको लागि क्रेता सर्वोच्च 2× अनप्युरिफाइड नमूना वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR डायरेक्ट मल्टिप्लेक्स प्रोब Qpcr मिक्स प्लस U को लागि केन्द्रित प्रिमिक्सको लागि, हाम्रो व्यवसाय प्रत्येक ग्राहकलाई महत्त्वपूर्ण र सुरक्षित उच्च गुणस्तरका उत्पादनहरू सहित ग्राहकहरूलाई महत्त्वपूर्ण र सुरक्षित मूल्यमा सेवाहरू प्रदान गर्न समर्पित छ।
संस्थाले कार्यविधि अवधारणामा राख्छ "वैज्ञानिक व्यवस्थापन, उच्च गुणस्तर र दक्षता प्रधानता, खरिदकर्ता सर्वोच्चचीन Taq DNA पोलिमरेज र Qpcr, हाम्रो कम्पनीसँग प्रचुर शक्ति छ र एक स्थिर र उत्तम बिक्री नेटवर्क प्रणाली छ।हामी चाहन्छौं कि हामीले पारस्परिक लाभको आधारमा स्वदेश तथा विदेशका सबै ग्राहकहरूसँग राम्रो व्यापार सम्बन्ध स्थापित गर्न सकौं।
वास्तविक समय पीसीआर प्राइमर डिजाइन सिद्धान्तहरू
फर्वार्ड प्राइमर र रिभर्स प्राइमर
वास्तविक समय पीसीआर को लागी, प्राइमर डिजाइन धेरै महत्त्वपूर्ण छ।प्राइमरहरू PCR प्रवर्धनको विशिष्टता र दक्षतासँग सम्बन्धित छन्, र निम्न सिद्धान्तहरूको सन्दर्भमा डिजाइन गर्न सकिन्छ:
- प्राइमर लम्बाइ: 18-30bp।
- GC सामग्री: 40-60%।
- Tm मान: प्राइमर डिजाइन सफ्टवेयर, जस्तै प्राइमर 5, प्राइमर को Tm मान दिन सक्छ।अपस्ट्रिम र डाउनस्ट्रीम प्राइमरहरूको Tm मानहरू सकेसम्म नजिक हुनुपर्छ।Tm गणना सूत्र पनि प्रयोग गर्न सकिन्छ: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)।PCR प्रदर्शन गर्दा, 5 °C को प्राइमर Tm मान भन्दा कम तापमान सामान्यतया annealing तापमान को रूप मा चयन गरिन्छ (annealing तापमान मा समान वृद्धि PCR प्रतिक्रिया को विशिष्टता बढाउन सक्छ)।
- प्राइमर र पीसीआर उत्पादनहरू:
- डिजाइन प्राइमर PCR प्रवर्धन उत्पादन लम्बाइ प्राथमिकता 100-150bp छ।
- टेम्प्लेटको माध्यमिक संरचनात्मक क्षेत्रमा डिजाइन प्राइमरहरू सम्भव भएसम्म बेवास्ता गर्नुपर्छ।
- अपस्ट्रिम र डाउनस्ट्रीम प्राइमरहरूको 3′ छेउहरू बीच 2 वा बढी पूरक आधारहरूको गठनबाट बच्नुहोस्।
- प्राइमर 3′ टर्मिनल आधार 3 अतिरिक्त लगातार G वा C संग उपस्थित हुन सक्दैन।
- प्राइमरहरू आफैंमा पूरक संरचनाहरू हुन सक्दैनन्, अन्यथा हेयरपिन संरचना बनाइनेछ, जसले PCR प्रवर्धनलाई असर गर्छ।
- ATCG लाई प्राइमर अनुक्रममा सकेसम्म समान रूपमा वितरण गरिनुपर्छ, र 3′ टर्मिनल आधारलाई T को रूपमा बेवास्ता गर्नुपर्छ।
परिशिष्ट१: सीप्रत्यक्षRT-qPCR किट घटकt पूरक प्याक
1. सेल लाइसिस समाधान
सेल लाइसिस समाधान | |||
किट अवयवहरू (24-वेल लिसिस प्रणाली / राम्रो) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
१०० टि | ५०० टि | ||
भागम | बफर CL | 20 मिलीलीटर | 100 मिलीलीटर |
फोरजीन प्रोटीज प्लस II | 400 μl | १ मिली × २ | |
बफर ST | १ मिली × २ | १० एमएल | |
भागII | डीएनए इरेजर | 400 μl | १ मिली × २ |
RT मिक्स | |
किट अवयवहरू (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01011-B1 |
२०० टि | |
5× प्रत्यक्ष RT मिक्स | 800 μl |
RNase-मुक्त ddH2O | १.७ मिली × २ |
qPCR मिक्स | ||
किट अवयवहरू (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
२०० टि | १००० टि | |
2× प्रत्यक्ष qPCR मिक्स-Takman | १ मिली × २ | १.७ मिली × ६ |
20× ROX सन्दर्भ डाई | 40 μl | 200 μl |
RNase-मुक्त ddH2O | १.७ एमएल | १० एमएल |
संस्थाले प्रक्रिया अवधारणालाई कायम राख्छ "वैज्ञानिक व्यवस्थापन, उच्च गुणस्तर र दक्षता प्रधानता, चीन निर्माताको लागि क्रेता सर्वोच्च 2× अनप्युरिफाइड नमूना वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR डायरेक्ट मल्टिप्लेक्स प्रोब Qpcr मिक्स प्लस U को लागि केन्द्रित प्रिमिक्सको लागि, हाम्रो व्यवसाय प्रत्येक ग्राहकलाई महत्त्वपूर्ण र सुरक्षित उच्च गुणस्तरका उत्पादनहरू सहित ग्राहकहरूलाई महत्त्वपूर्ण र सुरक्षित मूल्यमा सेवाहरू प्रदान गर्न समर्पित छ।
को लागि चीन निर्माताचीन Taq DNA पोलिमरेज र Qpcr, हाम्रो कम्पनीसँग प्रचुर शक्ति छ र एक स्थिर र उत्तम बिक्री नेटवर्क प्रणाली छ।हामी चाहन्छौं कि हामीले पारस्परिक लाभको आधारमा स्वदेश तथा विदेशका सबै ग्राहकहरूसँग राम्रो व्यापार सम्बन्ध स्थापित गर्न सकौं।
वास्तविक समय पीसीआर प्राइमर डिजाइन सिद्धान्तहरू
फर्वार्ड प्राइमर र रिभर्स प्राइमर
वास्तविक समय पीसीआर को लागी, प्राइमर डिजाइन धेरै महत्त्वपूर्ण छ।प्राइमरहरू PCR प्रवर्धनको विशिष्टता र दक्षतासँग सम्बन्धित छन्, र निम्न सिद्धान्तहरूको सन्दर्भमा डिजाइन गर्न सकिन्छ:
- प्राइमर लम्बाइ: 18-30bp।
- GC सामग्री: 40-60%।
- Tm मान: प्राइमर डिजाइन सफ्टवेयर, जस्तै प्राइमर 5, प्राइमर को Tm मान दिन सक्छ।अपस्ट्रिम र डाउनस्ट्रीम प्राइमरहरूको Tm मानहरू सकेसम्म नजिक हुनुपर्छ।Tm गणना सूत्र पनि प्रयोग गर्न सकिन्छ: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)।PCR प्रदर्शन गर्दा, 5 °C को प्राइमर Tm मान भन्दा कम तापमान सामान्यतया annealing तापमान को रूप मा चयन गरिन्छ (annealing तापमान मा समान वृद्धि PCR प्रतिक्रिया को विशिष्टता बढाउन सक्छ)।
- प्राइमर र पीसीआर उत्पादनहरू:
- डिजाइन प्राइमर PCR प्रवर्धन उत्पादन लम्बाइ प्राथमिकता 100-150bp छ।
- टेम्प्लेटको माध्यमिक संरचनात्मक क्षेत्रमा डिजाइन प्राइमरहरू सम्भव भएसम्म बेवास्ता गर्नुपर्छ।
- अपस्ट्रिम र डाउनस्ट्रीम प्राइमरहरूको 3′ छेउहरू बीच 2 वा बढी पूरक आधारहरूको गठनबाट बच्नुहोस्।
- प्राइमर 3′ टर्मिनल आधार 3 अतिरिक्त लगातार G वा C संग उपस्थित हुन सक्दैन।
- प्राइमरहरू आफैंमा पूरक संरचनाहरू हुन सक्दैनन्, अन्यथा हेयरपिन संरचना बनाइनेछ, जसले PCR प्रवर्धनलाई असर गर्छ।
- ATCG लाई प्राइमर अनुक्रममा सकेसम्म समान रूपमा वितरण गरिनुपर्छ, र 3′ टर्मिनल आधारलाई T को रूपमा बेवास्ता गर्नुपर्छ।
परिशिष्ट१: सीप्रत्यक्षRT-qPCR किट घटकt पूरक प्याक
1. सेल लाइसिस समाधान
सेल लाइसिस समाधान | |||
किट अवयवहरू (24-वेल लिसिस प्रणाली / राम्रो) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
१०० टि | ५०० टि | ||
भागम | बफर CL | 20 मिलीलीटर | 100 मिलीलीटर |
फोरजीन प्रोटीज प्लस II | 400 μl | १ मिली × २ | |
बफर ST | १ मिली × २ | १० एमएल | |
भागII | डीएनए इरेजर | 400 μl | १ मिली × २ |
RT मिक्स | |
किट अवयवहरू (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01011-B1 |
२०० टि | |
5× प्रत्यक्ष RT मिक्स | 800 μl |
RNase-मुक्त ddH2O | १.७ मिली × २ |
qPCR मिक्स | ||
किट अवयवहरू (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
२०० टि | १००० टि | |
2× प्रत्यक्ष qPCR मिक्स-Takman | १ मिली × २ | १.७ मिली × ६ |
20× ROX सन्दर्भ डाई | 40 μl | 200 μl |
RNase-मुक्त ddH2O | १.७ एमएल | १० एमएल |
निर्देशन पुस्तिकाहरू: