कति थाहा छ

N को बारेमायूक्लिक एसिड निकासी

शुद्ध न्यूक्लिक एसिडको सुरुवात र अन्त्य

सुरुमा सबै गाह्रो छ, शुद्ध न्यूक्लिक एसिड सबैभन्दा हो

आणविक प्रयोगहरूको प्रारम्भ, पछिका प्रयोगहरूको लागि

सफलता वा असफलताले महत्त्वपूर्ण प्रभाव पार्छ।

ट्रेस/अल्ट्रा-ट्रेस यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमिटर धेरै वैज्ञानिक अनुसन्धानकर्ताहरूले मन पराउँछन् किनभने यसले न्यूक्लिक एसिड एकाग्रता र प्रोटीन र नुन आयन अवशेषहरू सजिलै, छिटो र आर्थिक रूपमा पत्ता लगाउन सक्छ।

हामी सबैलाई थाहा छ, A260 भनेको न्यूक्लिक एसिड अवशोषण OD मान हो, A280 भनेको प्रोटीन एकाग्रता अवशोषण OD मान हो, A230 भनेको नुन आयन सांद्रता अवशोषण OD मान हो, त्यसैले A260 ले न्यूक्लिक एसिड एकाग्रतालाई रूपान्तरण गर्न सक्छ, A260/280 भनेको प्रोटीन अवशेष हो, तर A260/260 को अर्थ हो यो प्रोटिनको अवशेष, A260/260 मा आधारित नुनको नियम हो। मापन परिणामहरूको ठूलो संख्यामा, र यो हो "परम्परागत"यसले DNA र RNA को शुद्धताको व्याख्या गर्न सक्छ भन्ने विश्वास गर्नएक निश्चित हदसम्म।यो न्यूक्लिक एसिड उपज र शुद्धता को पहिचान को लागी एकमात्र मानक होइन, यो केवल एक सन्दर्भ को रूप मा प्रयोग गरिन्छ, र यो "सुन मानक" होइन।

Thermo Fisher ND-2000 म्यानुअलले परीक्षण परिणामहरूको विश्वसनीयतालाई जोड दिन्छ।

कारण यो हो कि माइक्रो/अल्ट्रामाइक्रो यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमिटर प्रयोग गरेर प्राप्त नतिजाहरूले छेउबाट न्यूक्लिक एसिडको उपज र शुद्धता मात्र प्रतिबिम्बित गर्दछ, र त्यहाँ धेरै प्रभावकारी कारकहरू छन् (अप्टिकल पथ, नमूना मात्रा, नमूना एकाग्रता, pH मान, अन्य आयनहरू जसले अवशोषण मापनलाई असर गर्छ, आदि), OD मापन आवश्यक रूपमा मापन गरिएको छैन।एकै समयमा, अवशोषण मूल्य निर्धारण सामग्रीको विशिष्टताको कमीको कारणले, सिंगल-स्ट्र्यान्डेड DNA, डबल-स्ट्र्यान्डेड DNA, RNA, dNTPs, र केही प्रोटिनहरू सबैको अवशोषण शिखरहरू 260nm तरंगदैर्ध्यमा हुन्छन्, र A260 द्वारा मात्र निर्धारण गरिएको एकाग्रता वास्तविक DNA वा RNA हुनु आवश्यक छैन।एकाग्रता, र यसको अखण्डता र पतन न्याय गर्न सकिँदैन।

त्यसोभए हाम्रो शुद्ध न्यूक्लिक एसिडको गुणस्तर कसरी न्याय गर्ने?पत्ता लगाउनको लागि माइक्रो/अल्ट्रामाइक्रो यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमिटर प्रयोग गर्नुको अतिरिक्त, एगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस जस्ता विधिहरू पनि न्यूक्लिक एसिडको शुद्धता र अखण्डतालाई दृश्यात्मक रूपमा प्रदर्शन गर्न र निश्चित हदसम्म एकाग्रतालाई संकेत गर्न आवश्यक हुन्छ।यसरी, विभिन्न विधिहरूको पत्ता लगाउने नतिजाबाट प्राप्त न्यूक्लिक एसिड उपज र शुद्धता विश्वसनीय छन्।

प्रायोगिक चार्ट तुलना

H1299 कोशिकाहरूको जीनोमिक DNA कम्पनी A को DNA एक्स्ट्र्याक्शन किटहरू प्रयोग गरेर निकालिएको थियो, र महत्त्वपूर्ण अशुद्धता प्रदूषण देखियो, उच्च OD मानहरूको परिणामस्वरूप।

(OD मापन मान र सम्बन्धित इलेक्ट्रोफेरोग्राम)

मूल्याङ्कन सूचकांक

के त्यहाँ न्यूक्लिक एसिड उपज र गुणस्तर परीक्षणको लागि "सुनको मानक" छ?

जहाँसम्म हामीलाई थाहा छ, त्यहाँ कुनै सरल, छिटो र सस्तो विधि छैन।स्पेक्ट्रोफोटोमिटर होस्, जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस, वा मास स्पेक्ट्रोमेट्री, ती सबैले विभिन्न पक्षबाट समाधानमा न्यूक्लिक एसिडको एकाग्रता र शुद्धतालाई प्रतिबिम्बित गर्दछ, र तिनीहरूलाई एकअर्कालाई सन्दर्भ गरेर न्याय गर्न आवश्यक छ।

उत्तम मूल्याङ्कन सूचकांक सधैं हुन्छअनुवर्ती प्रयोगात्मक अनुप्रयोग।यसले रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन र PCR एम्प्लीफिकेशनको दक्षतालाई असर गर्दैन।भरपर्दो एम्प्लीफिकेशन उत्पादनहरू र Ct मानहरू प्राप्त गर्नु, र अनुक्रम द्वारा पूर्ण अनुक्रम प्राप्त गर्नु सफल न्यूक्लिक एसिड निकासी हो।

संक्षेपमा, अनुपात-मात्र सिद्धान्तको दृश्यलाई "राम्रो निकासी प्यारामिटरहरूको रूपमा राम्रो डाउनस्ट्रीम प्रयोगात्मक परिणामहरू प्रयोग गरेर" को दृष्टिकोणले चुनौती दिनुपर्दछ!

उच्च DNA/RNA शुद्धता प्राप्त गर्नको लागि सिफारिस गरिएको फोरजीन DNA RNA निकासी किटहरू:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/