प्रयोगकर्मीहरूको व्यवहारलाई मानकीकरण गर्न PCR प्रयोग SOP स्थापना गर्नुहोस्।
प्रयोगकर्ताले अपरेटिङ प्रक्रियाहरूको कडाईका साथ पालना गर्दछ, र PCR प्रदूषणलाई कम गर्छ जुन मानव कारकहरूबाट हुन सक्छ वा प्रदूषणको घटनालाई रोक्छ।थप रूपमा, प्रयोगकर्तासँग सम्बन्धित व्यावसायिक ज्ञान र सीपहरू हुनुपर्दछ, जसमा सम्बन्धित उपकरणहरू सञ्चालन गर्ने प्रवीणता, सम्पूर्ण कार्य प्रक्रियालाई स्पष्ट पार्ने, प्रदूषणको उपचार विधिहरू र प्रयोगशाला गुणस्तर नियन्त्रण विधिहरूमा महारत हासिल गर्ने, र परीक्षण परिणामहरूको सही व्याख्या गर्न सक्षम हुनु।
मानक पीसीआर प्रयोगशाला स्थापना गर्नुहोस्।
पीसीआर प्रयोगशालालाई सैद्धान्तिक रूपमा चार क्षेत्रमा विभाजन गरिएको छ, अर्थात् अभिकर्मक तयारी क्षेत्र, नमूना प्रशोधन क्षेत्र, प्रवर्धन क्षेत्र र प्रवर्धन उत्पादन विश्लेषण क्षेत्र।पहिलो दुई क्षेत्रहरू पूर्व-प्रवर्द्धन क्षेत्रहरू हुन्, र अन्तिम दुई क्षेत्रहरू पोस्ट-प्रवर्द्धन क्षेत्रहरू हुन्।प्रि-प्रवर्द्धन क्षेत्र र पोस्ट-प्रवर्द्धन क्षेत्र कडा रूपमा अलग हुनुपर्छ।प्रयोगात्मक सामग्रीहरू, अभिकर्मकहरू, रेकर्डिङ कागज, कलम, सफाई सामग्रीहरू, इत्यादि, पूर्व-प्रवर्द्धन क्षेत्रबाट पोस्ट-प्रवर्द्धन क्षेत्रमा मात्र प्रवाह गर्न सकिन्छ, अर्थात्, अभिकर्मक तयारी क्षेत्र → नमूना प्रशोधन क्षेत्र → प्रवर्धन क्षेत्र → प्रवर्धन उत्पादन विश्लेषण क्षेत्र, र पछाडि बग्नु हुँदैन।प्रयोगशालामा वायुप्रवाह पनि पूर्व-प्रवर्द्धन क्षेत्रबाट पोस्ट-प्रवर्द्धन क्षेत्रमा प्रवाह हुनुपर्छ, र पछाडि बग्नु हुँदैन।आदर्श पीसीआर प्रयोगशाला डिजाइन तल देखाइएको छ:
चित्र A: बफर कोठामा नकारात्मक दबाबको साथ आदर्श PCR प्रयोगशाला सेटअप मोड
चित्र B: बफर कोठामा सकारात्मक दबाबको साथ आदर्श PCR प्रयोगशाला सेटअप मोड
चित्र A र चित्र B मा दिइएको PCR प्रयोगशाला सेटअप रेखाचित्रहरू थप आदर्श सेटअप मोड हुनुपर्छ, र सर्तहरू भएको प्रयोगशालाले डिजाइनको लागि यो मोडलाई सन्दर्भ गर्न सक्छ।साधारण प्रयोगशालाहरूको लागि, यो सिफारिस गरिन्छ कि PCR प्रवर्द्धन क्षेत्र र उत्पादन विश्लेषण क्षेत्र अलग गर्न सकिन्छ, र कभरको खोल्ने नमूना तयारी क्षेत्र र PCR प्रवर्धन क्षेत्रमा सकेसम्म कम गर्न सकिन्छ।सम्झनुहोस्: उत्पादन विश्लेषण क्षेत्रमा उत्पादनहरू र प्रयोगात्मक आपूर्तिहरूलाई नमूना तयारी क्षेत्र र PCR प्रवर्धन क्षेत्रमा लैजान कडा रूपमा निषेध गरिएको छ।
यदि प्रयोगशालाले पीसीआर पत्ता लगाउने र पहिचान गर्ने मात्र गर्छ भने, यो पारंपरिक पीसीआरको सट्टा फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक पीसीआर प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ।
प्रतिदीप्ति मात्रात्मक PCR पत्ता लगाउने नतिजाहरू प्रतिदीप्ति संकेतहरू द्वारा सङ्कलन र विश्लेषण गर्न सकिन्छ, त्यसैले प्रतिक्रिया पछि इलेक्ट्रोफोरेसिसको लागि ढक्कन खोल्न आवश्यक छैन, जसले प्रतिक्रिया उत्पादनहरूको चुहावटको कारणले गर्दा एरोसोलहरू बनाउनको लागि PCR उत्पादन दूषित हुनबाट बचाउँछ।यदि तपाईंले जेल इलेक्ट्रोफोरेसिसको लोडिङ चरणको समयमा क्याप ओपनिङको संख्या बढाउनुभयो भने, एरोसोल प्रदूषण हुन सक्छ।मात्रात्मक पीसीआरको प्रयोगलाई बढावा दिन र गुणात्मक पीसीआरलाई क्रमशः प्रतिस्थापन गर्न सिफारिस गरिन्छ।
UNG विरोधी PCR उत्पादन प्रदूषण प्रणाली PCR प्रतिक्रिया को लागी प्रयोग गरिन्छ।
प्रणालीले dTTP को सट्टा dUTP प्रयोग गर्दछ।PCR प्रतिक्रिया पछि, सबै PCR उत्पादनहरू (DNA टुक्राहरू) dUTP सँग समावेश हुन्छन्;PCR प्रतिक्रियाको अर्को चरणमा, प्रणालीमा थपिएको UNG इन्जाइम PCR अघि 5 मिनेटको लागि 37°C मा इन्क्युबेटेड हुन्छ, जसले विशेष रूपमा dUTP भएका सबै DNA टुक्राहरूलाई घटाउन सक्छ, र त्यसपछि PCR प्रतिक्रिया गर्न सक्छ।यसले PCR उत्पादनहरूबाट हुने एरोसोल प्रदूषणलाई पूर्ण रूपमा हटाउन सक्छ।प्रभाव तलको चित्रमा देखाइएको छ:
नोट: प्रत्यक्ष PCR शृङ्खलाको लागि, तपाईंले फोरेजीनको एन्टी-पीसीआर उत्पादन प्रदूषण प्रणालीको श्रृंखला उत्पादनहरू छनौट गर्न सक्नुहुन्छ।सुझाव दिनुहोस्
ठूला-ठूला जीनोटाइपिङ परीक्षण सञ्चालन गर्ने प्रयोगशालाहरूका लागि, उचित प्रयोगशालाहरूको निर्माणको अतिरिक्त परीक्षण अभिकर्मकहरूको लागि UNG एन्टि-पीसीआर उत्पादन प्रदूषण प्रणाली प्रयोग गर्न कडा रूपमा सिफारिस गरिन्छ।
रिमाइन्डर: यस प्रणालीको प्रयोगले पहिले नै भएको PCR उत्पादन प्रदूषण हटाउन सक्दैन।तसर्थ, UNG प्रणाली सान्दर्भिक परीक्षणको सुरुमा प्रयोग गर्नुपर्छ, र UNG प्रणाली PCR एम्प्लीफिकेशनको लागि प्रयोग गरिनुपर्छ, ताकि PCR उत्पादनहरू False Positive को प्रदूषणलाई रोक्नको लागि।
ठूला-ठूला परीक्षणहरू सञ्चालन गर्दा Foregene को प्रत्यक्ष PCR-UNG प्रणाली प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ, जस्तै:
बिरुवाको पात प्रत्यक्ष पीसीआर किट-यूएनजी;
बिरुवाको बीउ प्रत्यक्ष पीसीआर किट-यूएनजी;
पशु टिस्यु डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी;
माउस टेल डाइरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी;
जेब्रा फिश डाइरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी।
Foregene बाट किटहरूको यो श्रृंखलायसले पीसीआर पत्ता लगाउने छिट्टै र ठूलो मात्रामा मात्र गर्न सक्दैन, तर प्रभावकारी रूपमा पीसीआर उत्पादन प्रदूषण रोक्न र नियन्त्रण गर्न सक्छ।
पोस्ट समय: मार्च-19-2021
