समस्या विश्लेषण गाइड

भाइरल DNA/RNA को निकासीमा सामना गर्न सक्ने समस्याहरूको विश्लेषण निम्न छ, तपाईंको प्रयोगहरूमा सहयोगी हुने आशा राख्दै।थप रूपमा, सञ्चालन निर्देशनहरू र समस्या विश्लेषण बाहेक अन्य प्रयोगात्मक वा प्राविधिक समस्याहरूको लागि, हामीले तपाईंलाई मद्दत गर्न प्राविधिक समर्थन समर्पित गरेका छौं।यदि तपाइँसँग कुनै आवश्यकता छ भने, कृपया हामीलाई सम्पर्क गर्नुहोस्: 028-83360257 वा इ-मेल:

Tech@foregene.com.

कुनै न्यूक्लिक एसिड निकासी वा कम न्यूक्लिक एसिड उपज

त्यहाँ सामान्यतया धेरै कारकहरू छन् जसले रिकभरी दक्षतालाई असर गर्छ, जस्तै: नमूना न्यूक्लिक एसिड सामग्री, सञ्चालन विधि, इलुसन भोल्युम, आदि।

सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:

1. प्रक्रियाको क्रममा आइस बाथ वा कम तापक्रम (4°C) सेन्ट्रीफ्युगेशन गरिएको थियो।

सुझाव: सम्पूर्ण प्रक्रियामा कोठाको तापक्रम (१५-२५ डिग्री सेल्सियस) मा काम गर्नुहोस्, आइस बाथ र कम तापक्रम सेन्ट्रीफ्युगेसन नगर्नुहोस्।

2. नमूना अनुचित रूपमा भण्डारण गरिएको थियो वा नमूना धेरै लामो समयको लागि भण्डारण गरिएको थियो।

सिफारिस: नमूनाहरू -80 डिग्री सेल्सियसमा भण्डार गर्नुहोस् र बारम्बार चिसो र पग्लनबाट जोगिन;न्यूक्लिक एसिड निकासीका लागि भर्खरै सङ्कलन गरिएका नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।

3. अपर्याप्त नमूना lysis।

सिफारिस: कृपया सुनिश्चित गर्नुहोस् कि नमूना र लिसिस कार्य गर्ने समाधान राम्ररी मिसाइएको छ र कोठाको तापक्रम (15-25 डिग्री सेल्सियस) मा 10 मिनेटको लागि इन्क्युबेटेड छ।

4. एल्युएन्ट को गलत थप।

सुझाव: RNase-Free ddH2O शुद्धिकरण स्तम्भ झिल्लीको बीचमा ड्रपवाइजमा थपिएको सुनिश्चित गर्नुहोस्, र यसलाई शुद्धिकरण स्तम्भको घण्टीमा नछोड्नुहोस्।

5. निरपेक्ष इथेनॉलको सही मात्रा बफर RW2 मा थपिएको थिएन।

सुझाव: कृपया निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्, Buffer RW2 मा निरपेक्ष इथानोलको सही भोल्युम थप्नुहोस् र किट प्रयोग गर्नु अघि राम्ररी मिलाउनुहोस्।

6. अनुपयुक्त नमूना मात्रा।

सुझाव: 200µl नमूना प्रत्येक 500µl बफर DRL को लागि प्रशोधन गरिन्छ।अत्यधिक नमूना प्रशोधनले न्यूक्लिक एसिड निकासी उपज कम गर्नेछ।

7. अनुपयुक्त इल्युसन भोल्युम वा अपूर्ण उत्सर्जन।

सिफारिस: शुद्धिकरण स्तम्भको एल्युएन्ट भोल्युम 30-50μl छ;यदि इल्युसन प्रभाव सन्तोषजनक छैन भने, पूर्व तताइएको RNase-Free ddH2O, जस्तै 5-10 मिनेट थपेपछि कोठाको तापक्रममा समय बढाउन सिफारिस गरिन्छ।

8. बफर RW2 बाट धोएपछि स्तम्भमा इथानोल रहन्छ।

सुझाव: यदि इथानोल बफर RW2 सँग सेन्ट्रीफ्यूगेशन पछि २ मिनेटको लागि रह्यो भने, अवशिष्ट इथानोल पूर्ण रूपमा हटाउन सेन्ट्रीफ्युगेशन पछि 5 मिनेटको लागि स्तम्भ कोठाको तापक्रममा राख्न सकिन्छ।

शुद्ध न्यूक्लिक एसिड घटाइन्छ

शुद्ध न्यूक्लिक एसिडको गुणस्तर नमूनाको संरक्षण, RNase प्रदूषण, सञ्चालन र अन्य कारकहरूसँग सम्बन्धित छ।सामान्य कारणहरूको विश्लेषण:

1. संकलन गरिएका नमूनाहरू समयमा भण्डारण गरिएको थिएन।

सुझाव: यदि नमूना संकलन पछि समय मा प्रयोग गरिएन भने, कृपया यसलाई तुरुन्तै कम तापमान मा -80 डिग्री सेल्सियस मा भण्डारण गर्नुहोस्।आरएनए निकासीको लागि, ताजा सङ्कलन नमूनाहरू प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।

2. नमूनाहरू सङ्कलन गर्नुहोस् र फ्रिज गर्नुहोस् र बारम्बार पग्लनुहोस्।

सुझाव: नमूनाहरू सङ्कलन र भण्डारणको क्रममा चिसो र पग्लन (एक पटक भन्दा बढी होइन) बेवास्ता गर्नुहोस्, अन्यथा न्यूक्लिक एसिड उपज कम हुनेछ।

3. RNase अपरेशन रुममा लगाइन्छ वा डिस्पोजेबल पन्जा, मास्क, आदि लगाइँदैन।

सिफारिस: आरएनए निकासी प्रयोगहरू छुट्टै आरएनए सञ्चालन कोठामा राम्रोसँग गरिन्छ, र प्रयोग गर्नु अघि प्रयोगशाला तालिका सफा गरिनुपर्छ।

प्रयोगको क्रममा डिस्पोजेबल ग्लोभ्स र मास्क लगाउनुहोस् RNA को गिरावटबाट बच्नको लागि RNase को परिचयले सबैभन्दा ठूलो हदसम्म।

4. प्रयोग गर्दा अभिकर्मक RNase संग दूषित थियो।

सिफारिस: सम्बन्धित प्रयोगहरूको लागि नयाँ भाइरल DNA/RNA आइसोलेशन किटसँग बदल्नुहोस्।

5. RNA हेरफेरको लागि प्रयोग हुने सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू र पिपेट टिपहरू RNase बाट दूषित छन्।

सुझाव: आरएनए निकासीका लागि प्रयोग गरिने सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, पिपेट टिप्स, पिपेटहरू, आदि सबै RNase-मुक्त छन् भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।

शुद्ध न्यूक्लिक एसिडले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूलाई असर गर्छ

DNA र RNA शुद्धीकरण स्तम्भ द्वारा शुद्ध, यदि नुन आयन र प्रोटीन सामग्री धेरै उच्च छ भने, यसले डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूलाई असर गर्छ, जस्तै: PCR प्रवर्द्धन, रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन, आदि।

1. एल्युटेड DNA र RNA मा अवशिष्ट नुन आयनहरू छन्।

सुझाव: बफर RW2 मा निरपेक्ष इथानोलको सही भोल्युम थपिएको छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्, र सञ्चालन निर्देशनहरूमा तोकिएको सेन्ट्रीफ्युगेसन गतिमा शुद्धीकरण स्तम्भ दुई पटक धुनुहोस्;नुन आयन प्रदूषण कम गर्न सेन्ट्रीफ्यूगेशन प्रदर्शन गर्नुहोस्।

२. एल्युटेड डीएनए र आरएनएमा इथानोल अवशेषहरू हुन्छन्।

सुझाव: बफर RW2 सँग धुने पुष्टि गरेपछि, सञ्चालन निर्देशनहरूमा सेन्ट्रीफ्यूगेसन गतिमा खाली ट्यूब सेन्ट्रीफ्यूगेसन गर्नुहोस्;यदि त्यहाँ अझै पनि इथानोल अवशेष छ भने, तपाईले खाली ट्यूबलाई सेन्ट्रीफ्यूज गर्न सक्नुहुन्छ र त्यसपछि 5 मिनेटको लागि कोठाको तापक्रममा इथानोलको अवशेषलाई अधिकतम हदसम्म हटाउन सक्नुहुन्छ।

निर्देशन पुस्तिकाहरू:

भाइरल डीएनए र आरएनए अलगाव किट निर्देशन पुस्तिका