परिचय:

RNA, वैज्ञानिक नाम ribonucleic acid, यसको संक्षिप्त नाम RiboNucleic Acid बाट आएको हो, न्यूक्लिक एसिडको एक प्रकार हो जुन फस्फोडिएस्टर बन्डहरू मार्फत कम्तिमा दर्जनौं रिबोन्यूक्लियोटाइडहरू जोडेर बनाइन्छ।

आरएनए अन्वेषणको आधार प्रदूषणमुक्त कुल आरएनए निकाल्नु हो, र आरएनए निकासीको आधारभूत सिद्धान्तलाई निम्नानुसार संक्षेप गर्न सकिन्छ:

1. पहिले कोशिकाहरूलाई बाधा पुर्‍याउनुहोस्

2. त्यसपछि macromolecular अशुद्धता (प्रोटिन, लिपिड, DNA, आदि) हटाउनुहोस्।

3. अन्तमा, लवण र जैविक विलायकहरू हटाउँदा, र आरएनएलाई थप शुद्ध गर्ने क्रममा आरएनए प्रक्षेपित हुन्छ।

निकासी विधिको विगत र वर्तमान

आरएनए निकासी विधिको पहिलो पुस्ता भनेको TRIzol अवक्षेपण विधि हो (प्रयोग गरिएका अभिकर्मकहरूमा गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट, फिनोल, क्लोरोफर्म, इत्यादि समावेश छन्) पिओटर चोम्सेन्स्की र हजुरआमा निकोलेटा साच्चीले आविष्कार गरेका थिए, किनभने यस आविष्कारले आरएनए निकासीलाई द्रुत र सहज रूपमा आरएनए अनुसन्धान सुरु गर्न अनुमति दिन्छ।

पछि, हजुरबुबाले यो पेटेन्ट Invitrogen लाई बेच्नुभयो, र Invitrogen ले यो विधिलाई संसारमा प्रवर्द्धन गर्यो र व्यापक रूपमा प्रयोग हुने विधि बन्यो।

पछि, Invitrogen थर्मो द्वारा अधिग्रहण गरिएको थियो!

प्रतिनिधि उत्पादन: Invitrogen's TRIzol अभिकर्मक

यद्यपि, TRIzol अवक्षेपण विधिलाई धेरै वर्षा र RNA को निकासी चाहिन्छ, र प्रयोग गरिएका अभिकर्मकहरू विषाक्त हुन्छन् र सञ्चालन गर्न लामो समय लाग्छ।

तसर्थ, दोस्रो पुस्ताको स्तम्भ-इन्जाइम शुद्धिकरण विधि अस्तित्वमा आयो, सिलिका जेल झिल्लीलाई विशिष्ट न्यूक्लिक एसिड शोषण सामग्रीको रूपमा प्रयोग गरी नमूनामा आरएनएको रिकभरीलाई अधिकतम बनाउनको लागि अन्य अशुद्धताहरू हटाउँदै।

दोस्रो पुस्ताको विधिले स्थिर कार्यसम्पादनको आधारमा सञ्चालनलाई सरल बनाउँछ, जोखिम कारक कम गर्छ, र आरएनए निकासीको दक्षतामा सुधार गर्छ।

प्रतिनिधि उत्पादनहरू: QIAGEN RNeasy र धेरै घरेलु उत्पादनहरू

यद्यपि, पहिलो र दोस्रो पुस्ता दुवै विधिहरूमा DNA प्रदूषण हटाउन DNase को प्रयोग आवश्यक छ, जसले पछिल्ला डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूमा केही असुविधा ल्याउँछ।अवशिष्ट DNase ले रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनको दक्षता घटाउनेछ र पहिलो-स्ट्र्यान्ड cDNA संश्लेषणलाई कम गर्नेछ, जसले गर्दा परिणामहरूको शुद्धतालाई असर गर्छ।

तसर्थ, तेस्रो पुस्ताको निकासी विधि दोस्रो पुस्ताको आधारमा अप्टिमाइज गरिएको छ।प्रयोगमा कुनै पनि इन्जाइमहरू थप्न आवश्यक पर्दैन, र आरएनए सजिलैसँग दुईवटा स्तम्भहरूबाट प्राप्त गर्न सकिन्छ।

स्तम्भ १: DNA सफा गर्न DNA-सफाई स्तम्भ

स्तम्भ २: RNA-मात्र स्तम्भले विशेष रूपमा RNA सोख्छ र पुनःप्राप्त गर्छ

यस्तो साधारण अपरेशनले समय बचत मात्र गर्दैन, तर डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूको सञ्चालनलाई पनि सुविधा दिन्छ!

प्रतिनिधि उत्पादनहरू: QIAGEN RNeasy Plus रफोरेजीनआरएनए शुद्धीकरण श्रृंखला उत्पादनहरू

(RNeasy Plus)

(Foregene कोप्लान्ट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट)

चुपचाप भन !Foregene को RNA किटले प्रयोग गर्न-गर्न-सजिलो RNase इरेजर पनि प्रस्तुत गर्दछ, जसले मानव शरीरमा कुनै पनि विषाक्त पदार्थहरू थप नगरी 1 मिनेटमा ठोस सतहमा 400μg RNase लाई पूर्ण रूपमा हटाउन सक्छ!

तस्वीर1: परिचालन प्रक्रिया तुलना चार्ट

Foregene को उत्पादनहरूले केवल दुई गीतहरूमा आरएनए निकासी पूरा गर्न सक्छ, अरूलाई तपाईंको प्रयोग प्रगतिको ईर्ष्या नगर्नुहोस्!

तस्वीर२:Eप्रयोगात्मक परिणामहरू तुलना चार्ट

पहिलो पुस्ता (1: TRIzol)

दोस्रो पुस्ता (२: QIAGEN को RNeasy)

तेस्रो पुस्ता (३: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

तस्वीर3: qPCR ग्राफ (एम्प्लीफिकेशन कर्भ ग्राफ)

पहिलो पुस्ता (हरियो भनेको TRIzol -, रातो भनेको TRIzol +)

दोस्रो पुस्ता (आकाश निलो भनेको QIAGEN RNeasy-, रातो भनेको QIAGEN RNeasy +)

तेस्रो पुस्ता (निलो भनेको QIAGEN RNeasy प्लस, हरियो भनेको Foregene)

(नोट: qPCR ग्राफ "-" ले संकेत गर्दछ कि DNase थपिएको छैन र DNA प्रदूषण हटाइएको छैन। त्यसैले, CT उच्च छ र परिणाम सही छैन; "+" ले संकेत गर्दछ कि DNase थपिएको छ र DNA प्रदूषण हटाइएको छ, परिणाम सही छ)

प्रत्येक प्राविधिक स्तरवृद्धिको मतलब प्रयोगको सञ्चालन सरल र अधिक प्रयोगकर्ता-अनुकूल दिशामा विकास भइरहेको छ।

Foregene ले थप वैज्ञानिक अनुसन्धानकर्ताहरूलाई प्रयोगात्मक समय र लागत बचत गर्न, उच्च गुणस्तरको प्रयोगात्मक परिणामहरू प्राप्त गर्न र संयुक्त रूपमा थप मूल्यवान वैज्ञानिक अनुसन्धान उपलब्धिहरू सिर्जना गर्न मद्दत गर्ने लक्ष्य राखेको छ।