प्रकोपको प्रारम्भिक चरणमा, द्रुत विकासको कारण, संदिग्ध बिरामीहरूको द्रुत निदान नै COVID-19 लाई रोक्नको लागि महत्वपूर्ण छ।केही अनुमोदित न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने अभिकर्मकहरूको विकास समय छोटो छ, र त्यहाँ हतार कार्य पुष्टिकरण, अपर्याप्त अभिकर्मक अप्टिमाइजेसन, र ब्याचहरू बीच ठूलो भिन्नता जस्ता समस्याहरू छन्;न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने प्रक्रियाका विभिन्न पक्षहरूमा विभिन्न क्लिनिकल प्रयोगशालाहरूको समस्याहरूले पनि न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने परिणामहरूको शुद्धतालाई असर गर्न सक्छ।यस लेखले हालको SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने मुख्य लिङ्कहरू र बिन्दुहरूमा ध्यान केन्द्रित गर्नेछ, र प्रयोगशाला न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने र क्लिनिकल असंगतताको गलत नकारात्मक र सकारात्मक पुन: परीक्षणको समस्याहरूको विश्लेषण गर्नेछ।

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने सिद्धान्तहरू

SARS-CoV-2 एक आरएनए भाइरस हो जसको जीनोम अनुक्रम लगभग 29 kb छ, 10 जीनहरू छन्, जसले 10 प्रोटीनहरूलाई प्रभावकारी रूपमा इन्कोड गर्न सक्छ।भाइरसहरू आरएनए र प्रोटिन मिलेर बनेका हुन्छन् र सबैभन्दा बाहिरी तह लिपिड र ग्लाइकोप्रोटिनले बनेको बाहिरी आवरण हो।भित्र, प्रोटिन क्याप्सिडले यसमा आरएनए बेर्छ, जसले गर्दा सजिलैसँग डिग्रेडेबल आरएनए (P1) लाई सुरक्षित राख्छ।

P1 SARS-COV-2 को संरचना

भाइरसहरूले संक्रमणको कारण विशिष्ट सेल सतह रिसेप्टरहरू मार्फत कोशिकाहरूमा आक्रमण गर्छन्, र प्रतिकृति बनाउन होस्ट सेलहरू प्रयोग गर्छन्।

भाइरल न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने सिद्धान्त भनेको सेल लाइसेट मार्फत भाइरल आरएनएलाई पर्दाफास गर्नु हो, र त्यसपछि पत्ता लगाउन वास्तविक-समय फ्लोरोसेन्ट रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन-पोलिमरेज चेन रियाक्सन (RT-PCR) प्रयोग गर्नुहोस्।

पत्ता लगाउने सिद्धान्तको कुञ्जी भनेको न्यूक्लिक एसिड अनुक्रमहरूको "लक्षित मिलान" प्राप्त गर्न प्राइमर र प्रोबहरू प्रयोग गर्नु हो, अर्थात्, SARS-CoV-2 को न्यूक्लिक एसिड अनुक्रम फेला पार्न जुन लगभग 30,000 आधारहरूमा अन्य भाइरसहरू भन्दा फरक छ (अन्य भाइरसहरूसँग न्यूक्लिक एसिडको समानता), प्राइम एरिया र प्रोब डिजाइन।

प्राइमर र प्रोबहरू SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिडको विशिष्ट क्षेत्रसँग धेरै मिल्दोजुल्दो छन्, अर्थात्, विशिष्टता धेरै बलियो छ।एक पटक परीक्षण गरिने नमूनाको वास्तविक-समय फ्लोरोसेन्ट RT-PCR प्रवर्द्धन परिणाम सकारात्मक छ, यसले नमूनामा SARS-CoV-2 रहेको प्रमाणित गर्दछ।P2 हेर्नुहोस्।

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड निर्धारणको P2 चरणहरू (वास्तविक-समय फ्लोरोसेन्ट RT-PCR)

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउन प्रयोगशालाको अवस्था र आवश्यकताहरू

न्यूक्लिक एसिड परीक्षण प्रयोगशालाहरू नकारात्मक दबाब वातावरणको लागि सबैभन्दा आदर्श हो, र तिनीहरूले दबाव निगरानीमा ध्यान दिनु पर्छ, हावा प्रवाह राख्नु पर्छ, र एरोसोलहरू हटाउनु पर्छ।न्यूक्लिक एसिड परीक्षण गर्ने कर्मचारीहरूसँग सम्बन्धित योग्यताहरू हुनुपर्छ, सान्दर्भिक पोलिमरेज चेन प्रतिक्रिया प्रशिक्षण प्राप्त गर्नुहोस् र मूल्याङ्कन पास गर्नुहोस्।प्रयोगशाला कडाईका साथ व्यवस्थित हुनुपर्छ, ठाउँमा जोन गरिएको छ, र अप्रासंगिक कर्मचारीहरूलाई प्रवेश गर्न कडा रूपमा निषेध गरिएको छ।सफा ठाउँ हावा चल्ने र ठाउँमा कीटाणुरहित हुनुपर्छ।सान्दर्भिक वस्तुहरू जोनहरूमा राखिन्छन्, सफा र फोहोर छुट्याइन्छ, समयमै प्रतिस्थापन गरिन्छ, र ठाउँमा प्रशोधन गरिन्छ।नियमित कीटाणुशोधन: क्लोरीन युक्त कीटाणुनाशक ठूला क्षेत्रहरूको लागि मुख्य समाधान हो, र 75% अल्कोहल साना क्षेत्रहरूमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।एरोसोलसँग डिल गर्ने राम्रो तरिका भेन्टिलेसनका लागि झ्यालहरू खोल्नु हो, र हावा कीटाणुशोधन पनि पराबैंगनी किरणहरू, निस्पंदन र हावा कीटाणुशोधनको माध्यमबाट गर्न सकिन्छ।

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड निर्धारण (रियल-टाइम फ्लोरोसेन्ट RT-PCR) को मुख्य लिङ्कहरू र मापदण्डहरू

यद्यपि प्रयोगशालाहरूले सामान्यतया न्यूक्लिक एसिड "पत्ता लगाउन" मा धेरै ध्यान दिन्छन्, वास्तवमा, न्यूक्लिक एसिड "निकासी" पनि सफल पत्ता लगाउनको लागि एक प्रमुख चरण हो, जुन भाइरस नमूनाहरूको सङ्कलन र भण्डारणसँग नजिकको सम्बन्ध छ।

वर्तमानमा, सबैभन्दा व्यापक रूपमा प्रयोग हुने श्वासप्रश्वास नमूनाहरू, जस्तै नासोफरिन्जियल स्वाबहरू, दोस्रो विधि प्रयोग गर्छन्, जुन न्यूक्लिक एसिड निकासी र लिसिस समाधानमा आधारित एक निष्क्रिय (संरक्षण) समाधान हो।एकातिर, यो भाइरस संरक्षण समाधानले भाइरसको प्रोटिनलाई नष्ट गर्न सक्छ, यसको गतिविधि गुमाउन सक्छ र अब संक्रामक नहुन सक्छ, र यातायात र पत्ता लगाउने चरणको सुरक्षा सुधार गर्न सक्छ;अर्कोतर्फ, यसले न्यूक्लिक एसिड रिलिज गर्न, न्यूक्लिक एसिड विघटन गर्ने इन्जाइमलाई हटाउन र भाइरसलाई रोक्न भाइरसलाई सीधै क्र्याक गर्न सक्छ।आरएनए बिग्रेको छ।

न्यूक्लिक एसिड निकासी लिसिस समाधानको आधारमा तयार गरिएको भाइरस नमूना समाधान।मुख्य कम्पोनेन्टहरू सन्तुलित लवणहरू, इथिलेनेडाइमिनटेट्राएसेटिक एसिड चेलेटिंग एजेन्ट, गुआनिडाइन नुन (गुआनिडाइन आइसोथियोसाइनेट, गुआनिडाइन हाइड्रोक्लोराइड, इत्यादि), एनियोनिक सर्फैक्टेन्ट (डोडेकेन) सोडियम सल्फेट), क्याटनिक सर्फैक्टेन्ट (टेट्राडेसाइल ट्राइमेथियोलॉक्सलाइन, एम्फेनोलॉक्सिनेट) reitol, proteinase K र अन्य धेरै वा बढी घटकहरू।हाल, त्यहाँ धेरै प्रकारका न्यूक्लिक एसिड निकासी किटहरू छन्, र विभिन्न न्यूक्लिक एसिड निकासी र शुद्धीकरण अभिकर्मकहरू प्रयोग गरिन्छ।एउटै न्यूक्लिक एसिड निकासी र शुद्धीकरण अभिकर्मक प्रयोग गरिए पनि, प्रत्येक किटको निकासी प्रक्रियाहरू फरक हुन्छन्।

हाल, राष्ट्रिय चिकित्सा उत्पादन प्रशासन द्वारा अनुमोदित न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किट उत्पादनहरू SARS-CoV-2 जीनोममा ORF1ab, E र N जीनको आधारमा चयन गरिन्छ।विभिन्न उत्पादनहरूको पत्ता लगाउने सिद्धान्तहरू मूलतया एउटै हुन्छन्, तर तिनीहरूको प्राइमर र प्रोब डिजाइनहरू फरक हुन्छन्।त्यहाँ एकल-लक्ष्य खण्डहरू (ORF1ab), दोहोरो-लक्ष्य खण्डहरू (ORF1ab, N वा E), र तीन-लक्ष्य क्षेत्रहरू (ORF1ab, N र E) छन्।पत्ता लगाउने र व्याख्या, न्यूक्लिक एसिड निकासी र वास्तविक-समय फ्लोरोसेन्ट RT-PCR प्रतिक्रिया प्रणाली बीचको भिन्नताले सम्बन्धित किट निर्देशनहरूलाई सन्दर्भ गर्नुपर्छ, र यो सिफारिस गरिन्छ कि प्रयोगकर्ताहरूलाई व्याख्याको लागि किट निर्देशनहरूमा निर्दिष्ट गरिएको व्याख्या विधिलाई कडाईका साथ पालना गर्नुहोस्।वास्तविक-समय फ्लोरोसेन्ट RT-PCR द्वारा विस्तारित साझा क्षेत्रहरू, प्राइमरहरू र प्रोब अनुक्रमहरू P3 मा देखाइएको छ।

P3 जीनोममा SARS-CoV-2 एम्प्लिकन लक्ष्यको स्थान र प्राइमर र प्रोबहरूको अनुक्रम

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड निर्धारणको नतिजाको व्याख्या (Real-Time फ्लोरोसेन्ट RT-PCR)

"सार्स-कोभ-२ संक्रमणको लागि निमोनिया रोकथाम र नियन्त्रण योजना (दोस्रो संस्करण)" ले पहिलो पटक एकल जीन प्रवर्धनको नतिजालाई न्याय गर्ने मापदण्ड स्पष्ट गरेको छ:

1. कुनै Ct वा Ct≥40 नकारात्मक छैन;

2. Ct <37 सकारात्मक छ;

3. 37-40 को Ct मान ग्रे-स्केल क्षेत्र हो।यो प्रयोग दोहोर्याउन सिफारिस गरिएको छ।यदि Ct<40 र एम्प्लीफिकेशन कर्भलाई पुन: गर्ने नतिजामा स्पष्ट चुचुराहरू छन् भने, नमूनालाई सकारात्मक मानिन्छ, अन्यथा यो नकारात्मक हुन्छ।"

गाइडको तेस्रो संस्करण र गाइडको चौथो संस्करणले माथिको मापदण्डलाई जारी राख्यो।यद्यपि, व्यावसायिक किटहरूमा प्रयोग गरिएका विभिन्न लक्ष्यहरूका कारण, गाईडको माथि उल्लिखित तेस्रो संस्करणले लक्ष्यहरूको संयोजन निर्धारण गर्ने मापदण्ड दिएन, निर्माताद्वारा प्रदान गरिएका निर्देशनहरू प्रबल हुनेछ भन्ने कुरामा जोड दिँदै।दिशानिर्देशको पाँचौं संस्करणबाट सुरु गरेर, दुई लक्ष्यहरू स्पष्ट गरिएको छ, विशेष गरी एकल लक्ष्यको लागि न्याय मापदण्ड जुन न्याय गर्न गाह्रो छ।त्यो हो, यदि प्रयोगशालाले SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउनको लागि केस सकारात्मक छ भनेर पुष्टि गर्न चाहन्छ भने, निम्न 2 सर्तहरू मध्ये 1 पूरा गर्न आवश्यक छ:

(१) एउटै नमूनामा SARS-CoV-2 (ORF1ab, N) को दुई लक्ष्यहरू वास्तविक-समय फ्लोरोसेन्ट RT-PCR द्वारा सकारात्मक परीक्षण गरिएका छन्।यदि एकल लक्ष्य सकारात्मक छ भने, पुन: नमूना र पुन: परीक्षण आवश्यक छ।यदि परीक्षण परिणामहरू छन् भने यदि एकल लक्ष्य अझै सकारात्मक छ भने, यसलाई सकारात्मक रूपमा न्याय गरिन्छ।

(२) रियल-टाइम फ्लोरोसेन्ट RT-PCR को दुई नमूनाहरूले एकै समयमा एकल लक्ष्य सकारात्मक देखाए वा एउटै प्रकारका दुई नमूनाहरूले एकल लक्ष्य सकारात्मक परीक्षण परिणाम देखाए, जसलाई सकारात्मक रूपमा मान्न सकिन्छ।यद्यपि, दिशानिर्देशहरूले यो पनि जोड दिन्छ कि न्यूक्लिक एसिड परीक्षणको नकारात्मक नतिजाले SARS-CoV-2 संक्रमणलाई बहिष्कार गर्न सक्दैन।खराब नमूना गुणस्तर (ओरोफरिन्क्स र अन्य भागहरूबाट श्वासप्रश्वासका नमूनाहरू), नमूना सङ्कलन धेरै चाँडो वा धेरै ढिलो, नमूनाहरू भण्डारण, ढुवानी र सही तरिकाले प्रशोधन गरिएको थिएन, र प्रविधिमा समस्याहरू थिए (भाइरस भिन्नता, PCR अवरोध) आदि।

SARS-CoV-2 पत्ता लगाउन गलत नकारात्मक कारणहरू

न्यूक्लिक एसिड परीक्षणमा "झूटो नकारात्मक" को अवधारणा जुन हाल चिन्तित छ, प्रायः "झूटो नकारात्मक" लाई जनाउँछ जसमा न्यूक्लिक एसिड परीक्षण परिणामहरू क्लिनिकल अभिव्यक्तिहरूसँग असंगत छन्, अर्थात्, क्लिनिकल लक्षणहरू र इमेजिङ परिणामहरू COVID-19 को अत्यधिक शंकास्पद छन्, तर न्यूक्लिक एसिड परीक्षणहरू सधैं "नकारात्मक" हुन्छन्।राष्ट्रिय स्वास्थ्य आयोगको क्लिनिकल प्रयोगशाला केन्द्रले "झूटो नकारात्मक" SARS-CoV-2 परीक्षणको व्याख्या गर्‍यो।

(१) संक्रमित व्यक्तिको कोषमा निश्चित मात्रामा भाइरस हुन्छ ।विद्यमान तथ्यांकले शरीरमा भाइरसको संक्रमण भएपछि नाक र मुख हुँदै घाँटीमा प्रवेश गर्छ, त्यसपछि श्वासनली र ब्रोन्चीमा पुग्छ र त्यसपछि अल्भियोलीमा पुग्छ।संक्रमित व्यक्तिले इन्क्युबेशन अवधि, हल्का लक्षणहरू र त्यसपछि गम्भीर लक्षणहरूको प्रक्रिया र रोगको विभिन्न चरणहरू अनुभव गर्नेछ।र शरीरका विभिन्न भागहरूमा हुने भाइरसको मात्रा फरक-फरक हुन्छ।

कोशिका प्रकारहरूको भाइरल भारको सन्दर्भमा, वायुकोशीय उपकला कोशिकाहरू (तल्लो श्वसन मार्ग)> वायुमार्ग उपकला कोशिकाहरू (माथिल्लो श्वासप्रश्वास पथ)> फाइब्रोब्लास्ट, एन्डोथेलियल कोशिकाहरू, र म्याक्रोफेजहरू, आदि;नमूना प्रकारबाट, एल्भिओलर लभेज फ्लुइड (सबैभन्दा उत्कृष्ट)>गहिरो खोकी थुक>नासोफरिन्जियल स्वाब>ओरोफरिन्जियल स्वाब>रगत।साथै, यो भाइरस मलमा पनि पत्ता लगाउन सकिन्छ।यद्यपि, शल्यक्रियाको सुविधा र बिरामीहरूको स्वीकृतिलाई ध्यानमा राख्दै, सामान्यतया प्रयोग गरिने क्लिनिकल नमूना अर्डर भनेको oropharyngeal swab>nasopharyngeal swab>bronchial lavage तरल पदार्थ (जटिल अपरेशन) र गहिरो थुक (सामान्यतया सुख्खा खोकी, प्राप्त गर्न गाह्रो) हो।

तसर्थ, केहि रोगीहरु को oropharynx वा nasopharynx को कोशिकाहरुमा भाइरस को मात्रा सानो वा धेरै कम छ।यदि oropharynx वा nasopharynx को नमूना मात्र परीक्षणको लागि लिइयो भने, भाइरल न्यूक्लिक एसिड पत्ता लाग्दैन।

(२) नमूना संकलनको क्रममा कुनै पनि भाइरस युक्त कोषहरू सङ्कलन गरिएको थिएन, वा भाइरल न्यूक्लिक एसिडलाई प्रभावकारी रूपमा सुरक्षित गरिएको थिएन।

[① अनुचित सङ्कलन साइट, उदाहरणका लागि, oropharyngeal swabs सङ्कलन गर्दा, सङ्कलन गहिराइ पर्याप्त हुँदैन, सङ्कलन nasopharyngeal swabs नाक गुहामा गहिरो जम्मा हुँदैन, आदि। सङ्कलन गरिएका अधिकांश कोशिकाहरू भाइरस-रहित कोषहरू हुन सक्छन्;

②नमूना स्वाबहरू गलत रूपमा प्रयोग गरिन्छ।उदाहरणका लागि, सिंथेटिक फाइबरहरू जस्तै PE फाइबर, पलिएस्टर फाइबर र पोलीप्रोपाइलिन फाइबरहरू स्वाब हेडको सामग्रीको लागि सिफारिस गरिन्छ।कपास जस्ता प्राकृतिक फाइबरहरू वास्तविक सञ्चालनमा प्रयोग गरिन्छ (प्रोटिनको बलियो अवशोषण र नुहाउन सजिलो छैन) र नायलन फाइबरहरू (कमजोर पानी अवशोषण, अपर्याप्त नमूनाको मात्रा)।

③भाइरस भण्डारण ट्यूबहरूको गलत प्रयोग, जस्तै न्यूक्लिक एसिड (DNA/RNA) अवशोषित गर्न सजिलो पोलीप्रोपाइलिन वा पोलिथिलीन प्लास्टिक भण्डारण ट्यूबहरूको दुरुपयोग, भण्डारण समाधानमा न्यूक्लिक एसिडको एकाग्रतामा कमीको परिणामस्वरूप।अभ्यासमा, भाइरल न्यूक्लिक एसिडहरू भण्डारण गर्न पोलिथिलीन-प्रोपाइलीन पोलिमर प्लास्टिक र केही विशेष रूपमा उपचार गरिएको पोलीप्रोपाइलीन प्लास्टिक कन्टेनरहरू प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ।]

[① अनुचित सङ्कलन साइट, उदाहरणका लागि, oropharyngeal swabs सङ्कलन गर्दा, सङ्कलन गहिराइ पर्याप्त हुँदैन, सङ्कलन nasopharyngeal swabs नाक गुहामा गहिरो जम्मा हुँदैन, आदि। सङ्कलन गरिएका अधिकांश कोशिकाहरू भाइरस-रहित कोषहरू हुन सक्छन्;

②नमूना स्वाबहरू गलत रूपमा प्रयोग गरिन्छ।उदाहरणका लागि, सिंथेटिक फाइबरहरू जस्तै PE फाइबर, पलिएस्टर फाइबर र पोलीप्रोपाइलिन फाइबरहरू स्वाब हेडको सामग्रीको लागि सिफारिस गरिन्छ।कपास जस्ता प्राकृतिक फाइबरहरू वास्तविक सञ्चालनमा प्रयोग गरिन्छ (प्रोटिनको बलियो अवशोषण र नुहाउन सजिलो छैन) र नायलन फाइबरहरू (कमजोर पानी अवशोषण, अपर्याप्त नमूनाको मात्रा)।

③भाइरस भण्डारण ट्यूबहरूको गलत प्रयोग, जस्तै न्यूक्लिक एसिड (DNA/RNA) अवशोषित गर्न सजिलो पोलीप्रोपाइलिन वा पोलिथिलीन प्लास्टिक भण्डारण ट्यूबहरूको दुरुपयोग, भण्डारण समाधानमा न्यूक्लिक एसिडको एकाग्रतामा कमीको परिणामस्वरूप।अभ्यासमा, भाइरल न्यूक्लिक एसिडहरू भण्डारण गर्न पोलिथिलीन-प्रोपाइलीन पोलिमर प्लास्टिक र केही विशेष रूपमा उपचार गरिएको पोलीप्रोपाइलीन प्लास्टिक कन्टेनरहरू प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ।]

(4) क्लिनिकल प्रयोगशाला सञ्चालन मानकीकृत छैन।नमूना ढुवानी र भण्डारण अवस्था, क्लिनिकल प्रयोगशालाहरूको मानकीकृत सञ्चालन, परिणाम व्याख्या र गुणस्तर नियन्त्रण परीक्षण परिणामहरूको शुद्धता र विश्वसनीयता सुनिश्चित गर्न प्रमुख कारकहरू हुन्।राष्ट्रिय स्वास्थ्य आयोगको क्लिनिकल प्रयोगशाला केन्द्रले मार्च १६-२४, २०२० मा गरेको बाह्य गुणस्तर मूल्याङ्कनको नतिजा अनुसार मान्य नतिजा प्राप्त गर्ने ८४४ प्रयोगशालाहरूमध्ये ७०१ (८३.१%) योग्य थिए भने १४३ (१६.९%) योग्य थिएनन्।योग्य, समग्र प्रयोगशाला परीक्षण अवस्थाहरू राम्रो छन्, तर विभिन्न प्रयोगशालाहरूमा अझै पनि कर्मचारी सञ्चालन क्षमता, एकल-लक्ष्य सकारात्मक नमूना व्याख्या क्षमता, र गुणस्तर नियन्त्रणमा भिन्नताहरू छन्।

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने गलत नकारात्मक कसरी कम गर्ने?

न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने झूटा नकारात्मकहरू घटाउने झूटा नकारात्मक उत्पादनका चार पक्षहरूबाट अनुकूलित हुनुपर्छ।

(१) संक्रमित व्यक्तिको कोषमा निश्चित मात्रामा भाइरस हुन्छ ।संदिग्ध संक्रमित व्यक्तिको शरीरका विभिन्न भागमा भाइरसको एकाग्रता फरक–फरक समयमा फरक–फरक हुन्छ ।यदि कुनै ग्रसनी छैन भने, यो ब्रोन्कियल ल्याभज फ्लुइड वा मलमा हुन सक्छ।यदि धेरै प्रकारका नमूनाहरू एकै समयमा वा परीक्षणको लागि रोग प्रगतिको विभिन्न चरणहरूमा सङ्कलन गर्न सकिन्छ भने, झूटा नकारात्मकबाट बच्न मद्दत गर्नेछ।

(२) नमूना सङ्कलन गर्दा भाइरस भएका कोषहरू सङ्कलन गर्नुपर्छ।नमूना सङ्कलनकर्ताहरूको प्रशिक्षणलाई बलियो बनाएर यो समस्या धेरै हदसम्म समाधान गर्न सकिन्छ।

(3) भरपर्दो IVD अभिकर्मकहरू।राष्ट्रिय स्तरमा अभिकर्मकहरूको पत्ता लगाउने कार्यसम्पादन मूल्याङ्कनमा अनुसन्धान गरेर, र अवस्थित समस्याहरू छलफल गरेर, अभिकर्मकहरूको पत्ता लगाउने दक्षतालाई थप सुधार गर्न सकिन्छ र विश्लेषणको संवेदनशीलता सुधार गर्न सकिन्छ।

(४) क्लिनिकल प्रयोगशालाहरूको मानकीकृत सञ्चालन।प्रयोगशाला कर्मचारीहरूको प्रशिक्षणलाई सुदृढ गर्दै, प्रयोगशाला गुणस्तर व्यवस्थापन प्रणालीलाई निरन्तर सुधार गर्दै, उचित विभाजन सुनिश्चित गर्दै, र कर्मचारीहरूको पत्ता लगाउने क्षमतामा सुधार गरेर, अनुचित प्रयोगशाला सञ्चालनका कारण झूटा नकारात्मकहरूलाई कम गर्न सम्भव छ।

निको भएका र डिस्चार्ज भएका बिरामीहरूमा SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड परीक्षणको पुन: परीक्षण सकारात्मक हुनुको कारणहरू

"COVID-19 निदान र उपचार योजना (परीक्षण सातौं संस्करण)" ले स्पष्ट रूपमा निर्दिष्ट गरेको छ कि COVID-19 बिरामीहरूलाई निको हुन र अस्पतालबाट डिस्चार्ज गर्नको लागि एक मापदण्ड भनेको लगातार दुईवटा श्वासप्रश्वास नलीको नमूनाहरूमा नेगेटिभ न्यूक्लिक एसिड परीक्षण (कम्तीमा 24 घण्टाको दूरीमा) भएको छ, तर त्यहाँ धेरै थोरै SAV-CoV-एसीडका कारणहरू धेरै कम छन्। कारणहरू।

(१) SARS-CoV-2 एउटा नयाँ भाइरस हो।यसको रोगजनक संयन्त्र, रोगको पूर्ण चित्र र रोगको पाठ्यक्रमको विशेषताहरू थप बुझ्न आवश्यक छ।त्यसैले एकातिर डिस्चार्ज भएका बिरामीको व्यवस्थापनलाई मजबुत बनाउनु र १४ दिने मेडिकल पर्यवेक्षण सञ्चालन गर्न आवश्यक छ ।रोगको घटना, विकास र परिणामको सम्पूर्ण प्रक्रियाको बुझाइलाई गहिरो बनाउन फलोअप, स्वास्थ्य अनुगमन र स्वास्थ्य निर्देशनहरू गर्नुहोस्।

(२) बिरामीलाई फेरि भाइरसको संक्रमण हुन सक्छ।शिक्षाविद् झोङ नानशानले भने: निको भएका बिरामीहरूमा एन्टिबडीहरू भएकाले, SARS-CoV-2 लाई एन्टिबडीहरूद्वारा हटाउन सकिन्छ जब तिनीहरू फेरि आक्रमण गर्छन्।त्यहाँ धेरै कारणहरू छन्, जुन निको भएका बिरामीको कारण हुन सक्छ, वा यो भाइरसको उत्परिवर्तनसँग सम्बन्धित हुन सक्छ, वा प्रयोगशाला परीक्षणको कारण पनि हुन सक्छ।यदि यो भाइरस नै हो भने, SARS-CoV-2 उत्परिवर्तनले निको भएका बिरामीले उत्पादन गरेको एन्टिबडी उत्परिवर्तित भाइरसको बिरूद्ध अप्रभावी हुन सक्छ।यदि बिरामी फेरि उत्परिवर्तित भाइरसबाट संक्रमित भएमा, न्यूक्लिक एसिड परीक्षण फेरि सकारात्मक हुन सक्छ।

(३) जहाँसम्म प्रयोगशाला परीक्षण विधिहरूको सवाल छ, प्रत्येक परीक्षण विधिको आफ्नै सीमाहरू छन्।SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने जीन अनुक्रमको छनौट, अभिकर्मकहरूको संरचना, विधिको संवेदनशीलता र अन्य कारणहरूले गर्दा अवस्थित किटहरूको आफ्नै कम पत्ता लगाउने सीमाहरू छन्।बिरामीको उपचार पछि, शरीरमा भाइरस कम हुन्छ।जब परीक्षण गरिनु पर्ने नमूनामा भाइरल लोड पत्ता लगाउने तल्लो सीमा भन्दा कम हुन्छ, "नकारात्मक" परिणाम देखा पर्नेछ।यद्यपि, यो नतिजाको मतलब यो होइन कि शरीरमा भाइरस पूर्ण रूपमा गायब भएको छ।उपचार रोकिएपछि भाइरस हुन सक्छ।पुनरुत्थान", प्रतिलिपि गर्न जारी राख्नुहोस्।त्यसैले, डिस्चार्ज पछि 2 देखि 4 हप्ता भित्र हप्तामा एक पटक समीक्षा गर्न सिफारिस गरिन्छ।

(४) न्यूक्लिक एसिड भाइरसको आनुवंशिक सामग्री हो।बिरामीले एन्टिभाइरल उपचार गरिसकेपछि भाइरस मारिन्छ, तर बाँकी भाइरल आरएनए टुक्राहरू अझै पनि मानव शरीरमा राखिन्छन्, र शरीरबाट पूर्ण रूपमा डिस्चार्ज हुँदैनन्।कहिलेकाहीँ, निश्चित परिस्थितिहरूमा, यसलाई थप राख्न सकिन्छ।लामो समय, र यस समयमा न्यूक्लिक एसिड परीक्षण "क्षणिक" सकारात्मक हुनेछ।बिरामीको रिकभरी समयको विस्तारको साथ, शरीरमा अवशिष्ट आरएनए टुक्राहरू बिस्तारै समाप्त भएपछि, न्यूक्लिक एसिड परीक्षणको नतिजा नकारात्मक हुन सक्छ।

(५) SARS-CoV-2 को न्यूक्लिक एसिड परीक्षणको नतिजाले भाइरल आरएनएको उपस्थिति वा अनुपस्थिति मात्र प्रमाणित गर्छ, र भाइरसको गतिविधि र भाइरस सर्ने छ कि छैन भनेर प्रमाणित गर्न सक्दैन।न्युक्लिक एसिड परीक्षण पोजेटिभ आएका बिरामी फेरि संक्रमणको श्रोत बन्छन् कि भनेर प्रमाणित गर्न आवश्यक छ।क्लिनिकल नमूनाहरूमा भाइरस संस्कृति चलाउन र यो संक्रामक छ भनेर प्रमाणित गर्न "लाइभ" भाइरस खेती गर्न आवश्यक छ।

सारांश

संक्षेपमा, SARS-CoV-2 nucleic acid परीक्षण गलत नकारात्मक, पुन: परीक्षण सकारात्मक, र अन्य अवस्थाहरू जुन क्लिनिकल अभिव्यक्तिहरूसँग असंगत छन् पूर्ण रूपमा बेवास्ता गर्न सकिँदैन।वास्तविक स्क्रिनिङ र परीक्षणमा, छुटेको निदान र गलत निदानलाई रोक्न व्यापक निदानको लागि क्लिनिकल लक्षणहरू, इमेजिङ परीक्षाहरू (CT) र प्रयोगशाला परीक्षणहरू (न्यूक्लिक एसिड परीक्षण + भाइरस-विशेष एन्टिबडी परीक्षण) परिणामहरू संयोजन गर्न सिफारिस गरिन्छ।यदि परीक्षण परिणामहरू क्लिनिकल अभिव्यक्तिहरूसँग स्पष्ट रूपमा असंगत पाइन्छ भने, SARS-CoV-2 भाइरसको प्रारम्भिक संक्रमण, पुनरावर्ती संक्रमण वा अन्य श्वासप्रश्वासको भाइरस संक्रमणहरू, इत्यादिको साथ संयोजन गर्न सम्पूर्ण परीक्षण लिङ्क (नमूना सङ्कलन, परिसंचरण र प्रशोधन लिङ्कहरू) को विस्तृत विश्लेषण गर्न सिफारिस गरिन्छ।यदि सर्तहरूले अनुमति दिन्छ भने, पुन: परीक्षणको लागि थुक वा एल्भिओलर ल्याभज फ्लुइड जस्ता थप संवेदनशील नमूनाहरू सङ्कलन गर्न सिफारिस गरिन्छ।

सम्बन्धित उत्पादनहरु:

SARS-CoV-2 न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउने किट (मल्टीप्लेक्स पीसीआर फ्लोरोसेन्ट प्रोब विधि)