PCR, धेरै PCR, PCR मा, रिभर्स PCR, RT-PCR, qPCR (1)-PCR

हामी विभिन्न PCR को अवधारणाहरू, चरणहरू र विवरणहरू क्रमबद्ध गर्नेछौं

Ⅰ. PCR

Polymerase Chain Reaction, PCR भनिन्छ, एक आणविक जैविक प्रविधि हो जुन विशिष्ट DNA टुक्राहरू विस्तार गर्न प्रयोग गरिन्छ।यसलाई भिट्रोमा विशेष डीएनए प्रतिकृतिको रूपमा लिन सकिन्छ।DNA पोलिमरेज (DNA Polymerase I) को प्रारम्भिक रूपमा 1955 मा पत्ता लगाइएको थियो, र प्रयोगात्मक मूल्य र व्यावहारिकता भएको E. Coli को Klenow Fragment को प्रारम्भिक 1970s मा डा. H. Klenow द्वारा पत्ता लगाइएको थियो, तर किनभने यो इन्जाइमले तापमान सहन सक्दैन, उच्च तापक्रमले यसलाई पतन गर्न सक्छ, त्यसैले यो उच्च तापक्रममा पोलिमरेज प्रतिक्रियाको साथ डीजेनेरेट गर्न सक्छ।आज प्रयोगमा रहेका इन्जाइमहरू (टाक पोलिमरेज भनिन्छ), सन् १९७६ मा तातो वसन्त ब्याक्टेरिया थर्मस एक्वाटिकसबाट अलग गरिएको थियो। यसको विशेषता यो हो कि यसले उच्च तापक्रमलाई प्रतिरोध गर्न सक्छ र यो एक आदर्श इन्जाइम हो, तर सन् १९८० पछि यसको व्यापक रूपमा प्रयोग हुन्छ।PCR को मूल आदिम प्रोटोटाइपको मूल अवधारणा जीन मर्मत र प्रतिलिपि गर्ने जस्तै छ, जुन 1971 मा डा. केजेल क्लेप्पले प्रस्ताव गरेका थिए। उहाँले पहिलो सरल र छोटो अवधिको जीन प्रतिलिपि प्रकाशित गर्नुभयो (PCR को पहिलो दुई चक्र प्रतिक्रियाहरू जस्तै)।आज विकसित भएको PCR लाई 1983 मा डा. केरी बी. मुलिस द्वारा विकसित गरिएको थियो। डा. मुलिसले त्यस वर्ष PE कम्पनीहरूमा सेवा गरे, त्यसैले PCR उद्योगमा PE को विशेष हैसियत छ।डा. मुलिसले आधिकारिक रूपमा 1985 मा साइकी र अन्यसँग पहिलो सम्बन्धित पेपर प्रकाशित गरे। त्यसबेलादेखि, पीसीआरको प्रयोग दिनमा हजारौं माइल छ, र सम्बन्धित कागजको गुणस्तरले अन्य धेरै अनुसन्धान विधिहरूलाई अप्ठ्यारो बनाउन सक्छ।पछि, PCR प्रविधि जैविक वैज्ञानिक अनुसन्धान र क्लिनिकल अनुप्रयोगहरूमा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ, आणविक जीवविज्ञान अनुसन्धानको सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण प्रविधि बन्न पुग्यो।मुलिसले रसायनशास्त्रमा सन् १९९३ को नोबेल पुरस्कार पनि जितेका थिए।

PCRसिद्धान्त

PCR प्रविधिको आधारभूत सिद्धान्त DNA को प्राकृतिक प्रतिकृति प्रक्रिया जस्तै छ, र यसको विशिष्टता oligonucleotide प्राइमर मा निर्भर गर्दछ जुन लक्ष्य अनुक्रम को दुबै छेउ को पूरक हो।PCR डिजेनेरेशन-एनिलिङ-विस्तार गर्ने तीनवटा आधारभूत प्रतिक्रिया चरणहरू मिलेर बनेको छ: ①टेम्प्लेट DNA को डिजेनेरेशन: टेम्प्लेट DNA निश्चित समयको लागि लगभग 93°C मा तताइएपछि, PCR प्रवर्द्धनद्वारा बनाइएको डुअल-चेन DNA को लागि दोहोरो DNA समाधानले टेम्प्लेट DNA लाई प्राइमरी बनाउनको लागि तयार गर्न सक्छ। अर्को गोल प्रतिक्रिया।②टेम्प्लेट DNA र प्राइमरको annealing (कम्पाउन्ड): टेम्प्लेट DNA ततिएपछि र एकल चेनमा बिग्रिएपछि, तापक्रम लगभग 55 डिग्री सेल्सियसमा झर्छ।प्राइमर र टेम्प्लेट DNA एकल-चेन को पूरक अनुक्रम।③प्राइमरको विस्तार: DNA टेम्प्लेट-प्राइमर बाइन्डिङ TaqDNA पोलिमरेजको कार्यमा आधारित छ, प्रतिक्रिया कच्चा मालको रूपमा dNTP सँग।प्रतिकृतिको सिद्धान्त राख्नुहोस्, टेम्प्लेट DNA चेनलाई पूरक बनाउने नयाँ अर्ध-आरक्षित प्रतिलिपि चेनलाई संश्लेषण गर्नुहोस्, र दोहोर्याइएको चक्र डिजेनेरेशन-एनिलिङ-एक्सटेन्सन तीन प्रक्रियाहरूले थप "सेमी-आरक्षित प्रतिलिपि चेन" प्राप्त गर्न सक्छन्, र यो नयाँ चेन फेरि उपलब्ध छ अर्को चक्रको लागि टेम्प्लेट बन्नुहोस्।यो लूप पूरा गर्न 2-4 मिनेट लाग्छ, लक्ष्य जीन 2-3 घण्टामा लाखौं पटक विस्तार गर्न सकिन्छ।

मानकPCRप्रतिक्रिया प्रणाली

PCR प्रतिक्रिया को पाँच तत्व

PCR प्रतिक्रियामा मुख्यतया पाँच प्रकारका पदार्थहरू समावेश हुन्छन्, अर्थात् प्राइमर, इन्जाइम, dNTP, टेम्प्लेट र बफर (Mg2+ आवश्यक छ)।[PCR प्रक्रिया]

मानक PCR प्रक्रियालाई तीन चरणमा विभाजन गरिएको छ

1. DNA डिजेनेरेसन (90°C-96°C): थर्मल एक्शन अन्तर्गत डुअल-चेन DNA टेम्प्लेटहरू, हाइड्रोजन बन्डहरू टुट्छ, एकल-चेन DNA बनाउँछ।

2. एनिलिङ (25 ℃ -65 ℃): प्रणालीको तापक्रम घटाइन्छ, प्राइमरलाई DNA टेम्प्लेटसँग मिलाएर स्थानीय डुअल-चेन बनाइन्छ।

3. एक्स्टेन्सन (70℃ -75℃): Taq इन्जाइम (लगभग 72°C, सबै भन्दा राम्रो गतिविधि) को कार्य अन्तर्गत, dNTP लाई कच्चा मालको रूपमा प्रयोग गरिन्छ, प्राइमरको 5′ छेउबाट → 3′ छेउसम्म विस्तार हुन्छ, संश्लेषण र टेम्प्लेट एकअर्काको DNA चेनलाई पूरक हुन्छन्।

प्रत्येक चक्र डिनेचर्ड, annealed र विस्तारित छ, DNA सामग्री दोब्बर।हाल, छोटो प्रवर्द्धन क्षेत्रको कारण, Taq इन्जाइम गतिविधि इष्टतम नभए पनि केहि PCR धेरै छोटो समयमा प्रतिकृति गर्न सकिन्छ, त्यसैले यसलाई दुई चरणहरूमा परिवर्तन गर्न सकिन्छ, अर्थात्, annealing र विस्तार एकै समयमा 60°C-65°C मा प्रदर्शन गर्न सकिन्छ।लिफ्टिङ र कूलिंग प्रक्रिया कम गर्न र प्रतिक्रिया गति सुधार गर्न।

PCR प्रतिक्रिया सुविधाहरू

● उच्च-विशिष्टता

PCR प्रतिक्रियाको विशिष्ट निर्णायक कारकहरू हुन्: ①प्राइमर र टेम्प्लेट DNA को विशिष्ट संयोजन।②आधार जोड्ने सिद्धान्त।③ TaqDNA पोलिमरेज संश्लेषण प्रतिक्रिया को वफादारी।④ लक्ष्य जीनको विशिष्टता र रूढ़िवादीता।

प्राइमर र टेम्प्लेटहरूको सही संयोजन कुञ्जी हो।प्राइमर र टेम्प्लेटको बाइन्डिङ र प्राइमर चेनको विस्तार क्षारीय आधार मिलानको सिद्धान्तमा आधारित छ।पोलिमरेज संश्लेषण प्रतिक्रियाहरूको वफादारी र प्रतिक्रियामा टेम्प्लेट र प्राइमरको बाध्यकारी (कम्पाउन्ड) बनाउन Taq DNA पोलिमरेजको उच्च तापमान प्रतिरोध उच्च तापक्रममा प्रदर्शन गर्न सकिन्छ।संयोजनको विशिष्टता धेरै बढेको छ।क्लिपले उच्च स्तरको शुद्धता कायम राख्न सक्छ।उच्च रूढ़िवादीता र उच्च रूढ़िवादीताको साथ लक्षित आनुवंशिक क्षेत्र चयन गरेर, यसको विशिष्टता उच्च छ।

● उच्च संवेदनशीलता

PCR उत्पादनहरूको उत्पादन मात्रा अनुक्रमणिकाद्वारा बढाइन्छ, जसले पिकर (PG=10-12) को प्रारम्भिक टेम्प्लेटलाई माइक्रोग्राम (μg= -6) को स्तरमा माइक्रोकन्ट्रोलरको स्तर बढाउन विस्तार गर्न सक्छ।लक्ष्य कक्षहरू 1 मिलियन कक्षहरूबाट पत्ता लगाउन सकिन्छ;भाइरस पत्ता लगाउने क्रममा, PCR को संवेदनशीलता 3 RFUs (खाली ठाउँहरू बनाइएको एकाइहरू) पुग्न सक्छ;ब्याक्टेरिया विज्ञानमा न्यूनतम पत्ता लगाउने दर 3 ब्याक्टेरिया हो।

● सरल र छिटो

PCR प्रतिबिम्बले उच्च-तापमान Taq DNA पोलिमरेज प्रयोग गर्दछ, जसले प्रतिक्रिया समाधानलाई एकै समयमा थप्छ, त्यो हो, DNA एम्प्लिफिकेशन समाधान र पानी नुहाउने भाँडोमा डिजेनेरेशन-एनिल-एक्सटेन्सन प्रतिक्रिया।सामान्यतया, प्रवर्धन प्रतिक्रिया 2 देखि 4 घण्टामा पूरा हुन्छ।संवर्धित उत्पादनहरू सामान्यतया बिजुली तरवार द्वारा विश्लेषण गरिन्छ, र आइसोटोपहरू प्रयोग गर्नुपर्दैन, रेडियोधर्मी प्रदूषण छैन, र सजिलो पदोन्नति।

● नमूनाको शुद्धता कम छ

त्यहाँ भाइरस वा ब्याक्टेरिया र कल्चर सेलहरू अलग गर्न आवश्यक छैन।डीएनए कच्चा उत्पादनहरू र आरएनए एम्पलीफायरको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।रगत, शरीरको तरल पदार्थ, खोकी धुने तरल पदार्थ, कपाल, कोशिकाहरू र जीवित तन्तु जस्ता क्लिनिकल नमूनाहरू प्रयोग गरेर डीएनए प्रवर्धन पत्ता लगाउन सकिन्छ।

PCRसामान्य समस्याहरू

● गलत नकारात्मक, कुनै एम्प्लीफाइड ब्यान्ड छैन

PCR प्रतिक्रियाको मुख्य चरणहरू समावेश छन्: ① टेम्प्लेट न्यूक्लिक एसिडको तयारी, ② गुणस्तर र प्राइमरहरूको विशिष्टता, ③ इन्जाइमहरूको गुणस्तर ④ PCR चक्र अवस्थाहरू।कारण पत्ता लगाउन माथिका लिङ्कहरूको लागि पनि विश्लेषण र अध्ययन गर्नुपर्छ।

टेम्प्लेटहरू: ① टेम्प्लेटले विविध प्रोटीन समावेश गर्दछ, ② टेम्प्लेटमा Taq इन्जाइम अवरोधक हुन्छ, ③ टेम्प्लेटमा रहेको प्रोटिन हटाइएको छैन, विशेष गरी क्रोमोजोममा रहेको समूह प्रोटीन।⑤ डेमिनर न्यूक्लिक एसिड डिजेनेरेशन पूर्ण रूपमा छैन।जब इन्जाइमहरू र प्राइमरहरूको गुणस्तर राम्रो हुन्छ, त्यहाँ कुनै प्रवर्धन ब्यान्ड हुँदैन, जुन प्रायः नमूनाहरूको पाचन उपचार हो।टेम्प्लेट न्यूक्लिक एसिड निकासी प्रक्रियामा केहि गडबड छ, त्यसैले प्रभावकारी र स्थिर पाचन समाधान तयार गर्न, यसको प्रक्रिया निश्चित हुनुपर्छ र मनमाना परिवर्तन गर्नु हुँदैन।

इन्जाइम निष्क्रियता: एक नयाँ इन्जाइम वा पुरानो र नयाँ दुवै इन्जाइमहरू सँगै प्रयोग गरिनु पर्छ कि इन्जाइम गतिविधि हराएको वा अपर्याप्त छ, गलत नकारात्मक निम्त्याउँछ।यो ध्यान दिनु पर्छ कि Taq इन्जाइम वा ethidium ब्रोमाइड कहिलेकाहीं बिर्सिएको छ।

प्राइमर: प्राइमरको गुणस्तर, प्राइमरको एकाग्रता, र दुई प्राइमरहरूको एकाग्रता सममित छ कि छैन।यो PCR विफलताको लागि एक सामान्य कारण हो वा बढ्दो ब्यान्ड आदर्श र फैलिएको प्रवण छैन।केही ब्याच नम्बरहरूको प्राइमरको गुणस्तरमा समस्याहरू छन्।दुई प्राइमरहरूमा उच्च एकाग्रता र कम एकाग्रता छ, जसले कम दक्षता असममित प्रवर्धनको कारण बनाउँछ।काउन्टरमेजरहरू हुन्: ① एकाइहरू संश्लेषण गर्न राम्रो प्राइमर चयन गर्नुहोस्।② प्राइमरको एकाग्रता OD मानमा मात्र निर्भर गर्दैन, तर अग्र सुगर जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस बनाउन प्राइमरको मूल तरलमा पनि ध्यान दिन्छ।त्यहाँ एउटा प्राइमर स्ट्रिप जोन हुनुपर्दछ, र दुई प्राइमरहरूको चमक सामान्यतया एकरूप हुनुपर्छ।बेल्ट, PCR यस समयमा असफल हुन सक्छ, र यो प्राइमर संश्लेषण एकाइ संग समाधान गर्नुपर्छ।यदि प्राइमर उच्च छ भने, चमक कम छ, र पातलो हुँदा यसको एकाग्रता सन्तुलित हुनुपर्छ।③ फ्रिजको धेरै चिसो वा लामो अवधिको प्रशीतन भागहरू रोक्नको लागि प्राइमरलाई भुक्तान गरी उच्च एकाग्रतामा भण्डारण गर्नुपर्दछ, जसले प्राइमरलाई बिग्रन र बिग्रन सक्छ।④ प्राइमरको डिजाइन अव्यावहारिक छ, जस्तै प्राइमरको लम्बाइ अपर्याप्त छ, र प्राइमरहरू बीच डि क्लस्टर बनाइएको छ।

Mg2+ एकाग्रता: Mg2+ आयन एकाग्रताले PCR प्रवर्धन दक्षतामा ठूलो प्रभाव पार्छ।अत्यधिक एकाग्रताले PCR प्रवर्धनको विपरीत लिङ्गलाई कम गर्न सक्छ।यदि एकाग्रता धेरै कम छ भने, PCR एम्प्लीफिकेशन आउटपुटले विस्तार ब्यान्ड बिना PCR प्रवर्धन विफलता पनि बनाउँदछ।

प्रतिक्रिया भोल्युमको परिवर्तन: PCR प्रवर्धनमा प्रयोग हुने भोल्युम 20ul, 30ul, र 50ul वा 100uL हो, PCR प्रवर्धनको लागि आवेदनको ठूलो मात्रा वैज्ञानिक अनुसन्धान र क्लिनिकल परीक्षणको विभिन्न उद्देश्यहरू अनुसार सेट गरिएको छ।सानो भोल्युमहरू जस्तै 20ul बनाएपछि, आकार बनाउँदा कर्ड अवस्था बनाउन आवश्यक छ, अन्यथा यो असफल हुनेछ।

भौतिक कारणहरू: PCR प्रवर्धनको लागि रूपान्तरण धेरै महत्त्वपूर्ण छ।यदि डिजेनेरेशन तापमान कम छ भने, डिजेनेरेशन समय छोटो छ, यो गलत नकारात्मक मा हुने सम्भावना छ;धेरै कम annealing तापमान गैर-विशिष्ट प्रवर्धन र विशिष्ट प्रवर्धन दक्षता कम गर्न सक्छ।PCR प्रवर्धन दक्षता कम गर्न प्राइमर र टेम्प्लेटहरूको संयोजनलाई अत्यधिक प्रभाव पार्छ।कहिलेकाहीँ यो एक्स्टेन्सन वा पानीमा घुलनशील कुकरमा परिवर्तनशीलता, एनिलिङ र विस्तारित तापमान पत्ता लगाउन मानक थर्मोमिटर प्रयोग गर्न आवश्यक छ, जुन PCR असफल हुनुको एक कारण हो।

लक्ष्य अनुक्रम भेरियन्टहरू: यदि लक्ष्य अनुक्रम हुन्छ, एक उत्परिवर्तन वा मेटाउने, प्रोटोटाइप र टेम्प्लेटको संयोजन संयुक्त छ, वा लक्ष्य अनुक्रमको कमीको कारण, प्राइमर र टेम्प्लेटले पूरक अनुक्रम गुमाउनेछ, र यसको PCR प्रवर्धन सफल हुनेछैन।

● गलत सकारात्मक

PCR एम्प्लीफिकेशन ब्यान्ड लक्ष्य अनुक्रम ब्यान्डसँग एकरूप देखिन्छ, र कहिलेकाहीँ यसको ब्यान्ड अझ सफा र उच्च हुन्छ।

प्राइमर डिजाइन उपयुक्त छैन: चयन गरिएको एम्प्लीफिकेशन अनुक्रम र गैर-उद्देश्यीय प्रवर्धन अनुक्रम होमोलोगस हुन्छ, त्यसैले जब PCR प्रवर्द्धन, एम्प्लीफाइड PCR उत्पादनहरू गैर-उद्देश्यपूर्ण अनुक्रमहरू हुन्।लक्ष्य अनुक्रम धेरै छोटो छ वा प्राइमर धेरै छोटो छ, र यो गलत सकारात्मक को लागी प्रवण छ।पुन: डिजाइन गर्न आवश्यक छ।

लक्ष्य अनुक्रम वा एम्प्लीफिकेशन उत्पादनहरूको क्रस प्रदूषण: यस प्रदूषणको दुई कारणहरू छन्: पहिलो, सम्पूर्ण जीनोम वा ठूला खण्डहरूको क्रस-प्रदूषण, गलत सकारात्मकहरू निम्त्याउँछ।यस प्रकारको झूटा सकारात्मक निम्न विधिहरूद्वारा समाधान गर्न सकिन्छ: नमूना बन्दुकमा सास फेर्न वा केन्द्रापसारक ट्यूबबाट बाहिर निस्कने लक्ष्य अनुक्रमलाई रोक्नको लागि सञ्चालनको क्रममा सावधान र नम्र हुनुहोस्।उच्च तापक्रम सहन नसक्ने इन्जाइमहरू र पदार्थहरू बाहेक, सबै अभिकर्मकहरू वा उपकरणहरूलाई उच्च दबावले कीटाणुरहित गर्नुपर्छ।केन्द्रापसारक पाइप र नमूनाहरू एक पटकमा प्रयोग गर्नुपर्छ।आवश्यक हुँदा, नमूनाहरू थप्नु अघि, प्रतिक्रिया ट्यूब र अभिकर्मक अवस्थित न्यूक्लिक एसिडलाई नष्ट गर्न पराबैंगनी किरणहरूमा पर्दाफास गरिन्छ।दोस्रो, वायु प्रदूषणमा साना टुक्राहरू।यी साना टुक्राहरू लक्ष्य अनुक्रम भन्दा छोटो छन्, तर तिनीहरूसँग निश्चित समानता छ।यो एकअर्का संग spliced ​​गर्न सकिन्छ।प्राइमरहरू पूरक भएपछि, PCR उत्पादन विस्तार गर्न सकिन्छ, जसले गलत सकारात्मक उत्पादन निम्त्याउँछ।यो नेस्ट PCR विधिलाई कम गर्न वा हटाउन प्रयोग गर्न सकिन्छ।

● गैर-विशिष्ट प्रवर्धन ब्यान्ड देखिन्छ

PCR एम्प्लीफिकेशन पछि देखा परेका ब्यान्डहरू अपेक्षित आकार, वा ठूला वा सानो, वा एकै समयमा, वा एकै समयमा, विशिष्ट प्रवर्द्धन ब्यान्डहरू र गैर-विशिष्ट प्रवर्धन ब्यान्डहरूसँग असंगत छन्।गैर-विशिष्ट ब्यान्डहरूको उदय हो: पहिलो, प्राइमरहरू लक्ष्य अनुक्रमको अपूर्ण पूरक हुन्, वा डि क्लस्टर बनाउन प्राइमरको पोलिमराइजेशन।दोस्रो हो कि MG2 + आयनको एकाग्रता धेरै उच्च छ, annealing तापमान धेरै कम छ, र PCR चक्र को संख्या सम्बन्धित छ।दोस्रो, इन्जाइमहरूको गुणस्तर र मात्रा।प्रायः, केहि स्रोतहरूको इन्जाइमहरू गैर-विशेष ब्यान्डहरूमा प्रवण हुन्छन् र अन्य स्रोतका इन्जाइमहरू उत्पन्न हुँदैनन्।कहिलेकाहीँ इन्जाइमहरूको गैर-विशिष्ट प्रवर्धन पनि हुन्छ।प्रतिरोधी उपायहरू हुन्: आवश्यक भएमा आकर्षक पुन: डिजाइन गर्नुहोस्।इन्जाइमको मात्रा घटाउनुहोस् वा अर्को स्रोतको इन्जाइम प्रतिस्थापन गर्नुहोस्।प्राइमरीको मात्रा घटाउनुहोस्, टेम्प्लेटहरूको मात्रा उचित रूपमा बढाउनुहोस्, र चक्रहरूको संख्या घटाउनुहोस्।एनिलिङको तापक्रम ठीकसँग बढाउनुहोस् वा दुई तापक्रम बिन्दु विधि प्रयोग गर्नुहोस् (९३ डिग्री सेल्सियस डिजेनेरेशन, एनिलिङ र लगभग ६५ डिग्री सेल्सियसमा विस्तार)।

● फ्ल्याकी टो वा स्मियर टेप देखिने

PCR एम्प्लीफिकेशन कहिलेकाहीं लागू गरिएको वा खोलिएको वा कार्पेट जस्तो बेल्ट जस्तो देखिन्छ।कारणको लागि, इन्जाइमहरूको अत्यधिक मात्रा वा इन्जाइमको खराब गुणस्तरको कारणले गर्दा, dNTP एकाग्रता धेरै उच्च छ, Mg2+ एकाग्रता धेरै उच्च छ, annealing तापमान धेरै कम छ, र चक्रहरूको संख्या धेरै छ।प्रतिरोधी उपायहरू हुन्: ①इन्जाइमहरूको मात्रा घटाउनुहोस्, वा अर्को स्रोतको इन्जाइम परिवर्तन गर्नुहोस्।②dNTP को एकाग्रता घटाउनुहोस् ③ठीक रूपमा Mg2+ एकाग्रता घटाउनुहोस्।④ टेम्प्लेटहरूको मात्रा बढाउनुहोस् र चक्रहरूको संख्या घटाउनुहोस्।

सम्बन्धित उत्पादनहरु

PCR Heroᵀᴹ (रङ्ग संग)

◮ उच्च निष्ठा: साधारण Taq इन्जाइमको 6 गुणा;

◮ छिटो प्रवर्धन गति

◮ थप टेम्प्लेट अनुकूलन क्षमता

◮ उच्च प्रवर्धन दक्षता

◮ वातावरणीय सहिष्णुता बलियो छ: एक हप्ताको लागि 37 डिग्री सेल्सियसमा राखिएको छ, 90% भन्दा बढी गतिविधि कायम राख्दै;

◮ यसमा 5'→3' DNA पोलिमरेज गतिविधि र 5'→3' exonuclease गतिविधि छ, 3'→5' exonuclease गतिविधि बिना।

PCR Easyᴹ (रङ्ग संग)

अद्वितीय प्रतिक्रिया प्रणाली र उच्च दक्षता Taq DNA पोलिमरेजले PCR प्रतिक्रियालाई उच्च प्रवर्द्धन दक्षता, विशिष्टता र संवेदनशीलता बनाउँछ।

RT-qPCR Easyᵀᴹ (एक चरण)-SYBR ग्रीन I

◮ एक-चरण किटले रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन र qPCR एउटै ट्यूबमा दुई प्रतिक्रियाहरू बनाउँछ, केवल टेम्प्लेट RNA, विशिष्ट PCR प्राइमरहरू र RNase-मुक्त ddH थप्न आवश्यक छ।₂O.

◮ किटले छिटो र कुशलतापूर्वक मात्रात्मक रूपमा भाइरल RNA वा RNA ट्रेस गर्न सक्छ।

◮ किटले एक अद्वितीय फोरजीन रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन अभिकर्मक र Foregene HotStar Taq DNA पोलिमरेज प्रयोग गर्दछ र प्रतिक्रियाको प्रवर्धन दक्षता र विशिष्टतालाई प्रभावकारी रूपमा सुधार गर्नको लागि एक अद्वितीय प्रतिक्रिया प्रणालीसँग जोडिएको छ।

◮ अनुकूलित प्रतिक्रिया प्रणालीले प्रतिक्रियालाई उच्च पत्ता लगाउने संवेदनशीलता, बलियो थर्मल स्थिरता, र राम्रो सहनशीलता बनाउँछ।

◮ RT-qPCR सजिलो^TM(एक चरण)-SYBR ग्रीन I किट ROX आन्तरिक सन्दर्भ डाईको साथ आउँछ, जुन संकेत पृष्ठभूमि र कुवाहरू बीचको सिग्नल त्रुटिहरू हटाउन प्रयोग गर्न सकिन्छ, जुन ग्राहकहरूलाई मात्रात्मक PCR उपकरणहरूको विभिन्न मोडेलहरूमा प्रयोग गर्नको लागि सुविधाजनक छ।

RT सजिलो^TMII (का लागि मास्टर प्रिमिक्स को लागि पहिलो-स्ट्र्यान्ड सीडीएनए संश्लेषणवास्तविक समय पीसीआर)

- gDNA हटाउने कुशल क्षमता, जसले 2 मिनेट भित्र टेम्प्लेटमा gDNA हटाउन सक्छ।

-कुशल रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणाली, यसले पहिलो स्ट्र्यान्ड cDNA को संश्लेषण पूरा गर्न 15 मिनेट मात्र लिन्छ।

-जटिल टेम्प्लेटहरू: उच्च GC सामग्री र जटिल माध्यमिक संरचना भएका टेम्प्लेटहरू पनि उच्च दक्षताका साथ उल्टाउन सकिन्छ।

-उच्च-संवेदनशीलता रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणाली, pg-स्तर टेम्प्लेटहरूले पनि उच्च-गुणस्तरको cDNA प्राप्त गर्न सक्छ।

-रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणालीमा उच्च थर्मल स्थिरता छ, इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान 42 ℃ छ, र यो अझै पनि 50 ℃ मा राम्रो रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रदर्शन छ।