RNase एक संवेदनशील शब्द हो जुन प्रायः RNA निकासी प्रयोगहरू सञ्चालन गर्ने धेरै विद्यार्थीहरू सुन्न चाहँदैनन्।पूर्ण रूपमा सशस्त्र, अन्ततः अत्यधिक विषाक्त अभिकर्मकहरू फिनोल र क्लोरोफर्मको साथ निकालिएको आरएनए घटाइएको थियो।मेरो मेलमिलाप छैन!!!आज, प्रसिद्ध Rnase को उत्पत्ति मा एक नजर राखौं।

Ribonuclease (RNase), वा RNase, एक न्यूक्लिज हो जसले RNA लाई साना अणुहरूमा हाइड्रोलाइज गर्न सक्छ।RNase, सानो अणु प्रोटीनको रूपमा, असामान्य रूपमा स्थिर छ ।परम्परागत उच्च तापमान र उच्च दबाव स्टीम नसबंदी र प्रोटीन अवरोधकहरूले यसलाई पूर्ण रूपमा निष्क्रिय गर्न सक्दैनन्।RNase को स्थिरता मुख्यतया संरचनामा डाइसल्फाइड बन्डबाट आउँछ।उदाहरणका लागि, बोवाइन प्यान्क्रियाजको सामान्य रूपमा प्रयोग हुने RNase मा १२४ एमिनो एसिड मात्र हुन्छ, तर यसमा ४ डाइसल्फाइड बन्डहरू हुन्छन्।सल्फर बन्ड र डाइसल्फाइड बन्ड उत्कृष्ट थर्मल स्थिरता संग RNase प्रदान गर्दछ।थप रूपमा, rnase को एक अपेक्षाकृत सानो आणविक वजन छ र धेरै मामिलाहरूमा यसको मूल रूप चाँडै पुनर्स्थापित गर्न सक्छ।

अत्यन्तै स्थिर हुनुको साथै,RNases प्रयोगशालामा सर्वव्यापी छन् ।RNase एक जैविक रक्षा संयन्त्र हो।सेलको लागि, एक्सोजेनस आरएनए अक्सर घातक हुन्छ।एक्सोजेनस डीएनएको तुलनामा, एक्सोजेनस आरएनए प्रायः खतरनाक हुन्छ।आरएनए खुसीसाथ ट्रान्सक्रिप्ट र अनुवाद गरिएको छ, त्यसैले लगभग सबै जीवहरूले एक्सोजेनस आरएनएको आक्रमणबाट बचाउन आरएनएसहरू विकसित गरेका छन्।तसर्थ, प्रयोगशालामा खेती गरिएका ब्याक्टेरिया कोशिकाहरू र आरएनए निकाल्ने तपाईंले आरनेजको सुगन्ध निस्कन्छ।मानव शरीरको तरल पदार्थ (राल, आँसु, आदि) मा धेरै मात्रामा RNase हुन्छ, त्यसैले RNA घट्दा नरोऊ।जति धेरै रुन्छौ, त्यति नै खराब RNA पतन!!दिदी बहिनी आरएनए निकासीका लागि उपयुक्त छैन!

थप रूपमा, तपाईंको नाजुक छालामा पनि धेरै RNase हुन्छ, र मार्करहरू, पिपेटहरू, फ्रिजको ढोकाहरू, र छालाले छोएका ढोका ह्यान्डलहरूमा पनि RNase समावेश हुन्छ।

यति धेरै घुमफिरको साथ, RNases सँग कसरी व्यवहार गर्ने भनेर हेरौं।

आरएनए हटाउने बेला सबैले सोच्ने पहिलो कुरा होDEPC(डाइथाइल पाइरोकार्बोनेट)।DEPC ले मुख्यतया RNase सक्रिय समूह हिस्टिडाइनको इमिडाजोल रिंगसँग संयोजन गरेर प्रोटिनलाई विकृत गर्छ, जसले गर्दा इन्जाइमको गतिविधिलाई रोक्छ।0.1% DEPC ले Rnase मा राम्रो हटाउने प्रभाव पार्न सक्छ, तर हामीले ध्यान दिनु पर्छ कि DEPC एक ज्ञात कार्सिनोजेन हो, त्यसैले यसलाई प्रयोग गर्दा विशेष ध्यान दिनुपर्छ।

RNase को लागी, हामीले दुई पक्षबाट सुरु गर्न आवश्यक छ,पहिलो अन्तर्जात RNase को गतिविधिलाई रोक्न हो

ट्राइजोलमा रहेको गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट र डीटीटी जस्ता परम्परागत आरएनए निष्कर्षण अभिकर्मकहरूले RNase को डाइसल्फाइड बन्ड खोल्न सक्छन्, तर त्यहाँ अझै पनि केही RNaseहरू छन्, विशेष गरी तन्तुको नमूनाहरूमा, त्यसैले कम तापक्रममा ध्यान दिनुहोस्।

१.टिस्यु नमूनालाई बाहिर निकालेपछि तुरुन्तै तरल नाइट्रोजनमा डुबाउनुहोस्, वा व्यावसायिक आरएनए संरक्षण समाधानमा।

२.सेल नमूनाको आरएनए निकालेपछि, यसलाई लिसिस समाधानमा थप्नुहोस् र यसलाई आइस बक्समा लिज गर्नुहोस्।

3. पिसाउनका लागि तरल नाइट्रोजन प्रयोग गर्नु राम्रो हुन्छ जब ऊतक नमूनाहरू एकरूप हुन्छन्।तरल नाइट्रोजन बिना इलेक्ट्रिक होमोजेनाइजर प्रयोग गर्दा, होमोजेनेट एडाप्टरलाई पूर्ण रूपमा प्रि-कूलिंगमा ध्यान दिनुहोस्।

दोस्रो एक्सोजेनस डीनेज हो

१.पूर्ण सशस्त्र हुनुहोस्, ल्याब कोट लगाउनुहोस्, मास्क लगाउनुहोस्, र नयाँ पन्जाको एक जोडी लगाउन निश्चित हुनुहोस् (यति मितव्ययी नहुनुहोस्! यो ध्यान दिनुपर्छ कि Trizol सुपर संक्षारक छ, र यो पन्जा मार्फत पनि धेरै बलियो छ, त्यसैले आफ्नो हातमा थोपा नगर्नुहोस्)।

२.सबै प्रयोग गरिएका पिपेट टिपहरू, EP ट्यूबहरू, PCR ट्यूबहरू र अन्य उपकरणहरू de-RNase उपचार गर्नुपर्छ।यसलाई ०.१% DEPC मा भिजाउन सकिन्छ र त्यसपछि उच्च दबाबमा दबाउन सकिन्छ।फ्युम हुडमा सञ्चालनमा ध्यान दिनुहोस्।स्थानीय तानाशाहहरूले इन्जाइमहरू हटाउनका लागि उपभोग्य वस्तुहरू सीधै किन्न सक्छन्।

PS: म तपाईंलाई अल्छी विधि बताउँछु।यद्यपि उच्च तापक्रम र उच्च चापले RNase लाई पूर्ण रूपमा हटाउन सक्दैन, यसले यसको ठूलो भाग हटाउनेछ।2 पटक उच्च तापक्रम र उच्च दबाबको राम्रो प्रभाव छ, र आरएनए को निकासी कम प्रभाव छ।

३.मदिराले प्रोटिनलाई नष्ट गर्न सक्छ,त्यसैले RNA निकासी तालिका 75% अल्कोहलले सफा गर्न सकिन्छ , र पन्जा पनि रक्सी संग छर्कन सकिन्छ।

४।अन्तिम आरएनए विघटन समाधान र सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूब पनि de-RNase उपचार गर्नुपर्छ।DEPC पानी सामान्यतया प्रयोग हुने आरएनए घुलनशील समाधान हो।DEPC पानीको सही तयारी विधिको बारेमा कुरा गरौं (तपाईंले यसलाई किन्दा व्यावसायिक DEPC पुन: प्याकेज गर्न सम्झनुहोस्)

DEPC लाई 1:1000 मा अल्ट्राप्योर पानीमा थप्नुहोस्, राम्ररी हल्लाउनुहोस्, 37 डिग्री सेल्सियसमा रातभर उभिनुहोस्, र 121 डिग्री सेल्सियसमा उच्च तापक्रम र उच्च दबावमा 15 मिनेटको लागि बाँझ राख्नुहोस्।DEPC पानी -20 डिग्री सेल्सियस मा 1ml aliquots मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।

अन्तमा, संक्षेपमा: कम तापमान कुञ्जी हो, उपभोग्य वस्तुहरू राम्ररी ह्यान्डल गरिन्छ, पूर्ण रूपमा सशस्त्र र कम कुराकानी!

खैर, यो आजको रणनीतिको लागि हो।तपाईंले उल्लेख गर्नुभएको सबै आरएनए एकाग्रता र शुद्धताको कामना गर्दछु।दुबै A260/A280 2.0 हो!!!

अवश्य पनि, यदि तपाइँ एक प्रयोग गर्नुहुन्छकोठाको तापमान सञ्चालन आरएनए निकासी किट, तपाईंले माथिका समस्याहरू सामना नगर्न सक्नुहुन्छ।

कोठाको तापक्रममा सञ्चालन गर्दा, DNase थप नगरी, 11 मिनेटमा कोशिकाहरूबाट कुल आरएनए निकाल्छ, र 30 मिनेटमा जनावरको तन्तु वा बोटबिरुवाबाट कुल आरएनए निकाल्छ।

परीक्षण नमूनाहरूको लागि, कृपया सम्पर्क गर्नुहोस्:overseas@foregene.com

सम्बन्धित उत्पादनहरु:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/