Ⅰ. प्रतिक्रिया प्रणालीको संवेदनशीलता बढाउनुहोस्:

1. उच्च गुणस्तरको आरएनए अलग गर्नुहोस्:

सफल सीडीएनए संश्लेषण उच्च गुणस्तरको आरएनए बाट आउँछ।उच्च गुणस्तरको RNA ले कम्तिमा कुल लामो समय सुनिश्चित गर्नुपर्छ र EDTA वा SDS जस्ता रेकर्डिङ इन्जाइमहरू समावेश नगर्ने अवरोधहरू समावेश गर्दैन।RNA को गुणस्तरले तपाईंले cDNA मा ट्रान्सक्राइब गर्न सक्नुहुने अनुक्रम जानकारीको अधिकतम मूल्य निर्धारण गर्दछ।सामान्य आरएनए शुद्धिकरण विधि isoocyanate/acidophenol प्रयोग गर्ने एक चरण विधि हो।RNase को प्रदूषण रोक्नको लागि, RNase (जस्तै प्यान्क्रियाज) मा धनी नमूनाबाट अलग गरिएको RNA लाई उच्च गुणस्तरको RNA बचत गर्न फर्मल्डिहाइडको भण्डारण चाहिन्छ, जुन दीर्घकालीन भण्डारणको लागि अझ बढी हो।मुसाको कलेजोबाट निकालिएको आरएनए एक हप्ता पानीमा भण्डारण गरेपछि मूलतः घटेको थियो भने मुसाको प्लीहाबाट निकालिएको आरएनए तीन वर्षसम्म पानीमा भण्डारण गरेपछि स्थिर रह्यो।थप रूपमा, 4kb भन्दा ठूला ट्रान्सक्रिप्टहरू साना ट्रान्सक्रिप्टहरू भन्दा RNase डिग्रेडेसन ट्रेस गर्न बढी संवेदनशील हुन्छन्।भण्डारण आरएनए नमूनाको स्थिरता बढाउनको लागि, आरएनएलाई आयनको मेथाल्मामाइनमा विघटन गर्न सकिन्छ, र -70 डिग्री सेल्सियसमा भण्डारण गरिन्छ।आरएनए बचत गर्न प्रयोग गरिने थाइलाइडले आरएनएलाई घटाउने विविध वस्तुहरू समावेश गर्नु हुँदैन।प्यान्क्रियाजबाट निस्कने आरएनएलाई मेथाल्मामाइनमा कम्तीमा एक वर्षसम्म सुरक्षित गर्न सकिन्छ।जब तपाईं RNA प्रयोग गर्न तयार हुनुहुन्छ, तपाईंले RNA को प्रक्षेपण गर्न निम्न विधिहरू प्रयोग गर्न सक्नुहुन्छ: NaCl लाई ०.२ मिटर र ४ गुणा इथानोलको भोल्युममा थप्नुहोस्, कोठाको तापक्रम ३-५ मिनेटको लागि राख्नुहोस्, र १०,००० × ग्राम केन्द्रापसारक ५ मिनेटको लागि।

2. RNaseH गतिविधि बिना रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेस प्रयोग गर्नुहोस् (RNaseH-):

CDNA संश्लेषणको लम्बाइ र उपज बढाउनको लागि RNase अवरोधकहरू प्राय: उल्टो ट्रान्सक्रिप्शन प्रतिक्रियाहरूमा थपिन्छन्।RNase अवरोधक पहिलो चेन संश्लेषण प्रतिक्रियामा बफरहरू र DTT जस्ता घटाउने एजेन्टहरूको उपस्थितिमा थपिएको छ किनभने पूर्व-cDNA संश्लेषण प्रक्रियाले अवरोधकलाई खण्डन गर्छ, जसले RNA घटाउने बाउन्ड RNases रिलिज गर्छ।प्रोटिन RNase अवरोधकले RNase A, B, C द्वारा RNA को पतन मात्र रोक्छ, र छालामा RNases लाई रोक्दैन, त्यसैले यी अवरोधकहरूको प्रयोगको बाबजुद औंलाहरूबाट RNases परिचय नगर्न सावधानी अपनाउनुपर्छ।

रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेजले आरएनएलाई सीडीएनएमा रूपान्तरण गर्न उत्प्रेरित गर्छ।M-MLV र AMV दुबैको आफ्नै पोलिमरेज गतिविधिको अतिरिक्त अन्तर्जात RNaseH गतिविधि छ।RNaseH गतिविधिले RNA टेम्प्लेटहरू र DNA प्राइमरहरू वा cDNA एक्सटेन्सन स्ट्र्यान्डहरू बीच बनाइएका हेटरोजाइगस स्ट्र्यान्डहरूको लागि पोलिमरेज गतिविधिसँग प्रतिस्पर्धा गर्छ, र RNA: RNA स्ट्र्यान्डहरू DNA परिसरहरूमा घटाउँछ।RNaseH गतिविधि द्वारा अपमानित RNA टेम्प्लेटहरू अब cDNA संश्लेषणको लागि प्रभावकारी सब्सट्रेटको रूपमा प्रयोग गर्न सकिँदैन, cDNA संश्लेषणको उपज र लम्बाइ घटाउँछ।यसरी रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेजको RNaseH गतिविधिलाई हटाउन वा धेरै कम गर्नु ठूलो फाइदाको हुनेछ।

SuperScriptⅡ रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज, RNaseH को MMLV रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज- र थर्मोस्क्रिप्ट रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज, RNaseH को AMV- MMLV र AMV भन्दा बढी पूर्ण-लम्बाइ cDNA उत्पन्न भयो।RT-PCR संवेदनशीलता cDNA संश्लेषित को मात्रा द्वारा प्रभावित छ।ThermoScript AMV भन्दा धेरै संवेदनशील छ।RT-PCR उत्पादनहरूको आकार सीडीएनए संश्लेषण गर्न रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेजको क्षमताद्वारा सीमित हुन्छ, विशेष गरी ठूला Cdnas क्लोनिङ गर्दा।MMLV सँग तुलना गर्दा, SuperScripⅡ ले लामो RT-PCR उत्पादनहरूको उपजमा उल्लेखनीय वृद्धि गरेको छ।RNaseH-को रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेजले पनि थर्मल स्थिरता बढाउँछ, त्यसैले प्रतिक्रिया 37-42 ℃ को सामान्य भन्दा बढी तापक्रममा गर्न सकिन्छ।सुझाव गरिएका संश्लेषण अवस्थाहरू अन्तर्गत, oligo(dT) प्राइमरहरू र 10μCi [alpha-p]dCTP प्रयोग गरियो।पहिलो चेनको कुल उत्पादन TCA वर्षा विधि प्रयोग गरेर गणना गरिएको थियो।पूर्ण-लम्बाइ cDNA साइज-क्रमबद्ध पट्टी हटाउने र क्षारीय agarose जेलमा गणना प्रयोग गरेर विश्लेषण गरिएको थियो।

3. रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनको गर्मी संरक्षण तापमान बढाउनुहोस्:

उच्च होल्डिंग तापमानले आरएनएको माध्यमिक संरचना खोल्न र प्रतिक्रियाको उपज बढाउन मद्दत गर्दछ।धेरैजसो RNA टेम्प्लेटहरूका लागि, RNA र प्राइमरलाई 65°C मा बफर वा नुन बिना समातेर बरफमा छिट्टै चिसो पार्नाले अधिकांश माध्यमिक संरचनाहरू हटाउँछ र प्राइमरहरूलाई बाँध्न अनुमति दिन्छ।यद्यपि, केही टेम्प्लेटहरूमा थर्मल विकृतीकरण पछि पनि माध्यमिक संरचना छ।यी कठिन टेम्प्लेटहरूको एम्प्लिफिकेशन थर्मोस्क्रिप्ट रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेस प्रयोग गरेर र प्रवर्धन सुधार गर्न उच्च तापमानमा रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेस प्रतिक्रिया राखेर प्रदर्शन गर्न सकिन्छ।उच्च होल्डिंग तापमानले पनि विशिष्टता बढाउन सक्छ, विशेष गरी जब सीडीएनए संश्लेषण जीन-विशिष्ट प्राइमरहरू (GSPS) प्रयोग गरी गरिन्छ (अध्याय 3 हेर्नुहोस्)।यदि GSP प्रयोग गर्दै हुनुहुन्छ भने, सुनिश्चित गर्नुहोस् कि प्राइमरको Tm मान अपेक्षित होल्डिंग तापमान जस्तै हो।60 ℃ माथि oligo(dT) र अनियमित प्राइमरहरू प्रयोग नगर्नुहोस्।यादृच्छिक प्राइमरहरू 60 ℃ मा बढाउनु अघि 10 मिनेटको लागि 25 ℃ मा राख्नुपर्छ।उच्च रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन तापक्रम प्रयोग गर्नुको अतिरिक्त, RNA/प्राइमर मिश्रणलाई 65℃ denaturing तापमानबाट रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन होल्डिङ तापक्रममा सिधै स्थानान्तरण गरेर र प्रिहेटेड 2× प्रतिक्रिया मिश्रण (cDNA थर्मल इनिशिएशन सिंथेसिस) थपेर विशिष्टता सुधार गर्न सकिन्छ।यस दृष्टिकोणले कम तापमानमा हुने अन्तरआणविक आधार जोडीलाई रोक्न मद्दत गर्दछ।PCR उपकरणको प्रयोगले RT-PCR को लागि आवश्यक धेरै तापक्रम स्विचहरूलाई सरल बनाउँछ।

Tth ताप स्थिर पोलिमरेजले Mg2+ को उपस्थितिमा DNA पोलिमरेज र Mn2+ को उपस्थितिमा RNA पोलिमरेजको रूपमा कार्य गर्दछ।यसले 65 ℃ सम्म तातो राख्न सक्छ।यद्यपि, PCR को समयमा Mn2+ को उपस्थितिले निष्ठा कम गर्छ, जसले Tth पोलिमरेजलाई उच्च परिशुद्धता प्रवर्द्धन, जस्तै cDNA क्लोनिङको लागि कम उपयुक्त बनाउँछ।थप रूपमा, Tth रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनमा कम कुशल छ, जसले संवेदनशीलता कम गर्दछ, र एकल इन्जाइमले रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन र PCR गर्न सक्ने हुनाले, रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सन बिना नियन्त्रण प्रतिक्रियाहरू दूषित जीनोमिक डीएनएका उत्पादनहरूबाट cDNA को एम्प्लीफाइड उत्पादनहरू छुट्याउन प्रयोग गर्न सकिँदैन।

4. रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनलाई बढावा दिने additive:

पहिलो चेन संश्लेषण प्रतिक्रियामा ग्लिसरीन र DMSO सहित additives को थपले न्यूक्लिक एसिड डबल स्ट्र्यान्डको स्थिरता कम गर्न र आरएनए माध्यमिक संरचनालाई खोल्न सक्छ।SuperScriptⅡ वा MMLV को गतिविधिलाई असर नगरी 20% ग्लिसरीन वा 10% DMSO सम्म थप्न सकिन्छ।AMV ले गतिविधि कम नगरी 20% ग्लिसरोल सम्म पनि सहन सक्छ।SuperScriptⅡ रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रतिक्रियामा RT-PCR को संवेदनशीलता अधिकतम बनाउन, 10% ग्लिसरोल थप्न सकिन्छ र 45℃ मा इन्सुलेट गर्न सकिन्छ।यदि PCR मा रेट्रोट्रान्सक्रिप्शन-प्रतिक्रिया उत्पादनको 1/10 थपियो भने, एम्प्लीफिकेशन प्रतिक्रियामा ग्लिसरोलको एकाग्रता 0.4% हुन्छ, जुन PCR लाई रोक्न पर्याप्त छैन।

5. RNaseH प्रशोधन:

PCR भन्दा पहिले RNaseH सँग cDNA संश्लेषण प्रतिक्रियाहरूको उपचार गरेर संवेदनशीलता सुधार गर्न सकिन्छ।केही टेम्प्लेटहरूको लागि, यो सोचिएको छ कि सीडीएनए संश्लेषण प्रतिक्रियामा आरएनएले एम्प्लीफाइड उत्पादनहरूको बन्धनलाई रोक्छ, जसमा RNaseH उपचारले संवेदनशीलता बढाउन सक्छ।सामान्यतया, RNaseH उपचार अपेक्षाकृत लामो पूर्ण-लम्बाइको cDNA लक्ष्य टेम्प्लेटको प्रवर्धनको लागि आवश्यक हुन्छ, जस्तै ट्युबरस सेरोसिसⅡ कम प्रतिलिपिको साथ।यो कठिन टेम्प्लेटको लागि, RNaseH ले सुपरस्क्रिप्टⅡ वा AMV द्वारा संश्लेषित cDNA द्वारा उत्पन्न संकेतलाई बढायो।धेरै जसो RT-PCR प्रतिक्रियाहरूको लागि, RNaseH उपचार वैकल्पिक छ किनभने 95 ℃ इन्सुलेटेड PCR विकृतीकरण चरणले सामान्यतया RNA: DNA जटिलबाट RNA लाई हाइड्रोलाइज गर्छ।

6. आरएनए को सानो मात्रा पत्ता लगाउन को लागी सुधारिएको विधिहरु:

आरएनएको थोरै मात्रा मात्र उपलब्ध हुँदा RT-PCR विशेष गरी चुनौतीपूर्ण हुन्छ।आरएनए विभाजनको समयमा वाहकको रूपमा ग्लाइकोजन थप्दा साना नमूनाहरूको उत्पादन बढाउन मद्दत गर्दछ।एक RNase-मुक्त ग्लाइकोजेन Trizol को रूपमा एकै समयमा थप्न सकिन्छ।ग्लाइकोजेन पानीमा घुलनशील छ र त्यसपछिको वर्षामा मद्दत गर्न आरएनएको साथ पानीको चरणमा रहन सक्छ।RNase-मुक्त ग्लाइकोजनको सिफारिस गरिएको एकाग्रता 50mg भन्दा कम तन्तु वा 106 संवर्धित कक्षहरूको लागि 250μg/ml हो।

SuperScriptⅡ को प्रयोग गरेर ट्रान्सक्रिप्शन प्रतिक्रियाहरू उल्टो गर्न एसिटिलेटेड BSA थप गर्नाले संवेदनशीलता बढाउन सक्छ, र थोरै मात्रामा RNA को लागि, SuperScriptⅡ को मात्रा घटाएर र RnaseOut nuclease inhibitor को 40 इकाइहरू थपेर पत्ता लगाउने स्तर सुधार गर्न सक्छ।यदि Glycogen RNA पृथकीकरणमा प्रयोग गरिएको छ भने, SuperScriptⅡ को प्रयोग गरेर ट्रान्सक्रिप्शन प्रतिक्रियाहरू उल्टाउन BSA वा RNase अवरोधकहरू थप्न सिफारिस गरिन्छ।

Ⅱ. RT-PCR को विशिष्टता बढाउनुहोस्

1. cNDA संश्लेषण:

पहिलो स्ट्र्यान्ड cDNA संश्लेषण प्रारम्भ गर्न तीन फरक विधिहरू प्रयोग गर्न सकिन्छ, र प्रत्येक विधिको सापेक्ष विशिष्टताले cDNA संश्लेषणको मात्रा र प्रकारलाई असर गर्छ।

अनियमित प्राइमर विधि तीनवटा विधिहरूमध्ये सबैभन्दा कम विशिष्ट हो।छोटो, आंशिक लम्बाइ cDNA उत्पादन गर्न ट्रान्सक्रिप्ट भरि धेरै साइटहरूमा प्राइमरहरू एनेल गरिएका छन्।यो विधि प्रायः 5′ टर्मिनल अनुक्रमहरू र सीडीएनए प्राप्त गर्न प्रयोग गरिन्छ RNA टेम्प्लेटहरू माध्यमिक संरचनात्मक क्षेत्रहरू वा रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज नक्कल गर्न नसक्ने साइटहरूसँग।सबैभन्दा लामो cDNA प्राप्त गर्न, प्रत्येक RNA नमूनामा प्राइमरको RNA र प्राइमरीको अनुपात अनुभवात्मक रूपमा निर्धारण गर्न आवश्यक छ।अनियमित प्राइमरहरूको प्रारम्भिक एकाग्रता 50 देखि 250ng प्रति 20μl प्रतिक्रिया प्रणालीमा हुन्छ।किनभने अनियमित प्राइमरहरू प्रयोग गरेर कुल RNA बाट संश्लेषित cDNA मुख्यतया ribosomal RNA हो, Poly(A)+RNA लाई सामान्यतया टेम्प्लेटको रूपमा चयन गरिन्छ।

ओलिगो (डीटी) प्रारम्भ अनियमित प्राइमरहरू भन्दा बढी विशिष्ट छ।यो धेरै युकेरियोटिक कोशिकाहरूमा mRNA को 3′ छेउमा पाइने पोली(A) पुच्छरसँग हाइब्रिडाइज हुन्छ।पोली(ए)+आरएनए कुल आरएनएको लगभग 1% देखि 2% भएको हुनाले, सीडीएनएको मात्रा र जटिलता अनियमित प्राइमरहरू प्रयोग गरिएको भन्दा धेरै कम हुन्छ।यसको उच्च विशिष्टताको कारण, oligo(dT) लाई सामान्यतया RNA देखि प्राइमर अनुपात र Poly(A)+ चयनको लागि अनुकूलन आवश्यक पर्दैन।यो 0.5μg oligo(dT) प्रति 20μl प्रतिक्रिया प्रणाली प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ।oligo(dT)12-18 धेरैजसो RT-PCR को लागि उपयुक्त छ।ThermoScript RT-PCR प्रणालीले oligo(dT)20 प्रदान गर्दछ किनभने यसको राम्रो थर्मल स्थिरता र उच्च होल्डिंग तापमानको लागि उपयुक्त छ।

जीन-विशिष्ट प्राइमरहरू (GSP) उल्टो ट्रान्सक्रिप्शन चरणको लागि उत्तम विशिष्ट प्राइमरहरू हुन्।GSP एक एन्टिसेन्स ओलिगोन्यूक्लियोसाइड हो जसले RNA गन्तव्य अनुक्रमहरूसँग विशेष रूपमा हाइब्रिडाइज गर्न सक्छ, सबै Rnas जस्तै अनियमित प्राइमरहरू वा ओलिगो(dT) लाई एनाल गर्नुको सट्टा।PCR प्राइमरहरू डिजाइन गर्न प्रयोग गरिएका नियमहरू रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रतिक्रिया GSP को डिजाइनमा पनि लागू हुन्छन्।GSP mRNA3′ को अन्त्यमा एनेल गरिएको एम्प्लीफिकेशन प्राइमर जस्तै अनुक्रम हुन सक्छ, वा GSP लाई रिभर्स एम्प्लिफिकेशन प्राइमरको साथ डाउनस्ट्रीम एनेल गर्न डिजाइन गर्न सकिन्छ।केही एम्प्लीफाइड वस्तुहरूको लागि, सफल RT-PCR को लागि एक भन्दा बढी एन्टिसेन्स प्राइमर डिजाइन गर्न आवश्यक छ किनभने लक्षित RNA को माध्यमिक संरचनाले प्राइमरलाई बाइन्ड गर्नबाट रोक्न सक्छ।20μl को पहिलो चेन संश्लेषण प्रतिक्रिया प्रणालीमा 1pmol antisense GSP प्रयोग गर्न सुझाव दिइएको छ।

2. रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनको गर्मी संरक्षण तापमान बढाउनुहोस्:

GSP विशिष्टताको पूर्ण लाभ लिनको लागि, उच्च थर्मल स्थिरताको साथ रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेस प्रयोग गरिनुपर्छ।ताप-स्थिर रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेजलाई प्रतिक्रिया कठोरता बढाउन उच्च तापमानमा इन्सुलेटेड गर्न सकिन्छ।उदाहरणका लागि, यदि GSP 55°C मा annealed छ भने, AMV वा M-MLV प्रयोग गरेर कम कठोरताको साथ 37°C मा रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सन गरिन्छ भने GSP को विशिष्टता पूर्ण रूपमा प्रयोग हुँदैन।यद्यपि, SuperScripⅡ र ThermoScript ले 50℃ वा उच्चमा प्रतिक्रिया दिन सक्छ, जसले कम तापक्रममा उत्पादित गैर-विशिष्ट उत्पादनहरूलाई हटाउँछ।अधिकतम विशिष्टताको लागि, आरएनए/प्राइमर मिश्रणलाई 65 ℃ डिनेच्युरेसन तापमानबाट प्रीहेटेड 2 x प्रतिक्रिया मिश्रण (cDNA संश्लेषणको थर्मल प्रारम्भ) थपेर रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन होल्डिङ तापमानमा सिधै स्थानान्तरण गर्न सकिन्छ।यसले कम तापमानमा अणुहरू बीच आधार जोडी रोक्न मद्दत गर्दछ।PCR उपकरणको प्रयोगले RT-PCR को लागि आवश्यक धेरै तापक्रम ट्रान्जिसनहरूलाई सरल बनाउँछ।

3. जीनोमिक डीएनए प्रदूषण घटाउनुहोस्:

RT-PCR सँगको एउटा सम्भावित कठिनाई भनेको आरएनएले जीनोमिक डीएनएलाई दूषित गर्छ।Trizol Reagent जस्ता राम्रो RNA पृथकीकरण विधिहरूको प्रयोगले RNA तयारीहरूमा जीनोमिक DNA प्रदूषण कम गर्छ।जीनोमिक DNA बाट उत्पादित उत्पादनहरूबाट बच्न, RNA लाई रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सन अघि दूषित DNA हटाउन एम्प्लीफिकेशन ग्रेड DnasⅠ सँग उपचार गर्न सकिन्छ।नमूनाहरू DNaseⅠ पाचन समाप्त गर्न 10 मिनेटको लागि 2.0mM EDTA मा 65℃ मा राखिएको थियो।उच्च तापक्रममा हुने म्याग्नेसियम आयनमा निर्भर आरएनए हाइड्रोलाइसिसलाई रोक्नको लागि EDTA ले म्याग्नेसियम आयनहरूलाई चेलेट गर्छ।

जीनोम डीएनए एम्प्लीफिकेशन उत्पादनबाट एम्प्लीफाइड सीडीएनए अलग गर्न, छुट्याइएको एक्सोनसँग छुट्टै एनाल गर्ने प्राइमरहरू डिजाइन गर्न सकिन्छ।cDNA बाट व्युत्पन्न PCR उत्पादनहरू दूषित जीनोमिक DNA बाट व्युत्पन्न भन्दा छोटो हुनेछ।उल्टो ट्रान्सक्रिप्शन बिना एक नियन्त्रित प्रयोग पनि प्रत्येक आरएनए टेम्प्लेटमा प्रदर्शन गरिन्छ कि दिइएको टुक्रा जीनोमिक DNA वा cDNA बाट हो कि भनेर निर्धारण गर्न।रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शनको अभावमा प्राप्त पीसीआर उत्पादनहरू जीनोमबाट व्युत्पन्न हुन्छन्।

सम्बन्धित उत्पादन

RT-PCR सजिलो^ᵀᴹम (एक कदम)

-एक-चरण किटले रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सन र PCR लाई एउटै ट्यूबमा गर्न सक्षम बनाउँछ।यसले टेम्प्लेट RNA, विशिष्ट PCR प्राइमरहरू र RNase-Free ddH मात्र थप्न आवश्यक छ₂O.

RNA को वास्तविक-समय मात्रात्मक विश्लेषण छिटो र सही रूपमा गर्न सकिन्छ।

- किटले प्रवर्द्धन दक्षता र प्रतिक्रियाको विशिष्टतालाई प्रभावकारी रूपमा सुधार गर्नको लागि एक अद्वितीय फोरजीन रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन अभिकर्मक र Foregene HotStar Taq DNA पोलिमरेज प्रयोग गर्दछ।

-अनुकूलित प्रतिक्रिया प्रणालीले प्रतिक्रियालाई उच्च पत्ता लगाउने संवेदनशीलता, बलियो थर्मल स्थिरता, र राम्रो सहनशीलता बनाउँछ।

RT Easy II (GDNase सँग) मास्टर प्रिमिक्स GDNase सँग रियल टाइम PCR को लागि पहिलो-स्ट्र्यान्ड CDNA संश्लेषणको लागि

- gDNA हटाउने कुशल क्षमता, जसले 2 मिनेट भित्र टेम्प्लेटमा gDNA हटाउन सक्छ।

-कुशल रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणाली, यसले पहिलो स्ट्र्यान्ड cDNA को संश्लेषण पूरा गर्न 15 मिनेट मात्र लिन्छ।

-जटिल टेम्प्लेटहरू: उच्च GC सामग्री र जटिल माध्यमिक संरचना भएका टेम्प्लेटहरू पनि उच्च दक्षताका साथ उल्टाउन सकिन्छ।

-उच्च-संवेदनशीलता रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणाली, pg-स्तर टेम्प्लेटहरूले पनि उच्च-गुणस्तरको cDNA प्राप्त गर्न सक्छ।

-रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रणालीमा उच्च थर्मल स्थिरता छ, इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान 42 ℃ छ, र यो अझै पनि 50 ℃ मा राम्रो रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रदर्शन छ।