ग्लु रिकभरी सुधार गर्न सुझावहरू

1. इलेक्ट्रोफोरेसिसको समयमा नमूना लोड बढाउनुहोस्।

2. ताजा तयार इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर प्रयोग गर्नुहोस्।

3. ग्लु काट्दा, ग्लु काट्ने भोल्युम कम गर्न स्ट्रिप्सको साथ मात्र गोंद काट्ने प्रयास गर्नुहोस्: केहि उद्देश्यका टुक्राहरूसँग गोंद आवश्यक पर्दैन, अन्यथा यसले रिकभरी दरलाई असर गर्नेछ।

4. ग्लुको दुई वा बढी टुक्रा पग्लिसकेपछि, भोल्युम जतिसुकै ठूलो भए पनि ट्यूब प्रयोग गर्नुहोस् र त्यसलाई एउटै स्तम्भमा स्थानान्तरण गर्नुहोस्।

5. सोलमा थपिएको समाधान अलि बढी हुन सक्छ, जुन DNA लाई झिल्लीमा बाँध्न धेरै अनुकूल हुन्छ, तर सामान्यतया 750ul भन्दा बढी हुँदैन।

6. जेल रिकभरीको कुञ्जी स्तम्भमा नुन सांद्रता, अम्लता (चार्ज) र समाधानको हाइड्रोफोबिसिटी मार्फत स्तम्भमा DNA बाँध्नु हो।त्यसकारण, यदि इलेक्ट्रोफोरेसिस बफरको pH धेरै उच्च छ भने, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) सोलमा थप्न सकिन्छ;झिल्लीमा DNA अणुहरूलाई राम्रोसँग अवरोध गर्नको लागि, 30% आइसोप्रोप्यानोललाई ग्लुलाई पगालेपछि तरलमा तातोमा थप्न सकिन्छ।

7. एल्युएन्ट थप्नु अघि, इथानोललाई पूर्ण रूपमा वाष्पीकरण गर्न केही मिनेट (लगभग १० मिनेट) को लागि कोठाको तापक्रममा स्तम्भ छोड्नुहोस्।

8. अन्तमा, रिकभरी भोल्युम कम गर्न कम एल्युएन्ट थप्नुहोस्।सामान्यतया, 30-50μl एल्युएन्ट इल्युसनको लागि प्रयोग गरिन्छ (धेरै थोरै होइन, अन्यथा यसले झिल्लीलाई भिजाउन सक्षम हुनेछैन, जुन इलुसनको लागि अनुकूल छैन);इलुसन थोपाहरू झिल्लीको केन्द्रमा हुन्छन्, झिल्लीमा बाँधिएको डीएनएलाई पूर्ण रूपमा एल्युट गर्न।

9. एल्युएन्ट थपेपछि, यसलाई 55 डिग्रीको पानीको नुहाउने ठाउँमा 5 मिनेटको लागि एल्युट गर्न सकिन्छ वा 50 डिग्रीको पानीको नुहाउने ठाउँमा 10 मिनेट भन्दा बढी राख्न सकिन्छ, वा रातभर 4 डिग्रीमा प्याराफिल्मले बन्द गरेर अर्को दिन रिकभरीको लागि सेन्ट्रीफ्युज गर्न सकिन्छ, प्रभाव राम्रो हुन्छ।

10. सेन्ट्रीफ्यूज इलुएटलाई सोस्र्पसन स्तम्भमा फिर्ता थप्नुहोस् र फेरि सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्।

PCR उत्पादन रिकभरीको लागि विस्तृत विधि र प्रक्रियाहरू

1. साधारण रबर रिसाइकिलिंग

यदि तपाइँ ग्लु रिकभर गर्न चाहनुहुन्छ भने, किट प्रयोग गर्नु राम्रो हुन्छ, जुन सुविधाजनक छ र थोरै उच्च रिकभरी दर छ।यदि तपाइँ वास्तवमै यसलाई म्यानुअल रूपमा पुन: प्राप्ति गर्न आवश्यक छ भने, तपाइँ ग्लु काटिसके पछि TE को 3 गुणा मात्रा थप्न सक्नुहुन्छ।पानीको नुहाउने ठाउँमा पग्लिसकेपछि, फिनोल, फिनोल/क्लोरोफर्मलाई सफासँग निकालिन्छ, र इथानोललाई अवक्षेपित गरिन्छ।त्यही भयो।

2. कम पिघलने बिन्दु जेलबाट DNA रिकभरी

DNA टुक्राहरूको शुद्धीकरण जेलको भोल्युम बराबर TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) थप्नुहोस्, र जेललाई पूर्ण रूपमा विघटन गर्न 5 मिनेटको लागि 65 डिग्री सेल्सियस पानीको नुहाउने ठाउँमा राख्नुहोस्।

यसलाई कोठाको तापक्रममा ल्याइएपछि, समान मात्रामा फिनोल (TE सँग संतृप्त, TE माथिल्लो तहमा बन्द गरिएको थियो, र फिनोलको तल्लो तह हटाइएको थियो) थपियो, र मिश्रणलाई बिस्तारै मिलाइयो (मिश्रण आवश्यक छैन), र 12,000 rpm मा 3 मिनेटको लागि सेन्ट्रीफ्युज गरियो।1-2 पटक दोहोर्याउनुहोस्।

सुपरनेटेन्ट लिनुहोस्, 0.1 मात्रा 3mol/L सोडियम एसीटेट (pH 5.2) र 2.5 गुणा पूर्ण इथेनॉलको मात्रा थप्नुहोस्।शुद्ध DNA लाई उपयुक्त मात्रामा TE संग विघटन गर्नुहोस्, सामग्री मापन गर्नुहोस्, र प्रयोगको लागि तयारी गर्नुहोस् (यसलाई लक्षित जीन संरचना विश्लेषण, प्रोब तयारी, आदिका लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ)।

3. राम्रो प्रवर्धन विशिष्टता संग PCR रिकभरी

यदि PCR प्रवर्धनको विशिष्टता राम्रो छ भने, यो PCR उत्पादनको सरल शुद्धीकरण र रिकभरी मात्र हो।तपाईंले PCR उत्पादनमा 50ug/ml proteinase K थप्न सक्नुहुन्छ, 1 घन्टाको लागि 37 डिग्री, फिनोल/क्लोरोफर्मको साथ एक पटक निकाल्न सक्नुहुन्छ, क्लोरोफर्मको साथ एक पटक निकाल्न सक्नुहुन्छ, र ०.१ भोल्युम सुपरनेटान्ट थप्न सक्नुहुन्छ।सोडियम एसीटेट 2.5 भोल्युम निरपेक्ष इथेनोलको साथ वर्षाद्वारा बरामद गरियो।

सम्बन्धित उत्पादनहरु:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/