मलाई विश्वास छ कि पीसीआर प्रतिक्रिया गर्दा सबैले सधैं यस्तो वा त्यस्ता समस्याहरूको सामना गर्नेछन्, तर तिनीहरूमध्ये धेरैलाई दुई मुख्य समस्याहरूमा वर्गीकृत गर्न सकिन्छ:

जीन टेम्प्लेटको धेरै कम प्रवर्धन (प्रवर्धन);
धेरै धेरै गैर-लक्ष्य जीन प्रवर्धन।
यी समस्याहरू समाधान गर्न additives को प्रयोग सामान्य रणनीति मध्ये एक हो।सामान्यतया additives को भूमिका दुई पक्ष छन्:
माध्यमिक संरचनाजीन (माध्यमिक संरचना);
गैर-विशिष्ट प्राइमिङ घटाउनुहोस्।
आज, सम्पादकले तपाइँलाई पीसीआर प्रतिक्रियाहरूमा सामान्य additives र तिनीहरूका कार्यहरू संक्षिप्त रूपमा परिचय गराउनुहुनेछ।
माध्यमिक संरचना कम गर्ने additives
सल्फोक्साइड(DMSO)
जीन नमूनाहरूउच्च GC सामग्री संग।यद्यपि, DMSO ले Taq पोलिमरेज गतिविधिलाई पनि धेरै कम गर्छ।तसर्थ, सबैले टेम्प्लेट पहुँच र पोलिमरेजको गतिविधिलाई सन्तुलनमा राख्नुपर्छ।सम्पादकले सुझाव दिन्छ कि तपाईंले DSMO को विभिन्न सांद्रताहरू प्रयास गर्न सक्नुहुन्छ, जस्तै 2% देखि 10% सम्म, तपाईंको प्रयोग अनुरूप हुने एकाग्रता फेला पार्न।
गैर-आयनिक डिटर्जेंट
गैर-आयनिक डिटर्जेन्टहरू, जस्तै 0.1-1% ट्राइटन X-100, Tween 20 वा NP-40, सामान्यतया DNA माध्यमिक संरचना घटाउँछन्।यद्यपि यसले टेम्प्लेट जीनको प्रवर्धन बढाउन सक्छ, यसले गैर-विशिष्ट प्रवर्धनको समस्या पनि निम्त्याउनेछ।त्यसोभए, यी additives कम-उत्पादन PCR प्रतिक्रियाहरूको लागि मलबे बिना राम्रो काम गर्दछ, तर अपेक्षाकृत अशुद्ध PRC प्रतिक्रियाहरूको लागि त्यति राम्रो छैन।गैर-आयनिक डिटर्जेन्टको अर्को फाइदा SDS प्रदूषणको कमी हो।सामान्यतया DNA निकासी प्रक्रियाको क्रममा, SDS लाई PCR चरणमा ल्याइन्छ, जसले पोलिमरेजको गतिविधिलाई ठूलो मात्रामा रोक्छ।त्यसकारण, प्रतिक्रियामा 0.5% Tween-20 वा Tween-40 थप्दा SDS को नकारात्मक प्रभावहरूलाई बेवास्ता गर्न सकिन्छ।
बेटेन_
बेटेनले माध्यमिक संरचना निर्माणलाई घटाएर डीएनए प्रवर्धन सुधार गर्न सक्छ र सामान्यतया व्यावसायिक PCR किटहरूमा "रहस्य" थपिन्छ।यदि तपाईं betaine प्रयोग गर्न चाहनुहुन्छ भने, तपाईंले betaine वा betaine मोनो-हाइड्रेट (Betaine वा Betaine mono-hydrate), तर betaine हाइड्रोक्लोराइड (Betaine HCl) राख्नु हुँदैन, 1-1.7M को अन्तिम एकाग्रतामा समायोजन गर्नुहोस्।Betaine ले विशिष्टता सुधार गर्न पनि मद्दत गर्न सक्छ किनभने यसले DNA पग्लने/डीएनए विकृतीकरणको आधार जोडी संरचना निर्भरतालाई हटाउँछ।
गैर-विशिष्ट प्राइमिंग कम गर्न additives
Formamide
Formamide एक सामान्य रूपमा प्रयोग हुने जैविक PCR additive हो।यो DNA मा प्रमुख खाली र माइनर ग्रूभ संग संयोजन गर्न सक्छ, जसले मास्टर DNA डबल हेलिक्स को स्थिरता कम गर्न र DNA को पग्लने तापमान कम गर्दछ।PCR प्रयोगहरूमा प्रयोग हुने फोरमाइडको एकाग्रता सामान्यतया 1%-5% हुन्छ।
टेट्रामेथाइलअमोनियम क्लोराइड( TMAC)
टेट्रामेथाइलमोनियम क्लोराइडले हाइब्रिडाइजेशन (संकरण विशिष्टता) को विशिष्टता बढाउन सक्छ र DNA को पग्लने तापमान बढाउन सक्छ।यसरी, TMAC ले गैर-विशिष्ट प्राइमिङ हटाउन र DNA र RNA को मिसबाइन्डिङ कम गर्न सक्छ।यदि तपाइँ प्रयोग गर्नुहुन्छडिजेनेरेट प्राइमरहरूPCR प्रतिक्रियामा, TMAC थप्न सम्झनुहोस्, जुन सामान्यतया 15-100mM को एकाग्रतामा प्रयोग गरिन्छ।
अन्य सामान्य additives
माथि उल्लिखित additives को दुई कोटिहरु को अतिरिक्त, PCR प्रतिक्रियाहरु मा धेरै सामान्य additives छन्, यद्यपि तिनीहरु को विभिन्न प्रकार्यहरु छन्, तिनीहरू पनि धेरै महत्त्वपूर्ण छन्।
म्याग्नेसियम आयन
म्याग्नेसियम आयन पोलिमरेजको अपरिहार्य कोफ्याक्टर (कोफ्याक्टर) हो, अर्थात् म्याग्नेसियम आयन बिना पोलिमरेज निष्क्रिय हुन्छ।यद्यपि, धेरै म्याग्नेसियम आयनहरूले पोलिमरेजको दक्षतालाई पनि असर गर्न सक्छ।प्रत्येक PCR प्रतिक्रियामा म्याग्नेसियम आयनहरूको एकाग्रता फरक हुनेछ।चेलेटिंग एजेन्टहरू (जस्तै EDTA वा साइट्रेट), dNTPs र प्रोटीनहरूको एकाग्रताले म्याग्नेसियम आयनहरूको एकाग्रतालाई असर गर्छ।त्यसोभए, यदि तपाइँलाई तपाइँको PCR प्रयोगमा समस्या छ भने, तपाइँ फरक म्याग्नेसियम आयन सांद्रताहरू परिवर्तन गर्न प्रयास गर्न सक्नुहुन्छ, उदाहरणका लागि, 1.0 देखि 4.0mM सम्म, बीचमा 0.5-1mM को अन्तरालमा।
यो ध्यान दिन लायक छ कि धेरै फ्रिज-थव चक्रहरूले म्याग्नेसियम क्लोराइड समाधानको एकाग्रता स्तरीकरण गर्न सक्छ।तसर्थ, तपाईंले प्रत्येक प्रयोग गर्नु अघि यसलाई पूर्ण रूपमा विघटन गर्नुपर्छ, र यसलाई प्रयोग गर्नु अघि राम्रोसँग मिलाउनुहोस्।
गोवाइन सीरम एल्बमिन(बोवाइन एल्बमिन, BSA)
आणविक रसायन विज्ञान प्रयोगहरूमा, गोवाइन सीरम एल्बुमिन एक धेरै सामान्य additive हो, विशेष गरी प्रतिबन्ध इन्जाइम पाचन र PCR प्रयोगहरूमा।PCR प्रतिक्रियाहरूमा, BSA ले फेनोलिक यौगिकहरू जस्ता प्रदूषकहरूलाई कम गर्न मद्दत गर्दछ।र यो पनि भनिन्छ कि यसले परीक्षण ट्यूबको पर्खालमा रिएक्टेन्टहरूको टाँसिएको कम गर्न सक्छ।PCR प्रतिक्रियामा, सामान्यतया थपिएको BSA को एकाग्रता 0.8 mg/ml पुग्न सक्छ।
 
सम्बन्धित उत्पादनहरु:
PCR हिरो(रङ्ग संग)
PCR हिरो