PCR प्रतिक्रियाको उत्कृष्ट विशेषता यसको ठूलो प्रवर्धन क्षमता र अत्यधिक उच्च संवेदनशीलता हो।PCR कार्यसम्पादन र पत्ता लगाउने दक्षता सुधार गर्न, हामी PCR प्रवर्द्धन क्षमता र पत्ता लगाउने संवेदनशीलता सुधार गर्न प्रतिबद्ध छौं, तर टाउको दुखाइ प्रयोगको प्रक्रियामा छ।झूटा सकारात्मकहरू प्रायः देखा पर्दछ, र नमूना क्रस-प्रदूषण वा PCR उत्पादन प्रदूषणको धेरै सानो मात्राले प्रयोगमा गलत सकारात्मक हुन सक्छ।
पाँच प्रकारको PCR उत्पादन प्रदूषण
PCR संदूषणका धेरै कारणहरू छन्, जसलाई लगभग निम्न वर्गहरूमा विभाजन गर्न सकिन्छ:
नमूना सङ्क्रमण मुख्यतया नमूना सङ्कलन गर्नको लागि कन्टेनरको प्रदूषणको कारणले हुन्छ, वा जब नमूना राखिन्छ, यो ढीला सीलको कारणले कन्टेनरबाट बाहिर निस्कन्छ, वा नमूना कन्टेनरको बाहिरी भागमा टाँसिएको हुन्छ, जसले क्रस-प्रदूषण निम्त्याउँछ;प्रदूषणले नमूनाहरू बीचको प्रदूषण निम्त्याउँछ;केही माइक्रोबियल नमूनाहरू, विशेष गरी भाइरसहरू, एरोसोल वा एरोसोलहरू बनाउँदा पारस्परिक दूषित हुन सक्छ।
यसको मुख्य कारण पीसीआर अभिकर्मकहरू तयार गर्दा नमूना बन्दुक, कन्टेनर, डबल डिस्टिल्ड वाटर र अन्य समाधानहरू पीसीआर न्यूक्लिक एसिड टेम्प्लेटद्वारा दूषित हुन्छन्।
आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाहरू र क्लोन प्लाज्मिडहरूलाई सकारात्मक नियन्त्रणको रूपमा प्रयोग गर्ने केही प्रयोगशालाहरूमा, क्लोन प्लाज्मिड प्रदूषणको समस्या पनि सामान्य छ।किनभने एकाइ भोल्युममा क्लोनिंग प्लाज्मिडको सामग्री धेरै उच्च छ, र शुद्धिकरण प्रक्रियामा थप उपकरण र अभिकर्मकहरू आवश्यक पर्दछ, र जीवित कोशिकाहरूमा प्लाज्मिड जीवित कोशिकाहरूको बलियो वृद्धि र प्रजनन क्षमताको कारणले दूषित हुने सम्भावना धेरै हुन्छ।
प्रवर्धित उत्पादनहरूको प्रदूषण PCR प्रतिक्रियाहरूमा सबैभन्दा सामान्य प्रदूषण समस्या हो।किनकी PCR उत्पादनको प्रतिलिपि मात्रा ठूलो छ (सामान्यतया 1013 प्रतिलिपिहरू/ml), जुन PCR पत्ता लगाउने प्रतिलिपि संख्याको सीमा भन्दा धेरै उच्च छ, PCR उत्पादनको प्रदुषणको धेरै सानो मात्राले झूटा सकारात्मक हुन सक्छ।
Aerosol प्रदूषण PCR उत्पादनहरूको प्रदूषणको सबैभन्दा सम्भावित रूप हो, र यसलाई बेवास्ता गर्न पनि सजिलो छ।यो तरल सतह र हावा बीच घर्षण द्वारा बनाइन्छ।सामान्यतया, ढक्कन खोल्दा, नमूना एस्पिरेटेड हुँदा, वा प्रतिक्रिया ट्यूबलाई जोडदार रूपमा हल्लाउँदा पनि एयरोसोल दूषित हुन सक्छ।गणना अनुसार, एरोसोल कणमा 48,000 प्रतिहरू समावेश हुन सक्छ, त्यसैले यसको कारणले प्रदूषण विशेष ध्यानको योग्य समस्या हो।
विशेष गरी, परीक्षण प्रयोगशालाहरूले प्रायः एउटै जोडी प्राइमरहरू प्रयोग गर्दछ जुन निश्चित जीन परीक्षण गर्न।समयको साथ, प्रयोगशाला ठाउँमा पीसीआर उत्पादन प्रदूषणको ठूलो मात्रा हुनेछ।एक पटक यस्तो प्रदुषण भयो, यसलाई छोटो समयमा हटाउन गाह्रो छ।
पहिलो तीन प्रकारका प्रदुषणबाट बच्न प्रभावकारी माध्यमहरू प्रयोग गर्न सकिन्छ तर PCR उत्पादनहरूबाट हुने प्रदूषणलाई रोक्न गाह्रो हुन्छ, विशेष गरी गैर-मानक PCR प्रयोगशालाहरूको निर्माणमा।PCR प्रक्रियामा, जब पिपेट टिपले तरल पदार्थ चुस्छ र उडाउँछ, र PCR ट्यूब कभर खोलिन्छ, एक एरोसोल गठन हुनेछ।एरोसोल (एउटा एरोसोलले हजारौं डीएनए बोक्न सक्छ) द्वारा बोक्ने डीएनए अणुहरूलाई हटाउन गाह्रो हुन्छ किनभने तिनीहरू हावामा तैर्छन्।एक पटक पीसीआर प्रयोगहरूको अर्को राउन्ड प्रस्तुत भएपछि, झूटा सकारात्मकहरू अनिवार्य रूपमा देखा पर्नेछ।
तलको चित्रमा देखाइए अनुसार, नकारात्मक नियन्त्रणले रुचिको सम्बन्धित ब्यान्डलाई पनि बढायो:
PCR प्रदूषण र रोकथामको यो अंकको पहिलो भाग यहाँ प्रस्तुत गरिएको छ।अर्को अंकले तपाइँलाई दोस्रो भाग "PCR उत्पादन प्रदूषण रोकथाम" ल्याउनेछ, त्यसैले सम्पर्कमा रहनुहोस्!
पोस्ट समय: जुलाई-25-2017
