लेखक: वांग Xiaoyan, Zhao Eryu

एकाइ: Jiaozhou अस्पताल, Dongfang अस्पताल Tongji विश्वविद्यालय सम्बद्ध

हाल, श्वासप्रश्वासको रोगजनक न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउनको लागि मुख्य नमूना प्रकार थ्रोट स्वाब हो।त्यहाँ धेरै प्रकारका सामान्य रूपमा प्रयोग गरिएका नमूना संरक्षण समाधानहरू छन्, ती सबैलाई यातायात र भण्डारणको लागि फ्रिज वा फ्रिज गर्न आवश्यक छ;सङ्कलन र ढुवानी प्रक्रियाको क्रममा कम तापमानको सम्पूर्ण प्रक्रियालाई नियन्त्रण गर्न गाह्रो छ, र नमूना परीक्षण अघि गुणस्तर नियन्त्रण सुनिश्चित गर्न गाह्रो छ।^[१-२].

RNase (RNase) एक endonuclease हो जसले RNA लाई हाइड्रोलाइज गर्छ, मुख्यतया न्यूक्लियोटाइडहरू बीचको फास्फोडिएस्टर बन्धनहरू तोड्छ।RNase अणु धेरै स्थिर छ, संरचनामा डाइसल्फाइड बन्डहरू छन्, र यसको गतिविधिलाई divalent cations को उपस्थिति आवश्यक पर्दैन, त्यसैले RNase सजिलै विकृत हुँदैन, र उच्च तापक्रम वा डिनाचुरेन्टहरूको प्रयोग पछि पनि यसलाई पुन: प्राप्त गर्न सजिलो हुन्छ।RNases endogenous र exogenous मा विभाजित छन्।अन्तर्जात RNases कोशिकाहरू फुट्दा एकै समयमा जारी गर्न सकिन्छ।तसर्थ, अन्तर्जात RNases को भूमिका हटाउन RNA निकासी प्रक्रिया मा एक धेरै महत्वपूर्ण कदम हो।Exogenous RNases व्यापक रूपमा वितरित छन्।हावा, मानव छाला, कपाल र र्यालमा RNaseहरू अवस्थित छन्, जुन RNA को सजिलै क्षरणको महत्त्वपूर्ण कारणहरू हुन्।^[३].

डाटा क्वेरी

CANS-CL02-A009 "आण्विक निदानको क्षेत्रमा चिकित्सा प्रयोगशाला गुणस्तर र योग्यता मान्यता दिशानिर्देशहरूको आवेदन" प्राविधिक आवश्यकताहरूमा प्रस्ताव गर्दछ कि उपयुक्त पानी गुणस्तर मापदण्डहरू आवेदन अनुसार तयार हुनुपर्छ;डिस्पोजेबल एयरटाइट कन्टेनरहरू:

RNase/वर्गीकरण

(१) आरनेस ए

रिबोन्युक्लिज ए (RNase A), गोवाइन प्यान्क्रियाजबाट व्युत्पन्न, एक एन्डोरिबोन्यूक्लिज हो जसले विशेष रूपमा आरएनएमा पाइरिमिडिन अवशेषहरूको 3′ छेउमा आक्रमण गर्न सक्छ, साइटोसिन वा युरासिललाई छेउछाउका न्यूक्लियोटाइडहरू द्वारा बनाईएको छ।Phosphodiester bond, प्रतिक्रियाको अन्तिम उत्पादन 3′ pyrimidine nucleotide र 3′ pyrimidine nucleotide को अन्तमा oligonucleotide हुन्छ।

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae बाट व्युत्पन्न गरिएको हो, यसले विशेष गरी गुआनिनको 3′-टर्मिनल फस्फेटमा कार्य गर्दछ, र क्लीभेज साइट गुआनिनको 3′ फस्फेट र छेउछाउको 5′ हाइड्रोक्सिलको बीचमा छ।प्रतिक्रियाको अन्तिम उत्पादन 3′guanylic एसिड र 3′guanylic एसिडको अन्त्यमा ओलिगोन्यूक्लियोटाइड टुक्राहरू हुन्।

(३) आरनेस एच

Ribonuclease H (RNase H) पहिलो पटक बाछोको थाइमस टिस्युबाट पत्ता लगाइएको थियो, र यसको एन्कोडिङ जीनलाई Escherichia coli मा क्लोन गरिएको छ।यसले विशेष रूपमा डीएनएलाई घटाउन सक्छ: आरएनए हाइब्रिड डुप्लेक्सहरूमा आरएनए स्ट्र्यान्डहरू, परिणामस्वरूप 3′-OH र 5′-मोनोफोस्फेट समाप्त भएका ओलिगोन्यूक्लियोटाइडहरू र मोनोन्यूक्लियोटाइडहरू हुन्छन्, यसले एकल- वा डबल-स्ट्र्यान्डेड DNA वा RNA लाई घटाउन सक्दैन।

RNase

कार्य र प्रयोग

रिबोन्यूक्लिजले रिबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) को गिरावटलाई उत्प्रेरित गर्न सक्छ र कृत्रिम रूपमा संश्लेषित गर्न सकिन्छ।आघात र जोर्नी दुखाइको उपचार गर्न औषधीय मलमको प्रयोग गरिन्छ।रिपोर्टहरूका अनुसार, रिबोन्यूक्लिजले होस्ट सेल मेटाबोलिज्म परिवर्तन गर्न सक्छ, भाइरस संश्लेषणलाई रोक्छ, भिट्रोमा इन्फ्लुएन्जा भाइरसको फैलावटलाई रोक्छ, र कुखुराको भ्रूणमा भ्याक्सिनिया र हर्पेस भाइरसको गठनलाई रोक्छ।180 mg को ribonuclease दैनिक इन्ट्रामस्कुलर इंजेक्शन को क्लिनिकल प्रयोग, महामारी इन्सेफलाइटिस को उपचार को लागी लाभदायक, ribonuclease ले ribonucleic एसिड (RNA) को गिरावट उत्प्रेरित गर्न सक्छ, र अब कृत्रिम रूपमा संश्लेषित गर्न सकिन्छ।आघात र जोर्नी दुखाइको उपचार गर्न औषधीय मलमको प्रयोग गरिन्छ।रिपोर्टहरूका अनुसार, रिबोन्यूक्लिजले होस्ट सेल मेटाबोलिज्म परिवर्तन गर्न सक्छ, भाइरस संश्लेषणलाई रोक्छ, भिट्रोमा इन्फ्लुएन्जा भाइरसको फैलावटलाई रोक्छ, र कुखुराको भ्रूणमा भ्याक्सिनिया र हर्पेस भाइरसको गठनलाई रोक्छ।180 मिलीग्रामको दैनिक इन्ट्रामस्कुलर इंजेक्शनको क्लिनिकल प्रयोग एपिडेमिक इन्सेफलाइटिसको उपचारको लागि लाभदायक छ।

RNase

अवरोधक परिभाषा

RNase अवरोधक एकाइको परिभाषा: 5ng RNase A को गतिविधिको 50% रोक्न आवश्यक इन्जाइमको मात्रा एक एकाइ हो।

RNase अवरोधकहरूले कसरी काम गर्छन्

गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट:

Guanidine isothiocyanate आणविक सूत्र C2H6N4S संग एक जैविक यौगिक हो।मुख्यतया जैविक चिकित्सा, रासायनिक अभिकर्मक, आदि मा प्रयोग गरिन्छ। Guanidine isothiocyanate एक प्रोटीन lysing एजेन्ट हो, र यो अक्सर आणविक डायग्नोस्टिक अभिकर्मक मा lysis समाधान को मुख्य घटक को रूप मा प्रयोग गरिन्छ।यसले तन्तुलाई नष्ट गर्न सक्छ, कोशिकाको संरचनालाई नष्ट गर्न सक्छ र न्यूक्लिक एसिडलाई न्यूक्लियोप्रोटिनबाट अलग गर्न सक्छ, र RNase मा बलियो विकृति हुन्छ।यो हालको सबैभन्दा प्रभावकारी RNase अवरोधक हो।

TRIzol एक उपन्यास कुल आरएनए निकासी अभिकर्मक हो जसले प्रत्यक्ष रूपमा कोशिका वा तन्तुहरूबाट कुल आरएनए निकाल्न सक्छ।यसमा फिनोल र गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट जस्ता पदार्थहरू छन्, जसले कोशिकाहरूलाई द्रुत रूपमा बाधा पुर्‍याउँछ र कोशिकाहरूद्वारा निस्कने न्यूक्लिजहरूलाई रोक्छ।

(यद्यपि, guanidine isothiocyanate प्रयोगशाला अनुसन्धानकर्ताहरूको स्वास्थ्यको लागि खतरनाक छ।)

RNasin:

मुसाको कलेजो वा मानव ब्लास्टोडर्मबाट निकालिएको एसिड ग्लाइकोप्रोटिन।Rnasin RNase को एक गैर-प्रतिस्पर्धी अवरोधक हो, जसले तिनीहरूलाई निष्क्रिय पार्न विभिन्न RNaseहरूलाई बाँध्न सक्छ।

(थप विवरण: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hउच्च तापमान:

उच्च तापमान पनि प्रोटीन विकृतीकरण को एक सामान्य माध्यम हो।

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC एक बलियो तर अपूर्ण RNase अवरोधक हो, जसले RNase सक्रिय समुहको एमिनो एसिड इमिडाजोल रिंगसँग मिलाएर प्रोटिनलाई डिनेचर गर्न RNase गतिविधिलाई रोक्न सक्छ।

Vanadyl ribonucleoside जटिल:

भ्यानेडियम अक्साइड आयनहरू र न्यूक्लियोसाइडहरू द्वारा बनाईएको एक जटिल, जुन संक्रमण पदार्थको रूपमा RNase मा बाँध्छ, जसले लगभग पूर्ण रूपमा RNase को गतिविधिलाई रोक्न सक्छ।

अन्य:

एसडीएस, यूरिया, डायटोमेसियस अर्थ आदिको पनि आरनेजमा निश्चित अवरोध प्रभाव हुन्छ।

विशेषज्ञ समीक्षा

ली युजी प्रमुख प्राविधिक

प्रयोगशाला विभागका निर्देशक, जियाओझाउ अस्पताल, डोङफाङ अस्पताल टोङ्जी विश्वविद्यालयसँग सम्बद्ध

एक्सोजेनस RNase को बायोडिग्रेडेशन रोक्नको लागि, मास्क, पन्जा र टोपी लगाउनु पर्छ र RNA निकासी प्रक्रिया को समयमा बारम्बार प्रतिस्थापन गर्नुपर्छ।सबै काँचका भाँडाहरू 200 डिग्री सेल्सियसमा 2 घण्टा भन्दा बढीको लागि सुकाउने ओभनमा पकाउनु पर्छ।बेकिंगको लागि प्रयोग हुने सामग्रीहरू, जस्तै प्लास्टिक, DEPC पानीले प्रशोधन गर्न आवश्यक छ, र त्यसपछि डिस्टिल्ड पानीले धोइन्छ।आरएनए को निकासी, संरक्षण र पहिचानको लागि प्रयोग गरिने अभिकर्मक वा यन्त्रहरू आरएनएलाई समर्पित हुनुपर्छ, र एक स्वतन्त्र आरएनए सञ्चालन क्षेत्र स्थापना गरिनुपर्छ।

सन्दर्भ:

[१] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al।स्वदेशी अस्ट्रेलियाली बालबालिका [J] मा तीव्र तल्लो श्वासप्रश्वासको संक्रमण सुरु हुनु अघि नै नासोफरिन्क्समा ब्याक्टेरिया र भाइरसहरू।Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018,37 (9): 1785-1794।

[२] चिनियाँ रोकथाम औषधि संघको अस्पताल संक्रमण नियन्त्रण शाखा।क्लिनिकल माइक्रोबियल नमूनाहरूको सङ्कलन र निरीक्षणको लागि दिशानिर्देशहरू [J]।अस्पताल संक्रमणको चिनियाँ जर्नल, 2018(20):3192-3200।

[३] "क्लिनिकल टेस्ट दस हजार किन आणविक जीवविज्ञान परीक्षण मात्रा"