भर्खरै, मैले अचम्मको कुरा पत्ता लगाए!उहाँको वरिपरि धेरै उन्नत प्रयोग पेशेवरहरूलाई केही धेरै आधारभूत प्रयोगात्मक ज्ञान बिन्दुहरू पनि थाहा छैन।

उदाहरणका लागि, के तपाईं निम्न प्रश्नहरूको जवाफ दिन सक्नुहुन्छ?

के त्यहाँ OD260 र A260 बीचको भिन्नता छ?प्रत्येकको अर्थ के हो?
OD अप्टिकल घनत्व (अप्टिकल घनत्व) को संक्षिप्त रूप हो, A अवशोषण (अवशोषण) को संक्षिप्त रूप हो, दुई अवधारणाहरू वास्तवमा समान छन्, "अप्टिकल घनत्व" "अवशोषण" हो, तर "अप्टिकल घनत्व" धेरै राष्ट्रिय मापदण्डहरू र अधिक मानकहरूसँग अनुरूप छ।

सामान्यतया हामी न्यूक्लिक एसिड एकाग्रता गणना गर्न 260nm मा OD मान मापन गर्छौं, त्यसैले 1OD ले के प्रतिनिधित्व गर्छ?
न्यूक्लिक एसिडको अधिकतम अवशोषण शिखर 260nm को तरंगदैर्ध्यमा हुन्छ, जसमा DNA र RNA दुवै हुन्छ, साथै टुक्रा टुक्रा न्यूक्लिक एसिड (यो मुख्य बिन्दु हो)।
260 nm को तरंगदैर्ध्यमा मापन गरिएको OD मान OD260 को रूपमा रेकर्ड गरिएको थियो।यदि नमूना शुद्ध छ भने, OD260 मानले न्यूक्लिक एसिड नमूनाको एकाग्रता गणना गर्न सक्छ।
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (डबल-स्ट्र्यान्ड डीएनए)
=37 μg/ml ssDNA (एकल-स्ट्र्यान्डेड DNA)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
RT-PCR, Realtime-PCR र QPCR बीच कुनै सम्बन्ध र भिन्नता छ?
RT-PCR रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन PCR को लागी छोटो छ
वास्तविक समय PCR = qPCR, मात्रात्मक वास्तविक समय PCR को लागी छोटो
यद्यपि रियल टाइम पीसीआर (रियल-टाइम फ्लोरोसेन्ट क्वान्टीटेटिभ पीसीआर) र रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन पीसीआर (रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन पीसीआर) दुबैलाई आरटी-पीसीआर भनिन्छ।तर अन्तर्राष्ट्रिय महासन्धि हो: RT-PCR ले विशेष रूपमा रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन PCR लाई जनाउँछ।

जीवविज्ञानमा DNA/RNA को लम्बाइ वर्णन गर्न सामान्यतया प्रयोग हुने nt, bp र kb के हो?
nt = न्यूक्लियोटाइड
bp = आधार जोडी आधार जोडी
kb = किलोबेस

निस्सन्देह, तपाईले भन्नुहुनेछ कि धेरै मानिसहरूले यी साना विवरणहरूको वास्ता गर्दैनन्!सबैले यो गर्छन्, र कसैले तपाईंलाई यो के हो भनेर सोध्ने छैन।तपाईलाई थाहा छ यो अनावश्यक छ, हैन?

होइन, होइन, यो जान्न धेरै आवश्यक छ!जसको कारणले ?
किनभने तपाईं लेख पोस्ट गर्न चाहनुहुन्छ!भाइ!तपाईं स्नातकको लागि लक्ष्य गर्दै हुनुहुन्छ वा वैज्ञानिक अनुसन्धान उपलब्धिहरू पछ्याउँदै हुनुहुन्छ, तपाईंले बोल्नको लागि लेखहरूमा भर पर्नु पर्छ!

न्यूक्लिक एसिड निकासी सरल र सबैभन्दा आधारभूत प्रयोग हुनुपर्छ।न्यूक्लिक एसिड निकासीको गुणस्तरले पछिल्ला प्रयोगहरूको नतिजालाई प्रत्यक्ष रूपमा निर्धारण गर्दछ।

मैले धेरै पटक भनेको भए पनि, अझै पनि धेरै साथीहरू छन् जसले वास्ता गर्दैनन्।यस पटक मैले लेखबाट बाहिर जाने निर्णय गरें!

मात्रात्मक वास्तविक-समय पीसीआर प्रयोगहरूको प्रकाशनको लागि न्यूनतम जानकारी, MIQE भनिन्छ, अन्तर्राष्ट्रिय रूपमा सुरू गरिएको फ्लोरोसेन्स मात्रात्मक प्रयोग दिशानिर्देशहरूको एक सेट हो, जसले फ्लोरोसेन्स मात्रात्मक PCR प्रयोगहरू मूल्याङ्कन गर्न र लेखहरू प्रकाशन गर्न आवश्यक प्रयोगात्मक जानकारीको लागि न्यूनतम मापदण्डहरू प्रस्ताव गर्दछ।प्रयोगकर्ता द्वारा प्रदान गरिएको प्रयोगात्मक अवस्था र विश्लेषण विधिहरू मार्फत, समीक्षकहरूले अनुसन्धानकर्ताको प्रयोगात्मक योजनाको वैधतालाई राम्रोसँग मूल्याङ्कन गर्न सक्छन्।

यो देख्न सकिन्छ कि न्यूक्लिक एसिड निकासीको खण्डमा, निम्न पत्ता लगाउने वस्तुहरू प्रस्ताव गरिएको छ,

"E" ले उपलब्ध गराउनु पर्ने जानकारीलाई जनाउँछ र "D" ले आवश्यक भएमा उपलब्ध गराउनुपर्ने जानकारीलाई जनाउँछ।

फारम धेरै जटिल छ, वास्तवमा, म भन्न चाहन्छु कि सबैले सुरु गर्न आवश्यक छ

शुद्धता (D), उपज (D), अखण्डता (E) र स्थिरता (E) यी चार पक्षहरूमा न्यूक्लिक एसिडको मूल्याङ्कन गर्न।

प्रयोगात्मक बानीहरू अनुसार, पहिले शुद्धता र एकाग्रताको मूल्याङ्कन विधिहरूको बारेमा कुरा गर्नुहोस्।

OD मापन प्रयोगकर्ताहरूको लागि मनपर्ने र सजिलो पत्ता लगाउने विधि हो।सिद्धान्तको लागि, म यहाँ विवरणहरूमा जाने छैन।धेरै प्रयोगशालाहरूले अब अल्ट्रा-माइक्रो स्पेक्ट्रोफोटोमिटरहरू प्रयोग गर्छन् सीधा मात्रात्मक रूपमा न्यूक्लिक एसिड नमूनाहरू विश्लेषण गर्न।शोषक मान प्रदर्शन गर्दा, कार्यक्रमले प्रत्यक्ष रूपमा एकाग्रता मान (न्यूक्लिक एसिड, प्रोटीन र फ्लोरोसेन्ट डाई) र सम्बन्धित अनुपातहरू दिन्छ।OD मानको विश्लेषणको लागि, यो चित्र बचत गर्नुहोस् र तपाईं ठीक हुनुहुनेछ।

विश्वव्यापी OD मान समाधान सूची

जे होस्, त्यहाँ केही सावधानीहरू छन् जुन तपाईंको लागि छुट्टै बाहिर ल्याउन आवश्यक छ।

(जे भए पनि, मलाई थाहा छ तपाईलाई बचत गर्ने र तपाईलाई आवश्यक नभएसम्म पर्खने व्यक्ति हुनुपर्दछ!)

नोट 1 उपकरण

OD मान विभिन्न उपकरणहरूद्वारा प्रभावित हुनेछ।जबसम्म OD260 निश्चित दायरा भित्र हुन्छ, OD230 र OD280 का मानहरू अर्थपूर्ण हुन्छन्।उदाहरण को लागी, 260nm मा साझा Eppendorf D30 को अवशोषण दायरा 0 ~ 3A हो, र थर्मो को NanoDrop One 260nm मा छ।0.5 ~ 62.5A को अवशोषण दायरा।

नोट २पतला अभिकर्मक

OD मान विभिन्न अभिकर्मकहरूको कमजोरीबाट प्रभावित हुन सक्छ।उदाहरणका लागि, pH मा शुद्ध RNA को OD260/280 पढाइ7.5 10mm ट्रिसबफर 1.9-2.1 को बीचमा छ, जबकि मातटस्थ जलीय समाधानअनुपात कम हुनेछ, हुनसक्छ केवल 1.8-2.0, तर यसको मतलब यो होइन कि RNA को गुणस्तर फरक फरक हुन्छ।

नोट ३अवशिष्ट पदार्थहरू

अवशिष्ट पदार्थहरूको अस्तित्वले न्यूक्लिक एसिड एकाग्रता मापनको शुद्धतालाई असर गर्छ, त्यसैले न्यूक्लिक एसिड नमूनाहरूमा प्रोटिन, फिनोल, पोलिसेकराइड र पोलिफेनोल अवशेषहरूलाई सकेसम्म बेवास्ता गर्न आवश्यक छ।

यद्यपि, वास्तवमा, जैविक अभिकर्मकहरूसँग निकासी पुरानो विधि हो।व्यापारिक किटहरूमा, निकासी प्रभाव सेन्ट्रीफ्यूगेशनको साथ संयुक्त सिलिका-आधारित सोखन स्तम्भ मार्फत प्राप्त गर्न सकिन्छ, हटाउन गाह्रो हुने विषाक्त र हानिकारक जैविक अभिकर्मकहरूलाई बेवास्ता, आदि। समस्या, जस्तै।फोरेजीनको न्यूक्लिक एसिड निकासी किट, DNase/RNase र विषाक्त जैविक अभिकर्मकहरू सञ्चालनमा प्रयोग गर्दैन, छिटो र सुरक्षित, रप्रभाव छराम्रो(संयोगवश भन्यो कि यो टाउको थियो, तर मलाई थाहा छ तपाई जान्न चाहानुहुन्छ)।

उदाहरण १: जीनोमिक डीएनए निकासी उपज र शुद्धता

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) ले विभिन्न स्रोतहरूबाट माटोको नमूनाहरूको उपचार गर्छ, र प्राप्त गरिएको जीनोमिक DNA को मात्रा र शुद्धता निम्न तालिकामा देखाइएको छ:
उदाहरण २: टिस्यु आरएनए निकासी उपज र शुद्धता

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) ले विभिन्न तन्तुका नमूनाहरू प्रशोधन गरेको छ, र प्राप्त भएको RNA को मात्रा र शुद्धता तलको तालिकामा देखाइएको छ (मुसाको तन्तुका लागि):
जे होस्, तपाईंले OD मानको साथ गरिसक्नुभयो भनेर नसोच्नुहोस्।के तपाइँसँग मैले तपाइँको लागि अगाडि कोरेका मुख्य बुँदाहरूको ख्याल राख्नु भएको छ?

सूचना

खण्डित न्यूक्लिक एसिड अणुहरू पनि अवशोषणमा गणना गरिनेछ।तपाईंसँग RNA मा जीनोमिक DNA अवशेषहरू छन् भनी मान्दै, तपाईंको OD मान धेरै उच्च देखिन्छ, तर RNA को वास्तविक एकाग्रता निर्धारण गर्न सकिँदैन।तपाईंको आरएनए हो कि छैन यो स्पष्ट छैन कि त्यहाँ गिरावट छ, त्यसैले हामीलाई अझै पनि थप सही निर्णय दिनको लागि एक व्यापक मूल्याङ्कन विधि चाहिन्छ, त्यो हो, MIQE मा उल्लेख गरिएको न्यूक्लिक एसिड अखण्डता मूल्याङ्कन।