सम्भावित समस्याहरूको निम्न विश्लेषणबुक्कलस्वाब/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

शुद्धीकरण स्तम्भ बन्द छ

यस किटमा, जीनोमिक डीएनए निकासी सञ्चालनमा, शुद्धिकरण स्तम्भलाई सेन्ट्रीफ्युगेशन चरण बिना नमूना इन्जाइम्याटिक लिसिस मिश्रणमा सीधै सोखिन्छ, र शुद्धिकरण स्तम्भ अपूर्ण इन्जाइमाइजेशन र नमूनाको उच्च चिपचिपाहटको कारणले अवरुद्ध हुन सक्छ।

निम्न सम्भावित कारणहरू निम्नानुसार छन्:

1. ऊतक नमूनाहरूको अपूर्ण इन्जाइम्याटिक पाचन।

सिफारिस: Foregene Protease को नमूना प्रशोधन समय उचित रूपमा विस्तार गर्न सकिन्छ वा 12,000 rpm (~ 13,400) मा सेन्ट्रीफ्यूगेसन पछि सुपरनेटेन्ट लिन सकिन्छ।× छ) ५ मिनेटको लागि।

2. टिस्यु नमूनाहरू वा ठूला तन्तुहरूको अत्यधिक प्रयोग।

सिफारिस: यो 1 भन्दा बढी नहुनु राम्रो होबुक्कल नमूना मा स्वाब;यदि नमूना धेरै ठूलो छ भने, बफर ST1, Foregene Protease, बफर ST2 को खुराक तदनुसार बढाउनुहोस्।

3. नमूना चिपचिपापन धेरै उच्च छ।

सिफारिस: जीनोमिक डीएनए निकासी गर्नु अघि नमूनाहरू ट्रिस-एचसीएलको 10 एमएमसँग उचित रूपमा पतला गर्न सकिन्छ।

4. रगत कार्डका टुक्राहरू चुसिएको छ।

सिफारिस: ब्लड स्पट (FTA कार्ड) जीनोमिक निकासीको चरण 6 को क्षणिक सेन्ट्रीफ्युगेशन समय उचित रूपमा विस्तार गर्न सकिन्छ।

कम उपज वा कुनै DNA

त्यहाँ प्रायः विभिन्न कारकहरू छन् जसले जीनोमिक डीएनए उपजलाई असर गर्छ, नमूना उत्पत्ति, नमूना भण्डारण अवस्था, नमूना तयारी, हेरफेर, आदि।

जीनोमिक डीएनए निकासीको समयमा प्राप्त गर्न सकिँदैन

सम्भावित कारणहरू निम्नानुसार छन्:

1. नमूनाहरूको अनुपयुक्त संरक्षण वा धेरै लामो भण्डारणले जीनोमिक डीएनए गिरावट निम्त्याउँछ।

सिफारिस: मौखिक स्वाबहरू प्राथमिकतामा ताजा नमूना हुनुपर्छ, र जीनोमिक डीएनए निकासी कार्यहरूको लागि संरक्षित स्वाबहरू प्रयोग गर्न सल्लाह दिइँदैन;रगत स्पट नमूनाहरूले गुणस्तर योग्य छ र भण्डारण समय धेरै लामो हुनु हुँदैन भनेर सुनिश्चित गर्नुपर्छ।

2. धेरै थोरै टिस्यु प्रयोगले सम्बन्धित जीनोमिक DNA को कुनै निकासी हुन सक्दैन।

सिफारिस: पालना गर्नुहोस्buccal अपरेशन गाइडमा स्वाब नमूना निर्देशनहरू, र सकेसम्म धेरै पटक वाइप गर्नुहोस् ताकि जीनोमिक डीएनए निकासीको लागि मौखिक स्वाबमा पर्याप्त कोशिकाहरू जोडिन सकिन्छ;रगतको स्पट नमूना निकासीको लागि, रगतको दाग काट्ने क्षेत्र उचित रूपमा बढाउन सकिन्छ।

3. Foregene Protease अनुचित रूपमा संरक्षित गरिएको छ, परिणामस्वरूप यसको गतिविधिमा कमी वा निष्क्रियता।

सिफारिस: को भण्डारण अवस्थाहरू पुष्टि गर्नुहोस्एफoregene Protease वा enzymatic प्रतिक्रियाको लागि नयाँ Foregene Protease संग बदल्नुहोस्।

4. किटको अनुचित संरक्षण वा भण्डारण समय धेरै लामो छ, परिणामस्वरूप किटमा केही घटकहरू असफल हुन्छन्।

सिफारिस: नयाँ खरिद गर्नुहोस्बुक्कल स्वाब डीएनएआइसोलेसन सम्बन्धित प्रक्रियाहरूको लागि किट।

5. बफर WB ले निरपेक्ष इथेनॉल थप्दैन।

सिफारिस: निश्चित गर्नुहोस् कि बफर WB ले निरपेक्ष इथेनॉलको सही मात्रा थप्छ।

6. सिलिकन फिल्ममा एल्युएन्ट सही रूपमा थपिएको छैन।

सिफारिस: 65 थप्नुहोस्°Cपूर्व-तातो एल्युएन्ट सिलिकन झिल्लीको बीचमा खस्छ र इल्युसन दक्षता बढाउन कोठाको तापक्रममा ५ मिनेट छोड्नुहोस्।

Lओउ-उत्पादन जीनोमिक डीएनए पृथक

निम्न सम्भावित कारणहरू निम्नानुसार छन्:

1. नमूनाहरूको अनुपयुक्त संरक्षण वा धेरै लामो भण्डारणले जीनोमिक डीएनए गिरावट निम्त्याउँछ।

सिफारिस: मौखिक स्वाबहरू प्राथमिकतामा ताजा नमूना गरिन्छ, र संरक्षित स्वाबहरू जीनोमिक डीएनए निकासीको लागि प्रयोग गर्नु हुँदैन।

2. यदि ऊतक नमूनाको मात्रा धेरै सानो छ भने, निकालिएको जीनोमिक डीएनए सामग्री कम हुनेछ।

सिफारिस: अपरेटिङ गाइडमा मौखिक स्वाब नमूना निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, सकेसम्म धेरै पटक वाइप गर्नुहोस् ताकि जीनोमिक डीएनए निकासीको लागि पर्याप्त कोशिकाहरू मौखिक स्वाबमा संलग्न गर्न सकिन्छ।

3. Foregene Protease अनुचित रूपमा संरक्षित गरिएको छ, परिणामस्वरूप यसको गतिविधिमा कमी वा निष्क्रियता।

सिफारिस: को भण्डारण अवस्थाहरू पुष्टि गर्नुहोस्the Fओरेजीन प्रोटीज वा यसलाई नयाँसँग बदल्नुहोस् एंजाइमेटिक प्रतिक्रियाको लागि फोरेजीन प्रोटीज।

4. Eluent समस्याहरू।

सिफारिस: इलुसनको लागि बफर ईबी प्रयोग गर्नुहोस्;यदि ddH प्रयोग गर्दै हुनुहुन्छ₂O वा अन्य eluents, पुष्टि गर्नुहोस् कि eluate को pH 7.0-8.5 को बीचमा छ।

5. इल्युएट सही रूपमा ड्रपवाइजमा थपिएको छैन।

सिफारिस: सिलिकन झिल्लीको बीचमा एल्युएन्ट ड्रपहरू थप्नुहोस् र इल्युसन दक्षता बढाउनको लागि 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा छोड्नुहोस्।

6. इल्युसन तरल धेरै कम जम्मा हुन्छ।

सिफारिस: कम्तिमा निर्देशनहरूमा आवश्यक भए अनुसार जीनोमिक डीएनए इल्युसनको लागि एल्युएन्ट प्रयोग गर्नुहोस्कम छैन 15 भन्दाμl.

Lओहो शुद्धता of जीनोमिक डीएनएपृथक

कम जीनोमिक डीएनए शुद्धताले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूको असफलता वा असन्तुष्ट परिणामहरू निम्त्याउन सक्छ, जस्तै: इन्जाइमहरू खोल्न सकिँदैन, PCR ले रुचिको जीन टुक्रा प्राप्त गर्न सक्दैन, आदि।

सम्भावित कारणहरू निम्नानुसार छन्:

1. हेटेरोप्रोटिन प्रदूषण, आरएनए प्रदूषण।

विश्लेषण: शुद्धीकरण स्तम्भ बफर PW प्रयोग गरेर धोएको थिएन;बफर PW धुने शुद्धीकरण स्तम्भ सही केन्द्रापसारक गति प्रयोग गरेर धोइएन।

सिफारिस: इथानोल थप्नु अघि सुपरनेटान्टमा कुनै वर्षा छैन भनेर सुनिश्चित गर्नुहोस्;निर्देशनहरू अनुसार शुद्धिकरण स्तम्भ धुन निश्चित हुनुहोस्, र यो चरण छोड्न सकिँदैन।

2. अशुद्धता आयन प्रदूषण।

विश्लेषण: बफर WB धुने शुद्धिकरण स्तम्भ हटाइयो वा एक पटक मात्र धोइयो, अवशिष्ट आयनिक प्रदूषणको परिणामस्वरूप।

सिफारिस: सकेसम्म अवशिष्ट आयनहरू हटाउन निर्देशन अनुसार बफर WB 2 पटक धुनुहोस्।

3. आरएनए इन्जाइम प्रदूषण।

विश्लेषण: विदेशी RNases बफर मा थपियो;Buffer PW धुने अपरेशन गलत थियो, RNase अवशेषहरूको परिणामस्वरूप, डाउनस्ट्रीम RNA प्रयोगात्मक सञ्चालनहरू, जस्तै इन भिट्रो ट्रान्सक्रिप्शनलाई असर गर्छ।

सिफारिस: फोरेजीन श्रृंखला न्यूक्लिक एसिडisolation किटहरूले RNase को अतिरिक्त थप बिना आरएनए हटाउन सक्छ,यसरी buccal Swab/FTA कार्ड DNA Isolation Kitआवश्यक't RNase थप्नुहोस्;Buffer PW धुने शुद्धिकरण स्तम्भका लागि निर्देशनहरू पालना गर्न निश्चित हुनुहोस्, र यो चरण छोड्न सकिँदैन।

4. इथेनॉल अवशेष।

विश्लेषण: बफर WB ले शुद्धीकरण स्तम्भ धोए पछि खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेशन प्रदर्शन गरेन।

सिफारिस: निर्देशन अनुसार सही खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेशन अपरेशन गर्नुहोस्।

5. अन्य अशुद्धता प्रदूषण।

विश्लेषण: सुरक्षित नमूनाहरू वा विशेष नमूनाहरू पूर्व-उपचार गरिएका छैनन्।

सिफारिस: निर्देशन अनुसार नमूनालाई राम्ररी पूर्व-उपचार गर्नुहोस्।