एक mRNA खोप के हो
एमआरएनए भ्याक्सिनले भिट्रोमा प्रासंगिक परिमार्जन पछि प्रोटीन एन्टिजेनहरू अभिव्यक्त गर्न र उत्पादन गर्न शरीरको कोषहरूमा आरएनए स्थानान्तरण गर्दछ, जसले शरीरलाई एन्टिजेन विरुद्ध प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया उत्पादन गर्न नेतृत्व गर्दछ, जसले शरीरको प्रतिरक्षा क्षमता विस्तार गर्दछ।[१,३].
चित्र १: mRNA खोपको प्रत्यक्ष इंजेक्शनको प्रभावको योजनाबद्ध रेखाचित्र [२]
mRNA खोपहरूको वर्गीकरण
mRNA खोपहरू दुई प्रकारमा विभाजित छन्:गैर प्रतिकृतिmRNA रआत्म-प्रवर्द्धनmRNA: स्व-प्रवर्द्धन mRNA ले लक्ष्य एन्टिजेनलाई मात्र सङ्केत गर्दैन, तर इन्ट्रासेलुलर आरएनए प्रवर्द्धन र प्रोटीन अभिव्यक्ति संयन्त्रलाई सक्षम पार्ने प्रतिकृतिलाई पनि सङ्केत गर्छ।गैर-प्रतिकृति mRNA भ्याक्सिनहरूले लक्ष्य एन्टिजेनहरू मात्र इन्कोड गर्दछ र 5' र 3'अनअनुवादित क्षेत्रहरू (UTR) समावेश गर्दछ।तिनीहरू अनुकूलता र जन्मजात प्रतिरक्षाको व्यापक उत्तेजना प्रदान गर्छन्, अर्थात् सिटु एन्टिजेन अभिव्यक्ति र खतरा संकेत प्रसारणमा, र निम्न अनुप्रयोग सुविधाहरू छन्।[२,३]
● अनुकूलता र जन्मजात प्रतिरक्षाको व्यापक उत्तेजना प्रदान गर्न सक्छ, अर्थात् स्थिति एन्टिजेन अभिव्यक्ति र खतरा संकेत प्रसारणमा
● एक "संतुलित" प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, humoral र सेलुलर प्रभाव र प्रतिरक्षा मेमोरी सहित प्रेरित गर्न सक्छ।
● भ्याक्सिन ढाँचाको जटिलता नबढाई विभिन्न एन्टिजेनहरू संयोजन गर्न सकिन्छ
● प्रतिरक्षा क्षमताको निरन्तर सुधार बारम्बार खोप मार्फत हासिल गर्न सकिन्छ, र वाहकमा कुनै वा थोरै प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया छैन।
● तातो स्थिर mRNA खोपहरूले खोपहरूको ढुवानी र भण्डारणलाई सरल बनाउन सक्छ।
चित्र २: mRNA खोपको योजनाबद्ध रेखाचित्र र यसको एन्टिजेन अभिव्यक्ति संयन्त्र [४]
mRNA खोपका विशेषताहरू
परम्परागत खोपहरूसँग तुलना गर्दा, mRNA खोपहरूमा साधारण उत्पादन प्रक्रियाहरू, द्रुत विकास गति, सेल कल्चरको आवश्यकता पर्दैन, र कम लागत हुन्छ।DNA खोपहरूसँग तुलना गर्दा, mRNA खोपहरूलाई न्यूक्लियसमा प्रवेश गर्न आवश्यक छैन र होस्ट जीनोममा एकीकरणको कुनै जोखिम छैन।आधा जीवन परिमार्जन द्वारा समायोजित गर्न सकिन्छ।
तालिका १: mRNA खोपका फाइदा र बेफाइदाहरू
|
| फाइदा | कमजोरी |
| mRNA खोप | द्रुत अनुसन्धान र विकास, खोप उत्पादन मात्र 40 दिन लाग्छ | अनावश्यक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया ट्रिगर गर्नुहोस्
|
| शारीरिक अवस्था अन्तर्गत mRNA अस्थिरता, घटाउन सजिलो | सम्भावित चिकित्सीय उत्परिवर्तनबाट बच्न जीनोममा एकीकृत हुनेछैन
| |
| कुनै पनि आणविक स्थानीयकरण संकेत, ट्रान्सक्रिप्शन को लागी आवश्यक छैन | सुरक्षा आणविकको प्रभावकारिता प्रमाणित गर्न बाँकी छ
|
चित्र ३: mRNA खोप उत्पादन र तयारीको फ्लो चार्ट [४]
फोरजीन भाइरल आरएनए अलगाव किट
RT-qPCR सजिलो (एक चरण)
mRNA खोपहरूको तयारीको लागि सुधारिएको रणनीतिहरू
mRNA को कमजोर स्थिरता, तन्तुहरूमा न्यूक्लिजहरू द्वारा सजिलो गिरावट, कम सेल प्रविष्टि दक्षता, र कम अनुवाद दक्षताका कारण, यी दोषहरूले mRNA खोपहरूको प्रयोगलाई सीमित गर्दछ।अनुवाद दक्षताले पनि धेरै महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्छ।डेलिभरी वाहनहरूलाई भाइरल भेक्टर र गैर-भाइरल भेक्टरहरूमा विभाजन गर्न सकिन्छ (लाइपोसोम, गैर-लाइपोसोम, भाइरस, न्यानो कणहरू, आदि सहित)।तसर्थ, सान्दर्भिक सुधार उपायहरू आवश्यक छ।निम्न mRNA तयारीको लागि एक औषधीय सुधार रणनीति हो[२]
1 क्याप एनालगहरू संश्लेषण गर्नुहोस् वा mRNA स्थिर गर्न क्यापिङ इन्जाइमहरू प्रयोग गर्नुहोस् र युकेरियोटिक अनुवाद प्रारम्भिक कारक 4E (EIF4E) मा बाँधिएर प्रोटीन अनुवाद वृद्धि गर्नुहोस्।
2 5′-अअनुवादित क्षेत्र (UTR) र 3′-UTR mRNA स्थिर गर्न र प्रोटीन अनुवाद बढाउन तत्वहरू समायोजन गर्नुहोस्।
3 Poly(A) पुच्छर थप्दा mRNA लाई स्थिर बनाउन र प्रोटीन अनुवाद बढाउन सक्छ
4 परिमार्जित न्यूक्लियोसाइड जन्मजात प्रतिरक्षा सक्रियता कम गर्न र अनुवाद बढाउन
5 RNase III र द्रुत प्रोटीन लिक्विड क्रोमेटोग्राफी (FPLC) शुद्धीकरणको साथ उपचारले प्रतिरक्षा सक्रियता कम गर्न र अनुवाद बढाउन सक्छ।
6 अनुवाद बढाउनको लागि अनुक्रम वा कोडनहरू अनुकूलन गर्नुहोस्
7 अनुवाद प्रारम्भ कारकहरू र अनुवाद र इम्युनोजेनिसिटी परिवर्तन गर्न अन्य विधिहरूको सह-वितरण
चित्र ४: इन भिट्रो ट्रान्सक्रिप्शन (IVT) mRNA उत्पादन र एसेम्बली प्रक्रिया [५]
प्लाज्मिड DNA को ठूलो मात्रामा तयारी
प्लाज्मिड डीएनए शुद्धिकरणले मुख्यतया आरएनए, ओपन-सर्कल डीएनए एन्डोटक्सिन, होस्ट प्रोटीन र होस्ट न्यूक्लिक एसिड जस्ता प्रदूषकहरूलाई हटाउँछ, र सामान्यतया पुन: संयोजक प्लाज्मिडलाई ई. कोलाईमा रूपान्तरण गर्दछ।ई. कोलाईले उच्च घनत्व किण्वन, त्यसपछि ठोस तरल विभाजन, र ई. कोलाई सङ्कलन गर्छ।E. कोलाई त्यसपछि क्षारीय lysis, केन्द्रापसारक ठोस तरल विभाजन र lysis पछि माइक्रोफिल्ट्रेशन स्पष्टीकरण, अल्ट्राफिल्ट्रेशन र स्पष्टीकरण पछि एकाग्रता, र त्यसपछि क्रोमेटोग्राफिक शुद्धीकरणको अधीनमा छ।
प्लाज्मिड डीएनए शुद्धीकरण:
फोरजीन जनरल प्लाज्मिड मिनी किट
【१】苗鹤凡, 郭勇, 江新香।mRNA疫苗研究进展及挑战[जे]।免疫学杂志, २०१६(०५):४४६-४४९।
【२】पर्डी एन, होगन एमजे, पोर्टर एफडब्ल्यू, एट अल।mRNA खोपहरू - खोप विज्ञान [J] मा एक नयाँ युग।प्रकृति समीक्षा ड्रग डिस्कवरी, 2018।
【३】Kramps T., Elbers K. (2017) RNA खोपहरूको परिचय।मा: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA खोपहरू।आणविक जीवविज्ञानमा विधिहरू, खण्ड 1499। Humana प्रेस, न्यूयोर्क, NY।
【४】Maruggi G, Zhang C, Li J, et al।mRNA संक्रामक रोगहरू नियन्त्रण गर्न खोप विकासको लागि एक रूपान्तरण प्रविधिको रूपमा [J]।आणविक थेरापी, २०१९।
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,Tiloring mRNA भ्याक्सिन टु ब्यालेन्स इननेट/एडाप्टिभ इम्यून रेस्पोन्स, Trends in Molecular Medicine, Volume 26, अंक 3,2020, पृष्ठ 311-323।
पोस्ट समय: अगस्ट-05-2021
