Buccal Swab/FTA कार्ड DNA Isolation Kit Genomic DNA एक्स्ट्र्याक्शन वा Purifiaction Kit from Buccal Swabs
किट विवरण:
बकल स्वाब/एफटीए कार्ड नमूनाहरूबाट उच्च-गुणस्तरको जीनोमिक डीएनए द्रुत रूपमा शुद्ध गर्नुहोस्।
◮कुनै RNase प्रदूषण छैन:किटद्वारा प्रदान गरिएको DNA-मात्र स्तम्भले प्रयोगको क्रममा RNase थप नगरी जीनोमिक DNA बाट RNA हटाउन सम्भव बनाउँछ, प्रयोगशालालाई एक्सोजेनस RNase द्वारा दूषित हुनबाट रोक्छ।
◮द्रुत गति:फोरेजीन प्रोटीजमा समान प्रोटीजहरू भन्दा उच्च गतिविधि हुन्छ, र टिस्यु नमूनाहरू चाँडै पचाउँछ;अपरेशन सरल छ, र जीनोमिक डीएनए निकासी अपरेशन 20-80 मिनेट भित्र पूरा गर्न सकिन्छ।
◮सुविधाजनक:सेन्ट्रीफ्यूगेशन कोठाको तापक्रममा गरिन्छ, र त्यहाँ 4°C कम-तापमान सेन्ट्रीफ्यूगेशन वा DNA को इथेनॉल वर्षाको आवश्यकता छैन।
◮सुरक्षा:कुनै जैविक अभिकर्मक निकासी आवश्यक छैन।
◮उच्च गुणस्तर:निकालिएको जीनोमिक डीएनएमा ठूला टुक्राहरू छन्, कुनै आरएनए छैन, आरनेज छैन, र धेरै कम आयन सामग्री छ, जसले विभिन्न प्रयोगहरूको आवश्यकताहरू पूरा गर्न सक्छ।
◮माइक्रो इल्युसन प्रणाली:यसले जीनोमिक डीएनएको एकाग्रता बढाउन सक्छ, जुन डाउनस्ट्रीम पत्ता लगाउन वा प्रयोगको लागि सुविधाजनक छ।
विवरण
यो किटले buckal swabs र FTA कार्ड (रगतको दाग) बाट उच्च-सांद्रता जीनोमिक DNA प्राप्त गर्न एक कुशल र द्रुत विधि प्रदान गर्दछ।हाम्रो कम्पनी प्रयोग गर्दै's अद्वितीय DNA-मात्र सिलिका झिल्ली स्पिन स्तम्भ र सूत्र, Foregene Protease, उच्च-सांद्रता, उच्च-गुणस्तरको जीनोमिक DNA 80 मिनेटमा निकाल्न सकिन्छ।विशेष रूपमा डिजाइन गरिएको सानो शुद्धीकरण स्तम्भले जीनोमिक डीएनएलाई बाँध्छ, र डीएनएलाई थोरै मात्रामा एल्युट गर्न सकिन्छ (15μl) प्राप्त जीनोमिक DNA को एकाग्रता बढाउन इलुसन प्रणाली, जुन डाउनस्ट्रीम पत्ता लगाउन वा प्रयोगको लागि सुविधाजनक छ।किटले एक पटकमा एक वा धेरै नमूनाहरू प्रशोधन गर्न सक्छ, र शुद्धिकरण प्रक्रियालाई जैविक पदार्थहरू जस्तै फिनोल, क्लोरोफर्म, र समय-उपभोग गर्ने आइसोप्रोपनोल वा इथेनॉल वर्षाको आवश्यकता पर्दैन, र सञ्चालन सरल र समय बचत छ।
निर्दिष्टीकरणहरू
50 तयारी
किट अवयवहरू
| बफर ST1 |
| बफर ST2 |
| रैखिक Acrylamide |
| बफर PW |
| बफर WB |
| बफर EB |
| Foregene Protease |
| DNA-मात्र स्तम्भ |
| निर्देशनहरू |
सुविधाहरू र फाइदाहरू
- कुनै RNase प्रदूषण छैन: किटले प्रदान गरेको DNA-मात्र स्तम्भले प्रयोगको क्रममा RNase थप नगरिकन जीनोमिक DNA बाट RNA हटाउन सम्भव बनाउँछ, प्रयोगशालालाई एक्सोजेनस RNase द्वारा दूषित हुनबाट जोगाउँछ।
-फास्ट स्पीड: फोरेजीन प्रोटीजसँग समान प्रोटीजहरू भन्दा उच्च गतिविधि छ, नमूनाहरू छिटो पचाउँछ;सरल सञ्चालन।
- सुविधाजनक: सेन्ट्रीफ्यूगेशन कोठाको तापक्रममा गरिन्छ, र 4 डिग्री सेल्सियस कम-तापमान सेन्ट्रीफ्यूगेशन वा DNA को इथेनॉल वर्षाको आवश्यकता पर्दैन।
-सुरक्षा: कुनै जैविक अभिकर्मक निकासी आवश्यक छैन।
-उच्च गुणस्तर: निकालिएको जीनोमिक DNA मा ठूला टुक्राहरू छन्, कुनै RNA, कुनै RNase छैन, र धेरै कम आयन सामग्री छ, जसले विभिन्न प्रयोगहरूको आवश्यकताहरू पूरा गर्न सक्छ।
-माइक्रो-इल्युसन प्रणाली: यसले जीनोमिक डीएनएको एकाग्रता बढाउन सक्छ, जुन डाउनस्ट्रीम पत्ता लगाउन वा प्रयोगको लागि सुविधाजनक छ।
किट आवेदन
यो निम्न नमूनाहरूबाट जीनोमिक डीएनए शुद्धिकरणको लागि उपयुक्त छ: बकल स्वाब्स, एफटीए कार्ड (रगतको दाग)।
भण्डारण र शेल्फ जीवन
-यो किट कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा सुक्खा अवस्थामा १२ महिनासम्म भण्डारण गर्न सकिन्छ;यदि यसलाई लामो समयको लागि भण्डारण गर्न आवश्यक छ भने, यसलाई 2-8 डिग्री सेल्सियसमा भण्डारण गर्न सकिन्छ।
नोट: यदि कम तापक्रममा भण्डारण गरियो भने, समाधान वर्षा हुने सम्भावना हुन्छ।प्रयोग गर्नु अघि, निश्चित समयको लागि कोठाको तापक्रममा किटमा समाधान राख्न निश्चित हुनुहोस्।यदि आवश्यक छ भने, यसलाई 37 डिग्री सेल्सियसको पानीको नुहाउने ठाउँमा 10 मिनेटको लागि अवक्षेपण भंग गर्नुहोस्, र प्रयोग गर्नु अघि यसलाई मिलाउनुहोस्।
- फोरजीन प्रोटीज समाधानको एक अद्वितीय सूत्र छ, जुन सक्रिय हुन्छ जब कोठाको तापक्रममा लामो समयसम्म भण्डारण गरिन्छ (3 महिना);यसको गतिविधि र स्थिरता 4°C मा भण्डारण गर्दा राम्रो हुनेछ, त्यसैले यसलाई 4°C मा भण्डारण गर्न सिफारिस गरिन्छ, यसलाई -20°C मा नराख्नुहोस्।
शुद्धीकरण स्तम्भ बन्द छ
यस किटमा, जीनोमिक डीएनए निकासी सञ्चालनमा, शुद्धिकरण स्तम्भलाई सेन्ट्रीफ्युगेशन चरण बिना नमूना इन्जाइम्याटिक लिसिस मिश्रणमा सीधै सोखिन्छ, र शुद्धिकरण स्तम्भ अपूर्ण इन्जाइमाइजेशन र नमूनाको उच्च चिपचिपाहटको कारणले अवरुद्ध हुन सक्छ।
निम्न सम्भावित कारणहरू निम्नानुसार छन्:
1. ऊतक नमूनाहरूको अपूर्ण इन्जाइम्याटिक पाचन।
सिफारिस: Foregene Protease को नमूना प्रशोधन समय उचित रूपमा विस्तार गर्न सकिन्छ वा 5 मिनेटको लागि 12,000 rpm (~ 13,400 × g) मा सेन्ट्रीफ्युगेशन पछि सुपरनेटान्ट लिन सकिन्छ।
2. टिस्यु नमूनाहरू वा ठूला तन्तुहरूको अत्यधिक प्रयोग।
सिफारिस: नमूनामा 1 Buccal स्वाब भन्दा बढी नहुनु राम्रो हुन्छ;यदि नमूना धेरै ठूलो छ भने, बफर ST1, Foregene Protease, बफर ST2 को खुराक तदनुसार बढाउनुहोस्।
3. नमूना चिपचिपापन धेरै उच्च छ।
सिफारिस: जीनोमिक डीएनए निकासी गर्नु अघि नमूनाहरू ट्रिस-एचसीएलको 10 एमएमसँग उचित रूपमा पतला गर्न सकिन्छ।
4. रगत कार्डका टुक्राहरू चुसिएको छ।
सिफारिस: ब्लड स्पट (FTA कार्ड) जीनोमिक निकासीको चरण 6 को क्षणिक सेन्ट्रीफ्युगेशन समय उचित रूपमा विस्तार गर्न सकिन्छ।
कम उपज वा कुनै DNA
त्यहाँ प्रायः विभिन्न कारकहरू छन् जसले जीनोमिक डीएनए उपजलाई असर गर्छ, नमूना उत्पत्ति, नमूना भण्डारण अवस्था, नमूना तयारी, हेरफेर, आदि।
जीनोमिक डीएनए निकासीको समयमा प्राप्त गर्न सकिँदैन
सम्भावित कारणहरू निम्नानुसार छन्:
1. नमूनाहरूको अनुपयुक्त संरक्षण वा धेरै लामो भण्डारणले जीनोमिक डीएनए गिरावट निम्त्याउँछ।
सिफारिस: मौखिक स्वाबहरू प्राथमिकतामा ताजा नमूना हुनुपर्छ, र जीनोमिक डीएनए निकासी कार्यहरूको लागि संरक्षित स्वाबहरू प्रयोग गर्न सल्लाह दिइँदैन;रगत स्पट नमूनाहरूले गुणस्तर योग्य छ र भण्डारण समय धेरै लामो हुनु हुँदैन भनेर सुनिश्चित गर्नुपर्छ।
2. धेरै थोरै टिस्यु प्रयोगले सम्बन्धित जीनोमिक DNA को कुनै निकासी हुन सक्दैन।
सिफारिस: अपरेशन गाइडमा बकल स्वाब नमूना निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, र सकेसम्म धेरै पटक वाइप गर्नुहोस् ताकि जीनोमिक डीएनए निकासीको लागि मौखिक स्वाबमा पर्याप्त कोशिकाहरू जोडिन सकिन्छ;रगतको स्पट नमूना निकासीको लागि, रगतको दाग काट्ने क्षेत्र उचित रूपमा बढाउन सकिन्छ।
3. Foregene Protease अनुचित रूपमा संरक्षित गरिएको छ, परिणामस्वरूप यसको गतिविधिमा कमी वा निष्क्रियता।
सिफारिस: फोरेजीन प्रोटीजको भण्डारण अवस्थाहरू पुष्टि गर्नुहोस् वा इन्जाइम्याटिक प्रतिक्रियाको लागि नयाँ फोरेजीन प्रोटीजसँग बदल्नुहोस्।
4. किटको अनुचित संरक्षण वा भण्डारण समय धेरै लामो छ, परिणामस्वरूप किटमा केही घटकहरू असफल हुन्छन्।
सिफारिस: सम्बन्धित प्रक्रियाहरूको लागि नयाँ Buccal swab DNA अलगाव किट खरिद गर्नुहोस्।
5. बफर WB ले निरपेक्ष इथेनॉल थप्दैन।
सिफारिस: निश्चित गर्नुहोस् कि बफर WB ले निरपेक्ष इथेनॉलको सही मात्रा थप्छ।
6. सिलिकन फिल्ममा एल्युएन्ट सही रूपमा थपिएको छैन।
सिफारिस: सिलिकन झिल्लीको बीचमा 65 डिग्री सेल्सियस पूर्व-तातो एल्युएन्ट ड्रपहरू थप्नुहोस् र इल्युसन दक्षता बढाउन कोठाको तापक्रममा 5 मिनेटको लागि छोड्नुहोस्।
कम उपज जीनोमिक डीएनए पृथक
निम्न सम्भावित कारणहरू निम्नानुसार छन्:
1. नमूनाहरूको अनुपयुक्त संरक्षण वा धेरै लामो भण्डारणले जीनोमिक डीएनए गिरावट निम्त्याउँछ।
सिफारिस: मौखिक स्वाबहरू प्राथमिकतामा ताजा नमूना गरिन्छ, र संरक्षित स्वाबहरू जीनोमिक डीएनए निकासीको लागि प्रयोग गर्नु हुँदैन।
2. यदि ऊतक नमूनाको मात्रा धेरै सानो छ भने, निकालिएको जीनोमिक डीएनए सामग्री कम हुनेछ।
सिफारिस: अपरेटिङ गाइडमा मौखिक स्वाब नमूना निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, सकेसम्म धेरै पटक वाइप गर्नुहोस् ताकि जीनोमिक डीएनए निकासीको लागि पर्याप्त कोशिकाहरू मौखिक स्वाबमा संलग्न गर्न सकिन्छ।
3. Foregene Protease अनुचित रूपमा संरक्षित गरिएको छ, परिणामस्वरूप यसको गतिविधिमा कमी वा निष्क्रियता।
सिफारिस: फोरेजीन प्रोटीजको भण्डारण अवस्थाहरू पुष्टि गर्नुहोस् वा इन्जाइम्याटिक प्रतिक्रियाको लागि नयाँ फोरेजीन प्रोटीजसँग बदल्नुहोस्।
4. Eluent समस्याहरू।
सिफारिस: इलुसनको लागि बफर ईबी प्रयोग गर्नुहोस्;यदि ddH प्रयोग गर्दै हुनुहुन्छ2O वा अन्य eluents, पुष्टि गर्नुहोस् कि eluate को pH 7.0-8.5 को बीचमा छ।
5. इल्युएट सही रूपमा ड्रपवाइजमा थपिएको छैन।
सिफारिस: सिलिकन झिल्लीको बीचमा एल्युएन्ट ड्रपहरू थप्नुहोस् र इल्युसन दक्षता बढाउनको लागि 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा छोड्नुहोस्।
6. इल्युसन तरल धेरै कम जम्मा हुन्छ।
सिफारिस: निर्देशनहरूमा आवश्यक भए अनुसार जीनोमिक डीएनए इल्युसनको लागि एल्युएन्ट प्रयोग गर्नुहोस्, कम्तिमा 15 μl भन्दा कम।
जीनोमिक डीएनए को कम शुद्धता पृथक
कम जीनोमिक डीएनए शुद्धताले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूको असफलता वा असन्तुष्ट परिणामहरू निम्त्याउन सक्छ, जस्तै: इन्जाइमहरू खोल्न सकिँदैन, PCR ले रुचिको जीन टुक्रा प्राप्त गर्न सक्दैन, आदि।
सम्भावित कारणहरू निम्नानुसार छन्:
1. हेटेरोप्रोटिन प्रदूषण, आरएनए प्रदूषण।
विश्लेषण: शुद्धीकरण स्तम्भ बफर PW प्रयोग गरेर धोएको थिएन;बफर PW धुने शुद्धीकरण स्तम्भ सही केन्द्रापसारक गति प्रयोग गरेर धोइएन।
सिफारिस: इथानोल थप्नु अघि सुपरनेटान्टमा कुनै वर्षा छैन भनेर सुनिश्चित गर्नुहोस्;निर्देशनहरू अनुसार शुद्धिकरण स्तम्भ धुन निश्चित हुनुहोस्, र यो चरण छोड्न सकिँदैन।
2. अशुद्धता आयन प्रदूषण।
विश्लेषण: बफर WB धुने शुद्धिकरण स्तम्भ हटाइयो वा एक पटक मात्र धोइयो, अवशिष्ट आयनिक प्रदूषणको परिणामस्वरूप।
सिफारिस: सकेसम्म अवशिष्ट आयनहरू हटाउन निर्देशन अनुसार बफर WB 2 पटक धुनुहोस्।
3. आरएनए इन्जाइम प्रदूषण।
विश्लेषण: विदेशी RNases बफर मा थपियो;Buffer PW धुने अपरेशन गलत थियो, RNase अवशेषहरूको परिणामस्वरूप, डाउनस्ट्रीम RNA प्रयोगात्मक सञ्चालनहरू, जस्तै इन भिट्रो ट्रान्सक्रिप्शनलाई असर गर्छ।
सिफारिस: फोरजीन श्रृंखला न्यूक्लिक एसिड आइसोलेसन किटहरूले RNase को अतिरिक्त थप बिना RNA हटाउन सक्छ, त्यसैले buccal Swab/FTA कार्ड DNA Isolation Kit RNase थप्नु पर्दैन;Buffer PW धुने शुद्धिकरण स्तम्भका लागि निर्देशनहरू पालना गर्न निश्चित हुनुहोस्, र यो चरण छोड्न सकिँदैन।
4. इथेनॉल अवशेष।
विश्लेषण: बफर WB ले शुद्धीकरण स्तम्भ धोए पछि खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेशन प्रदर्शन गरेन।
सिफारिस: निर्देशन अनुसार सही खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेशन अपरेशन गर्नुहोस्।
5. अन्य अशुद्धता प्रदूषण।
विश्लेषण: सुरक्षित नमूनाहरू वा विशेष नमूनाहरू पूर्व-उपचार गरिएका छैनन्।
सिफारिस: निर्देशन अनुसार नमूनालाई राम्ररी पूर्व-उपचार गर्नुहोस्।
