• फेसबुक
  • linkedin
  • youtube

मेरो दिमागमा पत्ता लगाउने प्रविधिको इतिहासमा धेरै क्रान्तिकारी आविष्कारहरू एन्टिजेन-एन्टिबडी विशिष्ट बाइन्डिङ, पीसीआर प्रविधि र सिक्वेन्सिङ प्रविधिको सिद्धान्तमा आधारित इम्युनोलेबलिङ प्रविधि हुन्।आज हामी PCR प्रविधिको बारेमा कुरा गर्नेछौं।PCR टेक्नोलोजीको विकासका अनुसार, मानिसहरूले बानीमा पीसीआर प्रविधिलाई तीन पुस्तामा विभाजन गर्छन्: साधारण पीसीआर प्रविधि, वास्तविक समय फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक पीसीआर प्रविधि र डिजिटल पीसीआर प्रविधि।

Common PCR प्रविधि

w1

KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)

क्यारी मुलिसले 1983 मा पोलिमरेज चेन रियाक्सन (पोलिमरेज चेन रियाक्सन, पीसीआर) आविष्कार गरे। भनिन्छ कि उनी आफ्नी प्रेमिकालाई ड्राइभ गर्दै गर्दा अचानक उनको प्रेरणाको फ्ल्याश भयो र पीसीआरको सिद्धान्त (ड्राइभिङका फाइदाहरूमा) बारे सोच्यो।क्यारी मुलिसलाई 1993 मा रसायनशास्त्रमा नोबेल पुरस्कार प्रदान गरिएको थियो। न्यु योर्क टाइम्सले टिप्पणी गर्यो: "अत्यन्त मौलिक र महत्त्वपूर्ण, लगभग जीवविज्ञानलाई पूर्व-पीसीआर र पोस्ट-पीसीआर युगहरूमा विभाजित गर्दै।

PCR को सिद्धान्त: DNA पोलिमरेजको उत्प्रेरक अन्तर्गत, मदर स्ट्र्यान्ड DNA टेम्प्लेटको रूपमा प्रयोग गरिन्छ, र विशिष्ट प्राइमर विस्तारको सुरूवात बिन्दुको रूपमा प्रयोग गरिन्छ, र मदर स्ट्र्यान्ड टेम्प्लेट DNA को पूरक छोरी स्ट्र्यान्ड DNA लाई डिनेचुरेसन, एनेलिङ, एक्सटेन्सन र अन्य चरणहरू मार्फत भिट्रोमा प्रतिलिपि गरिन्छ।यो भिट्रोमा DNA संश्लेषण प्रवर्धन प्रविधि हो, जसले छिटो र विशेष रूपमा भिट्रोमा कुनै पनि लक्षित DNA विस्तार गर्न सक्छ।

w2

साधारण PCR को फाइदा
1.क्लासिक विधि, पूर्ण अन्तर्राष्ट्रिय र घरेलु मापदण्डहरू
2.साधन अभिकर्मक को कम लागत
3.PCR उत्पादनहरू अन्य आणविक जीवविज्ञान प्रयोगहरूको लागि पुन: प्राप्त गर्न सकिन्छ
सिफारिस गरिएको फोरजीन पीसीआर मेसिन: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
सम्बन्धित उत्पादनहरू: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
साधारण PCR को बेफाइदाहरू
1.प्रदूषित गर्न सजिलो
2.झन्झट सञ्चालन
3.केवल गुणात्मक विश्लेषण
4.मध्यम संवेदनशीलता
5.त्यहाँ गैर-विशिष्ट प्रवर्धन छ, र जब गैर-विशिष्ट ब्यान्ड लक्ष्य ब्यान्डको रूपमा समान आकारको हुन्छ, यसलाई छुट्याउन सकिँदैन।
 
Cएपिलरी इलेक्ट्रोफोरेसिस आधारित पीसीआर
सामान्य PCR को कमजोरीहरूको प्रतिक्रियामा, केही निर्माताहरूले केशिका इलेक्ट्रोफोरेसिसको सिद्धान्तमा आधारित उपकरणहरू प्रस्तुत गरेका छन्।केशिकामा PCR प्रवर्धन पूरा भएपछि इलेक्ट्रोफोरेसिस चरण।संवेदनशीलता उच्च छ, र धेरै आधारहरूको भिन्नता छुट्याउन सकिन्छ र प्रवर्धन MAERKER द्वारा गणना गर्न सकिन्छ।उत्पादन सामग्री।बेफाइदा यो हो कि PCR उत्पादन अझै पनि खोल्न र उपकरणमा राख्न आवश्यक छ, र अझै पनि प्रदूषणको ठूलो जोखिम छ।

w3

CएपिलरीEलेक्टोफोरेसिस

 

2. वास्तविक समय फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक PCR (मात्रात्मक वास्तविक समय PCR, qPCR) प्रविधिफ्लोरोसेन्ट परिमाणात्मक PCR, जसलाई रियल-टाइम PCR पनि भनिन्छ, PE (Perkin Elmer) द्वारा 1995 मा विकसित गरिएको नयाँ न्यूक्लिक एसिड मात्रात्मक प्रविधि हो। फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक PCR को विकास इतिहास ABI, Roche, र Bio-IR जस्ता दिग्गजहरूको आत्मा-उत्तेजक संघर्षको इतिहास हो।यदि तपाइँ इच्छुक हुनुहुन्छ भने, तपाइँ यसलाई जाँच गर्न सक्नुहुन्छ।यो प्रविधि हाल सबैभन्दा परिपक्व र व्यापक रूपमा प्रयोग हुने अर्ध-परिमाणात्मक पीसीआर प्रविधि हो।

सिफारिस गरिएको qPCR मेसिन: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/

फ्लोरोसेन्ट डाई विधि (SYBR ग्रीन I):SYBR ग्रीन I मात्रात्मक PCR को लागि सबैभन्दा सामान्य रूपमा प्रयोग हुने DNA-बाइंडिंग डाई हो, जसले गैर-विशेष रूपमा डबल-स्ट्र्यान्ड DNA मा बाँध्छ।फ्री स्टेटमा, SYBR ग्रीनले कमजोर फ्लोरोसेन्स उत्सर्जन गर्दछ, तर एक पटक डबल-स्ट्र्यान्ड डीएनएमा बाँधिएपछि, यसको फ्लोरोसेन्स 1000-गुना बढ्छ।तसर्थ, प्रतिक्रिया द्वारा उत्सर्जित कुल फ्लोरोसेन्ट संकेत वर्तमान डबल-स्ट्र्यान्ड डीएनए को मात्रा को समानुपातिक छ र एम्प्लीफाइड उत्पादन को वृद्धि संग वृद्धि हुनेछ।डाईले गैर-विशेष रूपमा डबल-स्ट्र्यान्ड डीएनएमा बाँधिएको हुनाले, गलत सकारात्मक परिणामहरू उत्पन्न हुन सक्छ।

सम्बन्धित उत्पादनहरू: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/

फ्लोरोसेन्ट प्रोब विधि (Takman प्रविधि): समयमाPCR प्रवर्धन, एक विशेष फ्लोरोसेन्ट प्रोब एकै समयमा प्राइमरहरूको जोडीको रूपमा थपिएको छ।प्रोब एक रैखिक ओलिगोन्यूक्लियोटाइड हो, जसमा फ्लोरोसेन्ट रिपोर्टर समूह र फ्लोरोसेन्ट क्वेन्चर समूह क्रमशः दुबै छेउमा लेबल गरिएको छ।जब प्रोब अक्षुण्ण हुन्छ, रिपोर्टर समूह द्वारा उत्सर्जित फ्लोरोसेन्ट संकेत क्वेन्चर समूह द्वारा अवशोषित हुन्छ, र पत्ता लगाउने कुनै फ्लोरोसेन्ट संकेत छैन;PCR प्रवर्द्धन (विस्तार चरणमा) को समयमा, Taq इन्जाइमको 5'-3' डाइसर गतिविधिले जाँचलाई पचाउन र घटाउनेछ, जसले गर्दा रिपोर्टर फ्लोरोसेन्ट समूह र क्वेन्चर फ्लोरोसेन्ट समूहलाई अलग गरिएको छ, जसले गर्दा फ्लोरोसेन्ट निगरानी प्रणालीले फ्लोरोसेन्ट संकेत प्राप्त गर्न सक्छ, जुन प्रत्येक पटक वास्तविक रूपमा एमएनए फ्लुरोसेन्ट हुन्छ। फ्लोरोसेन्ट संकेतहरूको संचय र PCR उत्पादनहरूको गठनको पूर्ण सिंक्रोनाइजेसनलाई आकार दिन्छ।Taqman प्रोब विधि क्लिनिकल पत्ता लगाउने सबैभन्दा सामान्य रूपमा प्रयोग गरिएको पत्ता लगाउने विधि हो।

सम्बन्धित उत्पादनहरू: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/

w4

qPCR का फाइदाहरू
1.विधि परिपक्व छ र समर्थन उपकरण र अभिकर्मकहरू पूर्ण छन्
2.अभिकर्मकहरूको मध्यम लागत
3.प्रयोग गर्न सजिलो
4.उच्च पत्ता लगाउने संवेदनशीलता र विशिष्टता
 
qPCR को बेफाइदाहरू

लक्षित जीनको उत्परिवर्तनले छुटेको पत्ता लगाउन जान्छ।
कम एकाग्रता टेम्प्लेटको पत्ता लगाउने परिणाम निर्धारण गर्न सकिँदैन।
मात्रात्मक पत्ता लगाउन मानक वक्र प्रयोग गर्दा त्यहाँ ठूलो त्रुटि छ।
 
3. डिजिटल PCR (डिजिटल PCR, dPCR) प्रविधि
डिजिटल पीसीआर न्यूक्लिक एसिड अणुहरूको पूर्ण परिमाणीकरणको लागि एक प्रविधि हो।qPCR सँग तुलना गर्दा, डिजिटल PCR ले DNA/RNA अणुहरूको संख्या सिधै पढ्न सक्छ, जुन प्रारम्भिक नमूनामा न्यूक्लिक एसिड अणुहरूको पूर्ण मात्रा हो।1999 मा, बर्ट भोगेल्स्टाइन र केनेथ डब्ल्यू किन-ज्लरले औपचारिक रूपमा dPCR को अवधारणा प्रस्ताव गरे।
 
2006 मा, Fluidigm व्यावसायिक चिप-आधारित dPCR उपकरण उत्पादन गर्ने पहिलो थियो।2009 मा, Life Technologies ले OpenArray र QuantStudio 12K Flex dPCR प्रणालीहरू सुरु गर्यो।2013 मा, Life Technologies ले QuantStudio 3DdPCR प्रणाली सुरु गर्‍यो, जसले 20,000 व्यक्तिगत कक्षहरूमा नमूनाहरू समान रूपमा वितरण गर्न उच्च-घनत्व नानोस्केल माइक्रोफ्लुइडिक चिप प्रविधि प्रयोग गर्दछ।राम्रो प्रतिक्रिया मा।

w5

2011 मा, Bio-Rad ले ड्रपलेट-आधारित QX100 dPCR उपकरण सुरु गर्‍यो, जसले 20,000 थोपा-वाटर-इन-तेलमा नमूना वितरण गर्न वाटर-इन-तेल प्रविधि प्रयोग गर्दछ, र थोपाहरू विश्लेषण गर्न ड्रपलेट विश्लेषक प्रयोग गर्दछ।2012 मा, RainDance ले प्रत्येक मानक प्रतिक्रिया प्रणालीलाई 1 मिलियन देखि 10 मिलियन पिकोलिटर-स्तर माइक्रो-थोपाहरू भएको प्रतिक्रिया इमल्शनमा विभाजन गर्न उच्च-दबाव ग्यासद्वारा संचालित RainDrop dPCR उपकरण सुरु गर्‍यो।

w6

हालसम्म, डिजिटल पीसीआरले चिप प्रकार र ड्रपलेट प्रकार गरी दुई प्रमुख समूहहरू गठन गरेको छ।जुनसुकै किसिमको डिजिटल पीसीआर होस्, यसको मूल सिद्धान्तले कमजोरी, अन्तिम बिन्दु पीसीआर र पोइसन वितरणलाई सीमित गर्दछ।न्यूक्लिक एसिड टेम्प्लेटहरू भएको मानक PCR प्रतिक्रिया प्रणालीलाई दसौं हजार PCR प्रतिक्रियाहरूमा समान रूपमा विभाजित गरिएको छ, जुन चिप्स वा माइक्रोड्रोप्लेटहरूमा वितरित गरिन्छ, ताकि प्रत्येक प्रतिक्रियामा सम्भव भएसम्म टेम्प्लेट अणु समावेश हुन्छ, र एकल-अणु टेम्प्लेट PCR प्रतिक्रिया गरिन्छ।प्रतिदीप्ति पढेर संकेतको उपस्थिति वा अनुपस्थिति गणना गरिन्छ, र पूर्ण परिमाणीकरण सांख्यिकीय पोइसन वितरणको अंशांकन पछि गरिन्छ।

मैले प्रयोग गरेको धेरै डिजिटल PCR प्लेटफर्महरूका विशेषताहरू निम्न छन्:

1. Bio-Rad QX200 droplet डिजिटल PCR Bio-RadQX200 एक धेरै क्लासिक डिजिटल PCR प्लेटफर्म हो, आधारभूत पत्ता लगाउने प्रक्रिया: 20,000 नमूनाहरू ड्रप जेनेरेटरद्वारा उत्पन्न गरिन्छ पानी-इन-तेल माइक्रो-थोपाहरू एक साधारण PCR मेसिनमा एम्प्लीफाइड हुन्छन्, र अन्तमा प्रत्येक माइक्रो-थोपाको फ्लोरोसेन्स सिग्नल माइक्रो-ड्रपलेट रिडरद्वारा पढिन्छ।सञ्चालन अधिक जटिल छ, र प्रदूषण को जोखिम मध्यम छ।

w7

Xinyi TD1 माइक्रो ड्रपलेट डिजिटल पीसीआरXinyi TD1 एक घरेलू डिजिटल PCR प्लेटफर्म हो, आधारभूत पत्ता लगाउने प्रक्रिया: थोपा जेनेरेटर मार्फत 30,000-50,000 वाटर-इन-तेल थोपाहरू उत्पन्न गर्नुहोस्, एक साझा PCR उपकरणमा एम्प्लीफाइ गर्नुहोस्, र अन्तमा ड्रपलेट रिडरले प्रत्येक थोपाको फ्लोरोसेन्ट संकेत पढ्छ।यस प्लेटफर्ममा ड्रपलेट उत्पादन र पढाइ दुवै एक समर्पित चिप मा प्रदूषण को कम जोखिम संग प्रदर्शन गरिन्छ।

w8

 STILLA Naica माइक्रो ड्रपलेट चिप डिजिटल पीसीआरSTILLA Naica एक अपेक्षाकृत नयाँ डिजिटल PCR प्लेटफर्म हो।आधारभूत पत्ता लगाउने प्रक्रिया हो: चिपमा प्रतिक्रिया समाधान थप्नुहोस्, चिपलाई माइक्रो-थोपा उत्पादन र प्रवर्धन प्रणालीमा राख्नुहोस्, र 30,000 माइक्रो-थोपाहरू उत्पन्न गर्नुहोस्।चिपमा फैलियो, र PCR प्रवर्धन चिपमा पूरा भयो।त्यसपछि एम्प्लीफाइड चिपलाई माइक्रो-ड्रपलेट रिडिङ एनालिसिस सिस्टममा ट्रान्सफर गरिन्छ र फ्लोरोसेन्ट सिग्नललाई फोटो खिचेर पढिन्छ।सम्पूर्ण प्रक्रिया बन्द चिपमा हुने भएकोले, प्रदूषणको जोखिम कम छ।

w9

4. ThermoFisher QuantStudio 3D चिप डिजिटल PCR

ThermoFisher QuantStudio 3D अर्को क्लासिक चिप-आधारित डिजिटल PCR प्लेटफर्म हो।यसको आधारभूत पत्ता लगाउने प्रक्रिया हो: स्प्रेडरमा प्रतिक्रिया समाधान थप्नुहोस्, र स्प्रेडर मार्फत 20,000 माइक्रोवेल्सको साथ चिपमा समान रूपमा प्रतिक्रिया समाधान फैलाउनुहोस्।, प्रवर्द्धन गर्न PCR मेसिनमा चिप राख्नुहोस्, र अन्तमा रिडरमा चिप राख्नुहोस् र फ्लोरोसेन्ट संकेत पढ्न फोटो खिच्नुहोस्।अपरेशन अपेक्षाकृत जटिल छ, र सम्पूर्ण प्रक्रिया बन्द चिप मा गरिन्छ, र प्रदूषण को जोखिम कम छ।

w10

5. JN MEDSYS स्पष्टता चिप डिजिटल पीसीआर

JN MEDSYS स्पष्टता एक अपेक्षाकृत नयाँ चिप-प्रकार डिजिटल PCR प्लेटफर्म हो।यसको आधारभूत पत्ता लगाउने प्रक्रिया हो: एप्लिकेटरमा प्रतिक्रिया समाधान थप्नुहोस्, र एप्लिकेटर मार्फत PCR ट्यूबमा निश्चित 10,000 PCR ट्यूबहरूमा प्रतिक्रिया समाधान समान रूपमा फैलाउनुहोस्।माइक्रोपोरस चिपमा, प्रतिक्रिया समाधान केशिका कार्य मार्फत चिपमा प्रवेश गर्दछ, र चिप सहितको पीसीआर ट्यूबलाई प्रवर्द्धनका लागि पीसीआर मेसिनमा राखिन्छ, र अन्तमा फोटो खिच्दै फ्लोरोसेन्ट संकेत पढ्नको लागि चिपलाई रिडरमा राखिन्छ।अपरेशन थप जटिल छ।प्रदूषणको जोखिम कम छ।

w11

प्रत्येक डिजिटल PCR प्लेटफर्मको प्यारामिटरहरू निम्नानुसार संक्षेप गरिएका छन्:

w12

डिजिटल PCR प्लेटफर्मको मूल्याङ्कन सूचकहरू हुन्: विभाजित एकाइहरूको संख्या, फ्लोरोसेन्ट च्यानलहरूको संख्या, सञ्चालनको जटिलता र प्रदूषणको जोखिम।तर सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण कुरा पत्ता लगाउने शुद्धता हो।डिजिटल PCR प्लेटफर्महरू मूल्याङ्कन गर्ने एउटा तरिका एकअर्कालाई प्रमाणित गर्न बहु ​​डिजिटल PCR प्लेटफर्महरू प्रयोग गर्नु हो, र अर्को तरिका सही मानहरूसँग मानक पदार्थहरू प्रयोग गर्नु हो।

dPCR का फाइदाहरू
1.पूर्ण परिमाण प्राप्त गर्दै
2.उच्च संवेदनशीलता र विशिष्टता
3.कम प्रतिलिपि नमूनाहरू पत्ता लगाउन सक्छ
dPCR का बेफाइदाहरू1. महँगो उपकरण र अभिकर्मकहरू 2. जटिल सञ्चालन र लामो पत्ता लगाउने समय 3. ​​संकीर्ण पत्ता लगाउने दायरा

हाल, PCR प्रविधिको तीन पुस्ताको आफ्नै फाइदा र बेफाइदाहरू छन्, र प्रत्येकको आफ्नै अनुप्रयोग क्षेत्रहरू छन्, र यो कुनै सम्बन्ध होइन कि एक पुस्ताले अर्कोलाई प्रतिस्थापन गर्छ।टेक्नोलोजीको निरन्तर प्रगतिले PCR प्रविधिमा नयाँ जीवन्तता इन्जेक्ट गरेको छ, यसले एक पछि अर्को अनुप्रयोग दिशा अनलक गर्न सक्षम पारेको छ, न्यूक्लिक एसिड पत्ता लगाउन थप सुविधाजनक र सटीक बनाउँदै।
स्रोत: डा. युआन तपाईंलाई परीक्षणको लागि लैजान्छ
 
सिफारिस गरिएका उत्पादनहरू:


पोस्ट समय: नोभेम्बर-18-2022