नेतृत्व

लामो गैर-कोडिङ RNA, lncRNA एक गैर-कोडिङ RNA हो जसको लम्बाइ 200 न्यूक्लियोटाइडहरू भन्दा बढी हुन्छ, सामान्यतया 200-100000 nt को बीचमा।lncRNA ले एपिजेनेटिक, ट्रान्सक्रिप्शन र पोस्ट-ट्रान्सक्रिप्शनल स्तरहरूमा जीन अभिव्यक्तिलाई विनियमित गर्दछ, र X क्रोमोजोम साइलेन्सिङ, जीनोम छाप र क्रोमेटिन परिमार्जन, ट्रान्सक्रिप्शन सक्रियता, ट्रान्सक्रिप्शन हस्तक्षेप, आणविक यातायात, सेल चक्र नियमन, कोशिका भिन्नता र अन्य धेरै प्रभावहरू कम्प्लेक्सन प्रक्रियाहरू, र अन्य महत्त्वपूर्ण प्रभावहरू कम्पेन्सन र अन्य प्रक्रियाहरूमा भाग लिन्छ। मानव रोगहरूको घटना, विकास र रोकथामसँग नजिकको सम्बन्ध छ, र हाल बायोमेडिसिनको क्षेत्रमा तातो ठाउँहरू मध्ये एक हो।

01  LncRNA को प्रकार र विशेषताहरू

lncRNA लाई माथिको चित्रमा देखाइए अनुसार यसको गठनका विभिन्न स्रोतहरू अनुसार धेरै प्रकारमा विभाजन गरिएको छ।निम्न विशेषताहरु छन्:

1. lncRNAs सामान्यतया लामो हुन्छ, गतिशील अभिव्यक्ति र भिन्नता को समयमा विभिन्न स्प्लिसिङ विधिहरु संग
2. कोडिङ जीनको तुलनामा, lncRNA को सामान्यतया कम अभिव्यक्ति स्तर हुन्छ
3. धेरै जसो lncRNAs को ऊतक भिन्नता र विकासको प्रक्रियामा स्पष्ट अस्थायी र स्थानिय अभिव्यक्ति विशिष्टता हुन्छ।
4. ट्यूमर र अन्य रोगहरूमा विशेषता अभिव्यक्तिहरू छन्
5. lncRNA को सबसेलुलर स्थानहरू विविध छन्
6. अनुक्रम संरक्षणमा कम छ, तर प्रकार्यमा एक निश्चित डिग्री संरक्षण छ, आदि।

02 LncRNA रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनको बारेमा प्रायः सोधिने प्रश्नहरू

कोशिकाहरूमा lncRNA को कम सामग्री, लामो लम्बाइ र उच्च-स्तरको संरचनाको कारण, त्यस्ता RNA मा प्रायः जटिल संरचनाहरू जस्तै स्टेम लूपहरू वा हेयरपिनहरू हुन्छन्, र RT-qPCR असफल रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन वा कम दक्षताको समस्याहरूको खतरामा हुन्छ।

03 LncRNA रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन समाधान

केन्द्रीय नियममा, आरएनए भाइरसहरूले आफ्नै रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज प्रयोग गरेर DNA लाई टेम्प्लेटको रूपमा प्रयोग गरी DNA संश्लेषण गर्ने प्रक्रियालाई रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सन भनिन्छ।भिट्रोमा सीडीएनए टेम्प्लेट संश्लेषण गर्न आरएनए भाइरस रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज प्रयोग गर्ने प्रक्रियालाई रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन भनिन्छ।रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणालीमा समावेश गरिएका मुख्य तत्वहरू: आरएनए टेम्प्लेट, रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज, प्राइमर र अन्य कम्पोनेन्टहरू।

1.RNA टेम्प्लेट

रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनमा आरएनए टेम्प्लेटको प्रभाव यसको संरचना, शुद्धता र अखण्डतामा प्रतिबिम्बित हुन्छ।निकालिएको आरएनएको शुद्धता र अखण्डता जति उच्च हुन्छ, रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनको उच्च दक्षता र त्यसपछिको मात्रात्मक परिणामहरू त्यति नै सटीक हुन्छन्।सामान्यतया प्रयोग हुने आरएनए एक्स्ट्र्याक्सन अभिकर्मकहरूद्वारा शुद्ध गरिएको आरएनएमा प्रायः अल्कोहल र गुआनिडाइन लवणका अवशेषहरू हुन्छन्, जसको धेरैजसो रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेजमा बलियो निरोधात्मक प्रभाव हुन्छ।

2. उल्टो ट्रान्सक्रिप्टेज

रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेसको सम्पूर्ण रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणालीमा मुख्य प्रभाव छ।अधिकांश प्रयोगशालाहरूमा प्रयोग हुने रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेजको लागि उपयुक्त तापक्रम सामान्यतया ४२ डिग्री सेल्सियस हुन्छ।वास्तवमा, उच्च-स्तरको आरएनए संरचना खोल्न उच्च तापक्रम चाहिन्छ, र रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेजका लागि आवश्यकताहरू उच्च छन्।

3.प्राइमर

रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्राइमरहरूमा जीन-विशिष्ट प्राइमरहरू, अनियमित प्राइमरहरू र ओलिगो डीटी प्राइमरहरू समावेश छन्।धेरैजसो lncRNAs मा polyA टेलहरू हुँदैनन्, र Oligo dT सँग यादृच्छिक प्राइमरहरू ठीकसँग मिलाउनु महत्त्वपूर्ण छ।

4. अन्य अवयवहरू

RNA लाई डिग्रेड गर्न विशेष गरी सजिलो भएको तथ्यलाई ध्यानमा राख्दै, रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सन प्रणालीमा कम्पोनेन्टहरूको परिचयलाई न्यूनीकरण गर्न सकिन्छ, जसले प्रभावकारी रूपमा RNase को प्रवेश रोक्न र रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सनको सहज प्रगति सुनिश्चित गर्न सक्छ।

Fओरेजिनआरएनए टेम्प्लेटबाट प्राप्त गर्दछ, qPCR मा ट्रान्सक्रिप्सन उल्टो

तपाईको lncRNA पत्ता लगाउन व्यापक रूपमा एस्कर्ट गर्नुहोस्

पशु कुल आरएनए Iसमाधानकिट (gDNA हटाउने स्तम्भ संग)

सेल कुल RNA Iसमाधानकिट (gDNA हटाउने स्तम्भ संग)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase सँग) (lncRNA बाट पहिलो-स्ट्र्यान्ड cDNA संश्लेषणको लागि सुपर प्रिमिक्स)

वास्तविक समय PCR EasyTM-SYBR ग्रीन I

Aफाइदाहरू ofआरएनए निकासी:

किटले तेस्रो पुस्ताको आरएनए निकासी प्रविधि प्रयोग गर्दछ, DNase प्रयोग गर्न आवश्यक छैन।

96, 24, 12, र 6-वेल प्लेट कल्चर सेलहरूबाट 11 मिनेट, gDNA-मुक्त, उच्च-शुद्धता, उच्च-गुणस्तर कुल सेल RNA को उच्च दक्षता निकासी।

lncRNA रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनका फाइदाहरू:

एक रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणाली विशेष रूपमा LncRNA को लागि जीनोमिक DNA प्रदूषण हटाउनको लागि विकसित गरिएको छ।

रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणालीमा उच्च थर्मल स्थिरता छ र अझै पनि 50 डिग्री सेल्सियसमा राम्रो रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सन प्रदर्शन छ।

उच्च GC सामग्री र जटिल माध्यमिक संरचना भएका टेम्प्लेटहरूलाई उच्च दक्षताका साथ उल्टाउन सकिन्छ।

फाइदाof qPCR:

हट स्टार्ट Foregene Taq Polymerase मा उच्च प्रवर्द्धन दक्षता, उच्च प्रवर्धन संवेदनशीलता, र उच्च प्रवर्धन विशिष्टता छ।

अप्टिमाइज गरिएको रियल पीसीआर इजी मिक्सले SYBR ग्रीन I लाई उच्च पत्ता लगाउने संवेदनशीलता बनाउँछ, र यसको फ्लोरोसेन्स तीव्रता समान उत्पादनहरू भन्दा 3-5 गुणा हुन्छ, जसले विभिन्न प्रकारका फ्लोरोसेन्स मात्रात्मक प्रयोगहरूको आवश्यकताहरू पूरा गर्न सक्छ।